本文關鍵詞：黃連煎劑對代謝綜合征SD大鼠腸道菌群及GPR43通路glp-1和pyy的影響　出處：《北京中醫(yī)藥大學》2017年博士論文　論文類型：學位論文

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【摘要】：背景代謝綜合征(metabolic syndrome,MS)是以中心性肥胖為核心,同時含有糖耐量異常、高血壓病、高尿酸血癥、高甘油三脂血癥、低-高密度脂蛋白血癥等多危險因子的代謝病。近年來世界肥胖人口急劇上升。最新的研究發(fā)現(xiàn)MS相關因素都與腸道菌群相關。腸道微生物對宿主的調(diào)節(jié)主要通過其中介產(chǎn)物起作用,其在介導MS存在多種不同機制,腸道局部的神經(jīng)-內(nèi)分泌-免疫屏障是其中一個關鍵點。中藥及天然植物中的很多成分口服利用率低下,其需要經(jīng)過腸道菌群的轉(zhuǎn)化才能被宿主有效利用,且其對腸道菌群結(jié)構(gòu)有影響作用,因此腸道菌群可能是中藥發(fā)揮療效的靶點和關鍵點。黃連含有生物堿和非生物堿等多種成份,有清熱燥濕,瀉火解毒的作用,是臨床MS治療的常用藥物。諸多報道小檗堿可調(diào)控MS腸道菌群,我們的前期研究表明,含同等劑量小檗堿的黃連煎劑在糖脂調(diào)節(jié)方面優(yōu)于小檗堿。黃連煎劑與小檗堿在調(diào)控MS腸道菌群結(jié)構(gòu)是否一致,二者腸道菌群代謝產(chǎn)物對結(jié)腸GPR43通路影響是否一致尚不明確。目的觀察黃連煎劑對高脂餐誘導的代謝綜合征SD大鼠模型腸道菌群的結(jié)構(gòu)影響,通過GPR43通路探索腸道菌群對結(jié)腸glp-1和pyy的影響。方法1.造模:60只SD大鼠隨機分為2組:空白對照組(n=15),高脂模型組(n=45)。依據(jù)我們以往的造模經(jīng)驗,經(jīng)8周高脂飼料喂養(yǎng)結(jié)束后以高脂模型組體重及增長情況顯著大于空白對照組為造模成功。剔除造模中不合格大鼠3只,高脂模型組大鼠42只,繼續(xù)隨機分成:鹽酸小檗堿組(n=14),黃連煎劑組(n=14)和高脂對照組(n=14)。2.灌胃:高效液相色譜法測定黃連中鹽酸小檗堿的含量為8.3%。根據(jù)大鼠與人藥物劑量換算公式:鼠劑量(mg/kg)/人劑量(mg/kg)=(K鼠/K人)×(人體質(zhì)量/鼠體質(zhì)量)1/3,計算鹽酸小檗堿的灌胃劑量為150mg/kg;給予含有相同劑量的鹽酸小檗堿的黃連煎劑灌胃,計算得黃連煎劑量為150/8.3%= 1807mg/kg。每周按大鼠體重計算各組灌胃藥量,黃連煎劑濃煎至約200ml,將小檗堿按150mg/kg體重溶解于蒸餾水200ml中配成混懸液,其它兩組灌胃200ml的無菌水。3.指標測定:(1)全程每天測量大鼠進食量,每周測量1次大鼠體質(zhì)量。(2)生化法測定血脂和空腹血糖,放免法測定空腹胰島素,酶免法測定血清鳶尾素。(3)稱取左側(cè)附睪旁脂肪組織濕重。(4)提取大鼠腸道糞便總DNA并擴增,文庫制備,用Illumina二代高通量測序平臺對制備好的樣本進行上機測序(與深圳華大基因合作完成),在取得原始測序數(shù)據(jù)后對數(shù)據(jù)進行優(yōu)化、整理、分析。(5)典型相關分析CCA和Kendall等級相關系數(shù)分析血清指標、體重、體重增長、附睪旁脂肪濕重與腸道菌群的相關性。(6)免疫印跡法測定結(jié)腸glp-1,(7)酶免法測定結(jié)腸PYY。結(jié)果(1)灌胃后各組攝食量較灌胃前均明顯降低,高脂對照組、黃連煎劑組及小檗堿組間攝食量無顯著差異,所有高脂飼料組與普通基礎飼料組比攝食量顯著減少;小檗堿組和黃連煎劑組抑制了大鼠體重的增長,黃連煎劑組對體重增加的抑制更明顯。(2)與空白對照組比,高脂對照組的LDL-c、HDL-c有統(tǒng)計學顯著性差異;與高脂組比,小檗堿組和黃連煎劑組LDL-c、HDL-c、空腹血糖、空腹胰島素無統(tǒng)計學顯著差異;與空白對照組比,所有高脂組的血清鳶尾素顯著增加;與高脂對照組比,小檗堿組的血清鳶尾素顯著增加。(3)與空白對照組比,高脂對照組的附睪旁脂肪濕重增加有統(tǒng)計學顯著差異。所有高脂組的附睪旁脂肪濕重無統(tǒng)計學顯著差異。(4)該SD代謝綜合征大鼠模型盲腸菌群有顯著的改變,多樣性降低,條件致病菌增加,腸屏障修復菌減少,黃連煎劑組和小檗堿組幾乎逆轉(zhuǎn)了這些改變。小檗堿組對腸道菌群的改變與黃連煎劑組并不一致,小檗堿組選擇性富集丙酸產(chǎn)生菌和腸屏障修復菌阿克曼氏菌Akkermansia,而黃連煎劑在此基礎上還有更多的丁酸產(chǎn)生菌,如糞球菌屬Coprococcus,柔嫩梭菌Faecalibacterium,以及顫螺菌屬Oscillospira。與小檗堿組相比,黃連煎劑組的菌群多樣性更高,且菌群結(jié)構(gòu)更接近于空白對照組。(5)基于1149個OTUs的CCA分析顯示,HDL-c和空白對照組最相關,附睪旁脂肪、干預4周的體重增加量與高脂對照組最相關,LDL-c與黃連煎劑組最相關,空腹血糖與小檗堿組最相關�；�231個OTUs的Kendall等級相關系數(shù)分析顯示,HDL-c與這些分類單元相關性最好。(6)各組結(jié)腸組織中g(shù)lp-1無統(tǒng)計學顯著性差異,相比空白對照組,高脂對照組,小檗堿組和黃連煎劑組有增加的趨勢;相比高脂對照組,小檗堿組和黃連煎劑組有增加的趨勢。(7)各組結(jié)腸組織中僅黃連煎劑組PYY較空白對照組和高脂對照組組有統(tǒng)計學顯著性差異,小檗堿組僅有增加的趨勢;校正后各組PYY無統(tǒng)計學顯著性差異。結(jié)論(1)黃連煎劑可以逆轉(zhuǎn)高脂飲食誘導的Ms大鼠腸道菌群結(jié)構(gòu)的改變,且其潛在的機制與小檗堿不完全相同。(2)小檗堿可以顯著增加MS大鼠血清鳶尾素水平。(3)MS大鼠的基礎指標和血清標志物中,HDL-c和腸道菌群的相關性最好。(4)腸道菌群代謝產(chǎn)物對結(jié)腸glp-1和pyy的影響大體符合丙酸-GPR43-glp-1/PYY通路的調(diào)制。
[Abstract]:......
【學位授予單位】：北京中醫(yī)藥大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R285.5

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