本文關(guān)鍵詞：消脂益肝方防治高脂飲食誘導(dǎo)的大鼠非酒精性脂肪性肝病的機(jī)制研究　出處：《湖北中醫(yī)藥大學(xué)》2017年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

  更多相關(guān)文章： 非酒精性脂肪性肝病 消脂益肝方 從脾論治 腸源性內(nèi)毒素血癥 腸粘膜屏障

【摘要】：目的:本研究基于現(xiàn)代醫(yī)學(xué)“腸-肝軸”學(xué)說(shuō)和中醫(yī)“肝脾相關(guān)”理論,在前期臨床研究和實(shí)驗(yàn)研究的基礎(chǔ)上,探討具有健脾化濁功效的消脂益肝方對(duì)高脂飲食誘導(dǎo)的模型大鼠非酒精性脂肪性肝病(Nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD)的防治作用,從該方對(duì)“代謝性炎癥”與腸道粘膜微生態(tài)屏障的影響角度探討其從脾論治NAFLD的作用機(jī)制。方法:1.理論部分:回顧了近年來(lái)腸道微生態(tài)環(huán)境紊亂與NAFLD的相關(guān)研究進(jìn)展,深入分析了中醫(yī)脾和腸道微生態(tài)之間的相關(guān)性,并結(jié)合導(dǎo)師從脾論治慢性肝病的學(xué)術(shù)思想,從病因病機(jī)角度總結(jié)、提出了“從脾論治”防治NAFLD的思路。2.實(shí)驗(yàn)部分:無(wú)特定病原體級(jí)(Specific pathogen free,SPF)雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠40只,隨機(jī)分為4組,其中空白對(duì)照組、中藥干預(yù)組(消脂益肝方組)、益生菌干預(yù)組每組各8只,模型對(duì)照組16只。空白對(duì)照組以標(biāo)準(zhǔn)飼料飼養(yǎng),其余3組大鼠均采用高脂飼料飼養(yǎng),模型對(duì)照組每4周隨機(jī)選取2只大鼠處死以動(dòng)態(tài)評(píng)估模型的復(fù)制情況,實(shí)驗(yàn)歷時(shí)16周復(fù)制出NAFLD模型。于造模第5周,中藥組以消脂益肝方12.5g·kg-1d-1的劑量灌胃給藥,益生菌組給予雙歧桿菌乳桿菌三聯(lián)活菌片(商品名:金雙歧)0.7g·kg-1d-1的劑量灌胃給藥,空白對(duì)照組和模型對(duì)照組予以等體積的0.9%氯化鈉溶液灌胃,每周測(cè)量1次體重,根據(jù)體重變化調(diào)整灌胃劑量,共給藥干預(yù)12周。于末次給藥24h后處死全部大鼠,采集血液和肝臟、回腸組織及粘液、收集結(jié)腸內(nèi)糞便樣本。采用生化分析法檢測(cè)血清中丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(alanine aminotransferase,ALT)?天門(mén)冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(aspartate aminotransferase,AST)的水平和肝臟組織勻漿中甘油三脂(triglyceride,TG)、游離脂肪酸(free fatty acid,FFA)的含量。采用蘇木精伊紅染色法(hematoxylin eosin staining,HE)判定肝組織NAFLD活動(dòng)度積分(NAFLD activity score,NAS);采用油紅O染色觀察肝臟脂質(zhì)沉積情況;采用Masson染色觀察大鼠肝臟肝纖維化的情況。分別通過(guò)光學(xué)顯微鏡和電子顯微鏡對(duì)各組大鼠回腸粘膜組織進(jìn)行普通病理學(xué)和超微病理學(xué)觀察。采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(enzymelinkedimmunosorbentassay,elisa)檢測(cè)大鼠血清中tnf-α(tumornecrosisfactor-α)、il-1β(inteleukin-1β)水平。采用鱟試劑顯色基質(zhì)法測(cè)定大鼠門(mén)靜脈血漿脂多糖(lipopolysaccharide,lps)的含量。采用westernblot(免疫印跡試驗(yàn))法檢測(cè)大鼠回腸組織中tlr4、nf-κbp65蛋白的表達(dá)。采用real-timepcr(sybrgreen)絕對(duì)定量法檢測(cè)分析結(jié)腸糞便中4種目標(biāo)菌群的含量。免疫組織化學(xué)染色法檢測(cè)大鼠回腸組織中occludin、zo-1蛋白的表達(dá)。采用elisa法測(cè)定腸道粘液中siga的含量。結(jié)果:1.各組動(dòng)物體重和肝指數(shù)的比較。試驗(yàn)第16周,與空白對(duì)照組比較,模型對(duì)照組大鼠體重和肝指數(shù)顯著升高。而經(jīng)消脂益肝方干預(yù)后,大鼠體重和肝指數(shù)均顯著下降。2.各組大鼠血清、肝臟勻漿生化指標(biāo)的比較。與空白對(duì)照組比較,模型對(duì)照組大鼠血清ast?alt的水平顯著升高,而以ast升高更為顯著;肝臟勻漿組織中tg、ffa的含量亦升高。而經(jīng)消脂益肝方和益生菌干預(yù)后,大鼠血清中ast?alt和肝臟勻漿中tg、ffa的水平均顯著下降。3.各組大鼠肝臟病理形態(tài)學(xué)改變。與空白對(duì)照組比較,模型對(duì)照組大鼠肝臟nas積分顯著升高,而經(jīng)消脂益肝方干預(yù)后,nas積分顯著下降。油紅o染色顯示模型對(duì)照組肝組織中紅色脂滴顯著增多,融合成片狀;消脂益肝方干預(yù)組大鼠肝細(xì)胞脂滴數(shù)量明顯減少,較稀疏。肝組織masson染色顯示模型對(duì)照組膠原纖維染色明顯增多,部分標(biāo)本有纖維間隔形成;而消脂益肝方干預(yù)組膠原纖維組織著色明顯減少。4.消脂益肝方對(duì)nafld模型大鼠代謝性炎癥指標(biāo)的影響。與空白對(duì)照組比較,模型對(duì)照組大鼠門(mén)靜脈血漿lps含量和血清il-1β、tnf-α水平顯著升高;而消脂益肝方干預(yù)可明顯降低血漿lps含量和血清il-1β、tnf-α的水平顯著下降。5.消脂益肝方對(duì)nafld模型大鼠腸粘膜微生態(tài)屏障的影響。試驗(yàn)主要從腸粘膜生物屏障、機(jī)械屏障、免疫屏障3個(gè)角度研究。結(jié)果顯示:(1)與空白對(duì)照組比較,模型對(duì)照組大鼠糞便樣本中大腸桿菌和陰溝腸桿菌的數(shù)量增高,而雙歧桿菌和乳酸桿菌數(shù)量呈下降趨勢(shì);經(jīng)消脂益肝方干預(yù)后大鼠腸道中大腸桿菌和陰溝腸桿菌數(shù)量呈下降趨勢(shì),而雙歧桿菌和乳酸桿菌數(shù)量呈上升趨勢(shì)。(2)與空白對(duì)照組比較,Occludin、ZO-1蛋白的表達(dá)在模型對(duì)照組大鼠腸粘膜顯著下調(diào);經(jīng)消脂益肝方干預(yù)后Occludin、ZO-1蛋白的表達(dá)有所上調(diào)。此外,通過(guò)透射電鏡觀察到模型對(duì)照組大鼠回腸緊密連接縮短,橋粒結(jié)構(gòu)疏松,線粒體水腫、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴(kuò)張,經(jīng)脂益肝方干預(yù)后大鼠回腸緊密連接的形態(tài)和完整性均得到一定的改善。(3)與空白對(duì)照組比較,模型對(duì)照組大鼠回腸TLR4、NF-κBp65蛋白表達(dá)顯著上調(diào);經(jīng)消脂益肝方干預(yù)后,而TLR4、NF-κBp65的表達(dá)水平呈下調(diào)趨勢(shì)。與空白對(duì)照組比較,模型對(duì)照組大鼠腸道粘液中SIgA的含量顯著下降,經(jīng)消脂益肝方干預(yù)組大鼠腸道粘液中SIgA的含量升高。結(jié)論:基于“從脾論治”立法的消脂益肝方在保肝降酶(AST、ALT),改善肝臟脂質(zhì)代謝(TG、FFA)方面具有良好作用。同時(shí),該方能夠顯著改善肝組織的病理變化,減輕肝臟細(xì)胞的損傷。其防治NAFLD的可能機(jī)制:消脂益肝方可能通過(guò)修復(fù)NAFLD模型大鼠紊亂的腸道微生態(tài)屏障,從而降低NAFLD模型大鼠門(mén)靜脈血漿LPS水平和血清炎癥因子IL-1β、TNF-α水平,抑制LPS/TLR4途徑減輕代謝性炎癥所致的繼發(fā)性肝損傷。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：湖北中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R285.5

