本文關(guān)鍵詞：MicroRNA-210通過直接靶向PDK1誘導(dǎo)動脈粥樣硬化內(nèi)皮細胞凋亡　出處：《吉林大學(xué)》2017年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：背景:動脈粥樣硬化是一種炎癥性疾病,是導(dǎo)致心血管疾病的主要原因,因為含高飽和脂肪的飲食盛行,目前該疾病仍然是一個全球性問題。在大動脈中,致動脈粥樣化的脂蛋白,特別是低密度脂蛋白,積累逐漸形成動脈粥樣硬化斑塊,與動脈粥樣硬化疾病的發(fā)病密切相關(guān)。載脂蛋白E(Apo E)是一種34k Da的分泌蛋白,已被證明具有抗動脈粥樣硬化活性:它直接作用于動脈中豐富的脂蛋白,能夠有效地去除它們。Apo E(-/-)小鼠的研究證實了Apo E在保護動脈粥樣硬化中的關(guān)鍵作用。Apo E(-/-)小鼠喂食高脂肪飲食(HFD)顯示高脂質(zhì)水平,高膽固醇水平以及動脈粥樣硬化癥狀,使其成為研究動脈粥樣硬化的公認模型。內(nèi)皮作為調(diào)節(jié)血管系統(tǒng)的有效介質(zhì),在止血,調(diào)節(jié)膽固醇,激素運輸,信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和炎癥等過程中發(fā)揮作用。證據(jù)表明內(nèi)皮功能障礙與各種血管疾病,包括糖尿病,動脈血栓形成和高膽固醇血癥相關(guān)。內(nèi)皮細胞凋亡和死亡可以破壞斑塊的結(jié)構(gòu),并導(dǎo)致局部脂質(zhì)的沉積,并最終形成動脈粥樣硬化。預(yù)防內(nèi)皮細胞凋亡已經(jīng)作為治療動脈粥樣硬化的新手段受到越來越多的關(guān)注。微小RNA(mi RNA)是一類內(nèi)源性非編碼單鏈RNA,其長度為18-22個核苷酸,通過與其靶基因的的3'非翻譯區(qū)(3'-UTR)結(jié)合降解和/或翻譯抑制基因表達。越來越多的證據(jù)表明mi RNA可以是復(fù)雜人類疾病的有效治療靶點,包括腫瘤發(fā)生,淋巴細胞生成和血管生成。雖然大多數(shù)mi RNA研究仍集中在癌癥,mi RNA在心血管系統(tǒng)中的作用已經(jīng)逐漸顯現(xiàn)。動脈粥樣硬化是心血管疾病的主要危險因素。內(nèi)皮細胞功能障礙經(jīng)常引發(fā)一系列導(dǎo)致動脈粥樣硬化發(fā)展的變化。動脈粥樣硬化斑塊由泡沫細胞中的累積脂質(zhì)顆粒,增殖的血管平滑肌細胞(VSMC)和細胞外基質(zhì)組成。這些斑塊是動脈中晚期動脈粥樣硬化病變的標志。臨床前研究表明,mi RNA在動脈粥樣硬化的發(fā)病機制中起關(guān)鍵作用。最近的一項研究顯示mi R-210在動脈硬化閉塞癥患者的血清中過表達,且mi R-210在人動脈粥樣硬化斑塊中上調(diào),并且可能參與動脈粥樣硬化的過程。然而,mi R-210在動脈粥樣硬化中的調(diào)節(jié)機制仍不清楚。方法:在Apo E(-/-)小鼠中構(gòu)建具有由高脂肪飲食(HFD)誘導(dǎo)的動脈粥樣硬化的小鼠模型。通過流式細胞術(shù)及Western blot檢測CD31+內(nèi)皮細胞凋亡相關(guān)蛋白Bax,Bcl-2,caspase-9和caspase-3的表達水平來測定內(nèi)皮細胞凋亡的水平。通過RT-q PCR和western印跡測量小鼠主動脈的純化CD31+內(nèi)皮細胞中mi R-210和PDK1的表達。使用生物信息學(xué)分析預(yù)測mi R-210和PDK1 m RNA的3'非翻譯區(qū)(UTR)之間的結(jié)合,并用雙熒光素酶報告基因測定法證實。在用氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)處理的人主動脈內(nèi)皮細胞(HAEC)的體外模型中進一步分析mi R-210的促細胞凋亡的作用途徑。結(jié)果:(1)HFD小鼠在12周內(nèi)發(fā)生動脈粥樣硬化,流式細胞術(shù)測定及Western blot檢測均證實HFD組較NOR組內(nèi)皮細胞凋亡顯著升高。(2)HFD小鼠和體外細胞實驗中經(jīng)ox-LDL處理的HAEC中mi R-210的上調(diào)水平與PDK1的水平呈負相關(guān),生物信息學(xué)分析確定PDK1作為mi R-210的靶標。(3)MTT和流式細胞術(shù)實驗的結(jié)果顯示mi R-210模擬物促進ox-LDL誘導(dǎo)的HAEC凋亡,PDK1的過表達可逆轉(zhuǎn)mi R-210促凋亡的作用。(4)體外細胞實驗顯示mi R-210抑制PI3K/Akt/m TOR信號通路的激活而促進細胞凋亡發(fā)生,而這條通路可被PDK1轉(zhuǎn)染重新激活,提示mi R-210系通過靶向PDK1抑制PI3K/Akt/m TOR信號通路的激活而發(fā)揮其促進細胞凋亡作用。結(jié)論:我們的研究表明了mi R-210在動脈粥樣硬化中促進內(nèi)皮細胞凋亡,導(dǎo)致動脈粥樣硬化進展,且mi R-210是通過作用于PDK1從而抑制PI3K/Akt/m TOR信號傳導(dǎo)通路發(fā)揮促凋亡作用。這表明mi R-210可能是治療動脈粥樣硬化的潛在靶點。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R543.5

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本文編號：1349606