本文關(guān)鍵詞：血漿miRNA與腰椎間盤退變的相關(guān)性及補(bǔ)腎壯督方的干預(yù)研究　出處：《廣州中醫(yī)藥大學(xué)》2017年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

  更多相關(guān)文章： 腰椎間盤退變 微小RNA 補(bǔ)腎壯督方

【摘要】：目的:1.篩選腰椎間盤退變(Lumbar intervertebral disc degeneration,LIDD)患者血漿中差異性表達(dá)的miRNA,探討差異性血漿miRNA是否在LIDD人群中具有特異性表達(dá),是否對(duì)LIDD診斷有價(jià)值。2.建立大鼠LIDD的動(dòng)物模型,進(jìn)一步驗(yàn)證差異性miRNA的表達(dá)與LIDD的關(guān)系,并檢測椎間盤中差異性miRNA靶基因介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的表達(dá)變化。3.通過補(bǔ)腎壯督方干預(yù)LIDD大鼠,探討補(bǔ)腎壯督方對(duì)差異性miRNA及其靶基因介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的表達(dá)影響,進(jìn)一步揭示補(bǔ)腎壯督方延緩LIDD的作用機(jī)制。方法:1.臨床研究①選取2015年12月一 2016年4月就診于廣州中醫(yī)藥大學(xué)第三附屬醫(yī)院脊柱科住院部及門診的3例LIDD患者作為病例組,同期選取3例年齡和性別相匹配且無LIDD的志愿者作為對(duì)照組。抽取LIDD患者和無LIDD志愿者的血漿,進(jìn)行MicroRNA芯片的篩選。②通過實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR對(duì)MicroRNA芯片篩選出差異表達(dá)明顯的miRNA進(jìn)行原位驗(yàn)證,選出與LIDD密切相關(guān)的差異表達(dá)miRNA。③收集2015年12月一 2016年8月就診于廣州中醫(yī)藥大學(xué)第三附屬醫(yī)院脊柱科住院部及門診的30例LIDD患者作為病例組,同期選取20例年齡和性別相匹配且無LIDD的志愿者作為對(duì)照組。根據(jù)原位驗(yàn)證的結(jié)果,以及文獻(xiàn)報(bào)道研究,將與LIDD密切相關(guān)的miRNA在這50例人群中進(jìn)行擴(kuò)大樣本驗(yàn)證研究,進(jìn)一步驗(yàn)證差異miRNA表達(dá)與LIDD的特異性。并對(duì)有差異性的miRNA進(jìn)行受試者工作特征曲線(ROC曲線)分析,使用ROC曲線下面積(AUC)評(píng)估它們的診斷價(jià)值。2.實(shí)驗(yàn)研究選取60只雄性SD大鼠(3月齡),隨機(jī)分為假手術(shù)組、模型組、低劑量中藥組、中劑量中藥組和高劑量中藥組,每組各12只。假手術(shù)組:從大鼠的腹部右側(cè)旁正中切開,暴露L4到L6椎間盤后即縫合皮膚。其他組:從大鼠的腹部右側(cè)旁正中切開后,暴露L4到L6椎間盤,并采用纖維環(huán)的全層穿刺法建立大鼠LIDD模型。造模第2天,低劑量中藥組、中劑量中藥組和高劑量中藥組分別給予低劑量、中劑量和高劑量的補(bǔ)腎壯督方水煎液灌胃,假手術(shù)組和模型組則分別予等容積的生理鹽水灌胃。8周后,取大鼠的血漿和L4到L6的椎間盤。用HE染色觀察各組椎間盤的退變情況,并根據(jù)其退變程度進(jìn)行病理評(píng)分,通過實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR檢測血漿和腰椎間盤中的特異性miRNA的表達(dá),采用蛋白質(zhì)印跡法和實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR分析腰椎間盤中特異性miRNA靶基因及其介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路表達(dá)變化。結(jié)果:1.臨床研究①miRNA芯片篩選出LIDD人群中存在23個(gè)差異表達(dá)的miRNA,其中7個(gè)miRNA表達(dá)下調(diào),16個(gè)miRNA表達(dá)上調(diào)。②根據(jù)MicroRNA芯片結(jié)果,對(duì)17個(gè)差異表達(dá)穩(wěn)定的miRNA進(jìn)行了原位驗(yàn)證,只有miRNA-4763-3p和miRNA-4767的下調(diào)表達(dá)差異顯著,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。③結(jié)合文獻(xiàn)報(bào)道研究,將miRNA-4763-3p、miRNA-4767和miRNA-125a-5p進(jìn)行了擴(kuò)大樣本驗(yàn)證研究。miRNA-4767和miRNA-125a-5p的表達(dá)顯著下調(diào),具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),miRNA-4763-3p的表達(dá)下調(diào)則不明顯,無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。④ROC曲線分析顯示,miRNA-4767和miRNA-125a-5p是對(duì)LIDD診斷有價(jià)值的生物標(biāo)記物(P0.05)。其中 miRNA-4767 AUC值為 0.735,95%置信區(qū)間 CI 為:0.591-0.850;miRNA-125a-5p 的 AUC 值為 0.863,95%置信區(qū)間 CI 為:0.759-0.967。