本文關(guān)鍵詞：2型糖尿病患者血清Klotho蛋白水平變化與視網(wǎng)膜病變的關(guān)系及機(jī)制研究　出處：《重慶醫(yī)科大學(xué)》2017年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：第一部分2型糖尿病患者血清Klotho蛋白水平變化與視網(wǎng)膜病變及氧化應(yīng)激指標(biāo)之間的相關(guān)性目的:觀察2型糖尿病患者血清Klotho(KL)蛋白水平變化及與視網(wǎng)膜病變(DR)、氧化應(yīng)激指標(biāo)之間的相關(guān)性。方法:選取17例健康者(NC組)與60例2型糖尿病患者(DM組)作為研究對(duì)象,對(duì)DM組患者行熒光素眼底血管造影檢查,根據(jù)有無(wú)合并視網(wǎng)膜病變以及病變的嚴(yán)重程度,分為不合并視網(wǎng)膜病變的糖尿病組(NDR組)、非增殖期糖尿病視網(wǎng)膜病變組(NPDR組)及增殖期糖尿病視網(wǎng)膜病變組(PDR組)。收集研究者的人體測(cè)量學(xué)及生化指標(biāo),計(jì)算身體質(zhì)量指數(shù)(BMI)。留取靜脈血分離血清標(biāo)本,利用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法(ELISA)測(cè)定血清KL蛋白水平,硫代巴比妥酸法測(cè)定血清丙二醛(MDA)含量,黃嘌呤氧化酶法測(cè)定血清超氧化物歧化酶(SOD)活性。比較各組間血清KL蛋白變化,分析KL蛋白與DR及SOD、MDA之間的相關(guān)性。結(jié)果:(1)各組間血清KL蛋白水平比較:與NC組相比,血清KL蛋白水平在DM組明顯降低。亞組分析結(jié)果顯示,血清KL蛋白水平在NDR、NPDR及PDR三組間呈逐漸降低趨勢(shì),組間比較具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。(2)血清KL蛋白與DR相關(guān)性分析:Spearman分析顯示,血清KL蛋白與DR之間呈顯著負(fù)相關(guān)。Logistic回歸分析發(fā)現(xiàn),KL蛋白水平降低是DR的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。(3)各組間氧化應(yīng)激指標(biāo)比較:與NC組相比,血清SOD活力在DM組顯著下降,而MDA含量顯著升高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。在NDR、NPDR及PDR亞組中,SOD活力逐漸降低,MDA含量逐漸升高,組間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。(4)血清KL蛋白與SOD、MDA之間相關(guān)性分析:在糖尿病人群中,Spearman分析顯示,血清KL蛋白與SOD活力呈顯著正相關(guān),而與MDA呈顯著負(fù)相關(guān)。進(jìn)一步行多元線性逐步回歸分析,結(jié)果顯示,血清KL蛋白水平與SOD之間呈獨(dú)立正相關(guān)關(guān)系。結(jié)論:KL蛋白在糖尿病患者血清中表達(dá)水平顯著降低,且隨視網(wǎng)膜病變程度的加重呈逐漸降低趨勢(shì),是DR的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。糖尿病患者體內(nèi)氧化能力增強(qiáng),抗氧化能力減弱,血清KL蛋白水平與SOD之間密切相關(guān)。第二部分Klotho蛋白對(duì)棕櫚酸誘導(dǎo)的人視網(wǎng)膜內(nèi)皮細(xì)胞凋亡及活性氧產(chǎn)生的影響及機(jī)制探究目的:體外給予重組Klotho(KL)蛋白干預(yù),觀察KL蛋白對(duì)棕櫚酸(PA)誘導(dǎo)的人視網(wǎng)膜內(nèi)皮細(xì)胞(HRECs)凋亡和活性氧(ROS)產(chǎn)生的影響,并進(jìn)行機(jī)制探究。方法:體外利用葡萄糖濃度為15 mmol/L的培養(yǎng)基為背景,模擬糖尿病狀態(tài)下的高糖環(huán)境,培養(yǎng)HRECs細(xì)胞,然后將細(xì)胞隨機(jī)分為對(duì)照(Ctr)組、PA組、PA+KL組及PA+KL+LY294002組,干預(yù)24小時(shí)后收集細(xì)胞,采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡率,提取蛋白行W檢測(cè)凋亡相關(guān)指標(biāo)Bax、Bcl-2及Cleaved-caspase 3的蛋白表達(dá)水平,DCFH-DA(2’7’-dichlorofluorescein diacetate)法檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)ROS水平。結(jié)果:與Ctr組相比,流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)結(jié)果顯示,PA組細(xì)胞凋亡率顯著增高(P0.05)。Western blot數(shù)據(jù)示PA組抗凋亡蛋白Bcl-2表達(dá)減少,促凋亡蛋白Bax、Cleaved-caspase 3表達(dá)升高,Bcl-2/Bax比值下降(P0.05)。另外,DCFH-DA熒光染色示PA組細(xì)胞內(nèi)ROS水平升高。以上數(shù)據(jù)提示PA能夠成功誘導(dǎo)HRECs細(xì)胞凋亡及ROS產(chǎn)生。給予KL蛋白處理后,結(jié)果顯示PA誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡率顯著下降,Bcl-2表達(dá)上調(diào),Bax及Cleaved-caspase 3表達(dá)下調(diào),Bcl-2/Bax比值升高(P0.05),同時(shí)細(xì)胞內(nèi)ROS水平減弱。提示KL蛋白能夠?qū)筆A對(duì)細(xì)胞的損害作用。此外結(jié)果顯示,PA干預(yù)后細(xì)胞p-Akt蛋白表達(dá)水平顯著下降(P0.05),而給予KL蛋白處理后p-Akt蛋白表達(dá)水平顯著恢復(fù)(P0.05)。隨后給予PI3K/Akt信號(hào)通路抑制劑LY294002處理,結(jié)果示KL蛋白對(duì)PA誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡及ROS產(chǎn)生的抑制作用明顯減弱,提示KL蛋白能夠通過(guò)激活PI3K/Akt信號(hào)通路發(fā)揮細(xì)胞保護(hù)作用。結(jié)論:KL蛋白能夠明顯抑制PA誘導(dǎo)的HRECs細(xì)胞凋亡及ROS產(chǎn)生,且該抑制作用可能是通過(guò)激活PI3K/Akt信號(hào)通路實(shí)現(xiàn)的。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R587.2;R774.1

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本文編號(hào)：1355114