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 ;某些因素對(duì)大鼠胃肌電的影響[J];基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床;2001年S1期

2 陳同度,張昌穎;素食大鼠的貧血現(xiàn)象[J];營(yíng)養(yǎng)學(xué)報(bào);1957年04期

3 陳偉強(qiáng);趙善廣;;自制注射用大鼠固定裝置[J];上海實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué);1992年04期

4 肖柳英,林培英,馮昭明,張丹;不同周齡的SD大鼠生理、生化及體重的正常值測(cè)定[J];中藥新藥與臨床藥理;1996年03期

5 李淑云;簡(jiǎn)易大鼠灌胃器的制作[J];錦州醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2001年04期

6 楊明智,陳積圣;一種大鼠抓取與固定的新工具介紹[J];上海實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué);2001年03期

7 戴英,陸群;復(fù)方H_(505)對(duì)Wistar大鼠外周血的血液流變學(xué)指標(biāo)的影響[J];中國(guó)血液流變學(xué)雜志;2001年01期

8 韋應(yīng)波,孫喜慶,曹新生,姚永杰,馮岱雅,楊長(zhǎng)斌;+Gz暴露時(shí)間對(duì)大鼠記憶功能和行為的影響[J];航天醫(yī)學(xué)與醫(yī)學(xué)工程;2003年01期

9 呂學(xué)軍,郭俊生,李敏,周利梅,張永娟;暈船大鼠體內(nèi)鐵含量的變化[J];中國(guó)職業(yè)醫(yī)學(xué);2003年04期

10 湯仁仙,王迎偉,王慧,周峰;201A中藥合劑對(duì)大鼠抗腎小球基底膜腎炎病變的影響[J];徐州醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2003年06期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 尹音;孫振宇;胡敏;李冬霞;;持續(xù)性高正加速度對(duì)大鼠顳頜關(guān)節(jié)損傷的作用[A];第八屆全國(guó)顳下頜關(guān)節(jié)病學(xué)及（牙合）學(xué)大會(huì)論文匯編[C];2011年

2 祝~=驤;iJ梊霞;洃克琴;崔素英;文允摪;，

本文編號(hào)：1352789