2.實(shí)驗(yàn)研究①各組腰椎間盤HE染色的形態(tài)學(xué)改變與假手術(shù)組比較,模型組的腰椎間盤發(fā)生了明顯的退變,組織退變?cè)u(píng)分顯著升高,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);與模型組相比,低劑量、中劑量、高劑量中藥組的腰椎間盤退變均出現(xiàn)了明顯改善,組織學(xué)退變的評(píng)分均顯著降低,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);補(bǔ)腎壯督方三個(gè)中藥組之間的組織學(xué)退變?cè)u(píng)分比較亦有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。②各組血漿中miRNA-125a-5p的表達(dá)變化與假手術(shù)組比較,模型組血漿中miRNA-125a-5p的表達(dá)降低,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05);與模型組相比,低、中、高劑量中藥組血漿中miRNA-125a-5p的表達(dá)明顯升高,有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05);補(bǔ)腎壯督方的三個(gè)中藥組血漿中miRNA-125a-5p之間的表達(dá)比較亦有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。③各組腰椎間盤組織中miRNA-125a-5p的表達(dá)變化與假手術(shù)組比較,模型組椎間盤組織中的miRNA-125a-5p表達(dá)明顯降低,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05);與模型組相比,低、中、高劑量中藥組椎間盤組織中的miRNA-125a-5p表達(dá)則明顯升高,有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05);補(bǔ)腎壯督方的三個(gè)中藥組椎間盤組織中的miRNA-125a-5p表達(dá)之間比較亦有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。④各組miRNA-125a-5p靶基因TP53INP1及p21、Caspase-3的基因表達(dá)變化與假手術(shù)組比較,模型組的TP53INP1、p21和caspase-3基因表達(dá)都明顯升高,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05);與模型組相比,低、中、高劑量中藥組的TP53INP1、p21和caspase-3基因表達(dá)都明顯降低,有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05);補(bǔ)腎壯督方的三個(gè)中藥組之間比較亦有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。⑤各組miRNA-125a-5p靶基因TP53INP1及p21、活化的Caspase-3的蛋白表達(dá)變化與假手術(shù)組比較,模型組的TP53INP1、p21和活化的Caspase-3(Active Caspase-3)蛋白表達(dá)都明顯升高,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05);與模型組相比,低、中、高劑量中藥組的TP53INP1、p21和caspase-3的基因表達(dá)都明顯減低,有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05);補(bǔ)腎壯督方的三個(gè)中藥組之間比較亦有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。結(jié)論:1.腰椎間盤退變患者外周循環(huán)血漿中存在差異表達(dá)的miRNA,血漿miRNA-4767和miRNA-125a-5p在LIDD患者中的表達(dá)顯著降低。2.血漿miRNA-4767和miRNA-125a-5p對(duì)LIDD的診斷具有較好的診斷效能,有望成為腰椎間盤退變精準(zhǔn)診斷的新型生物標(biāo)志物。3.補(bǔ)腎壯督方能夠有效的延緩大鼠腰椎間盤退變的病理改變,降低椎間盤退變的病理評(píng)分,并且療效具有一定的劑量依賴性。4.miRNA-125a-5p在腰椎間盤退變的大鼠血漿及退變的椎間盤組織中表達(dá)明顯降低,而在其靶基因TP53INP1及p21、Caspase-3的表達(dá)則明顯升高。這表明在LIDD的過程中miRNA-125a-5p及其靶基因TP53INP1介導(dǎo)的通路被激活,miRNA-125a-5p是腰椎間盤退變的一個(gè)潛在治療靶點(diǎn)。5.補(bǔ)腎壯督方能夠上調(diào)大鼠退變的椎間盤組織及血漿中miRNA-125a-5p的表達(dá),并且下調(diào)其 TP53INP1、p21、Caspase-3 的基因及 TP53INP1、p21、活化的 Caspase-3的蛋白表達(dá)。其延緩椎間盤退變的作用機(jī)理與調(diào)控miRNA-125a-5p及其靶基因TP53INP1介導(dǎo)的通路活性變化有關(guān),并且作用效果具有一定的劑量依賴性。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：廣州中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R274.9

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 劉午龍;陳少清;林建平;陳水金;夏夢(mèng);王詩忠;;電針“委中”對(duì)腰椎間盤退變模型大鼠椎間盤組織Fas和FasL表達(dá)的影響[J];中國中醫(yī)藥信息雜志;2017年01期

2 凌人男;龔靜山;馬捷;;腰椎間盤退變的MRI早期診斷和定量評(píng)價(jià)的研究進(jìn)展[J];醫(yī)學(xué)影像學(xué)雜志;2016年10期

3 陳金鳳;舒新農(nóng);唐樹杰;吳英;張玉佩;;腰椎退變對(duì)坐位腰椎定點(diǎn)旋轉(zhuǎn)手法療效影響的有限元分析（英文）[J];Journal of Acupuncture and Tuina Science;2016年04期

4 林一峰;張震;劉海全;原超;唐漢武;宋振杰;王利仁;;補(bǔ)腎壯督方預(yù)防腰椎間盤退變的實(shí)驗(yàn)研究[J];中醫(yī)臨床研究;2016年13期

5 孫欽然;張麗瑾;朱中書;劉玉寧;劉方銘;劉維菊;尹聰;吳丙云;宮輝;郭閆萍;張道平;吳文慶;;針刀松解頸周腧穴對(duì)大鼠退變頸椎間盤Ⅰ、Ⅱ型膠原及組織形態(tài)學(xué)的影響[J];針刺研究;2015年04期

6 陳巖;王擁軍;徐浩;丁道芳;周泉;盧盛;施杞;梁倩倩;;川芎嗪對(duì)白介素-1β誘導(dǎo)退變的椎間盤終板軟骨細(xì)胞的保護(hù)作用[J];中華中醫(yī)藥雜志;2015年05期

7 Jun Liao;Le Zhang;Jiaxuan Zheng;Debiao Yu;Meigui Ke;Teng Xu;;Electroacupuncture inhibits annulus fibrosis cell apoptosis in vivo via TNF-α-TNFR1-caspase-8 and integrin β1/Akt signaling pathways[J];Journal of Traditional Chinese Medicine;2014年06期

8 程細(xì)高;賈驚宇;吳添龍;李健;張磊磊;殷明;;miR-140-5P參與調(diào)控頸椎軟骨終板退變[J];南昌大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2014年05期

9 張延松;胡偵明;郝杰;沈皆亮;;椎間盤退變基因治療進(jìn)展[J];中國矯形外科雜志;2014年07期

10 張春梅;鄧華瑜;;miRNA-155對(duì)人乳腺癌MCF-7細(xì)胞TP53INP1表達(dá)及其增殖的影響[J];中國生物制品學(xué)雜志;2013年09期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前1條

1 展嘉文;青娥方含藥血清對(duì)離體兔脊柱運(yùn)節(jié)段壓力退變模型的影響[D];中國中醫(yī)科學(xué)院;2015年

，

本文編號(hào)：1351786