本文關(guān)鍵詞：紫草素對皮膚成纖維細胞增殖、凋亡的調(diào)控及抑制增生性瘢痕形成的機制研究　出處：《浙江中醫(yī)藥大學(xué)》2017年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

  更多相關(guān)文章： Shh信號通路 成纖維細胞(HSF) 紫草素(Shikonin)

【摘要】：目的通過研究Shh信號通路在人源成纖維細胞系和分離自增生性瘢痕組織的原代細胞的激活狀態(tài),特異性調(diào)控Shh信號通路對成纖維細胞增殖、遷移、周期、凋亡等生物學(xué)特性的影響,以及對一些瘢痕形成關(guān)鍵基因、凋亡關(guān)鍵基因表達的影響,闡明Shh信號通路在增生性瘢痕形成過程中的作用機制。通過研究中藥制劑紫草膏中的主要成分紫草素對成纖維細胞增殖、遷移、凋亡等生物特性的影響和一些關(guān)鍵基因的表達變化,以及聯(lián)合Shh信號通路抑制劑cyclopamine分子對人源HSF細胞增殖及關(guān)鍵基因表達的影響,進一步探討增生性瘢痕形成機制和紫草素對皮膚成纖維細胞增殖、凋亡的調(diào)控及抑制增生性瘢痕形成的作用機制,為進一步應(yīng)用開發(fā)提供基礎(chǔ)研究依據(jù)。方法1.培養(yǎng)兩種人真皮成纖維細胞,采用定量PCR法和Western-blot法檢測細胞中Shh信號通路關(guān)鍵基因Ptch-1、Smo和Gli-1等基因的表達情況。2.采用不同濃度重組人rhShh因子和cyclopamine分子刺激成纖維細胞,分別應(yīng)用MTT法檢測細胞增殖情況,侵襲小室法檢測細胞遷移能力變化、流式細胞儀檢測細胞周期和凋亡變化,RT-qPCR和Western-blot法檢測瘢痕形成相關(guān)基因VEGF和Ⅰ型膠原酶,凋亡相關(guān)基因CyclinD1和Bcl-2基因表達變化。3.采用不同濃度紫草素干預(yù)成纖維細胞,分別應(yīng)用MTT法檢測細胞增殖情況,流式細胞儀檢測細胞凋亡變化,RT-qPCR法和Western-blot檢測瘢痕形成相關(guān)基因VEGF和Ⅰ型膠原酶,Shh信號通路關(guān)鍵基因Ptch-1和Gli-1表達情況,凋亡相關(guān)基因CyclinD1和Bcl-2基因表達變化。4.使用紫草素聯(lián)合cyclopamine分子干預(yù)成纖維細胞,分別應(yīng)用MTT法檢測細胞增殖情況,侵襲小室法檢測細胞遷移能力變化、流式細胞儀檢測細胞凋亡變化,RT-qPCR法和Western-blot檢測瘢痕形成相關(guān)基因VEGF和Ⅰ型膠原酶,凋亡相關(guān)基因CyclinD1和Bcl-2基因表達變化。結(jié)果1.在兩種人源成纖維細胞中均檢測到Shh信號通路基因Ptch-1、Smo和Gli-1表達均增高,其中HHSF組表達增高更明顯。2.重組人rhShh可以促進成纖維細胞增殖,且呈濃度依賴型,當(dāng)rhShh濃度超過1μg/ml后濃度繼續(xù)增加對細胞增殖的促進作用沒有明顯加強,cyclopamine對成纖維細胞增殖呈濃度依賴性抑制,濃度超過8μM時抑制能力沒有明顯增強,同時rhShh分子可以促進成纖維細胞遷移、抑制凋亡,促進瘢痕形成相關(guān)基因VEGF和Ⅰ型膠原酶、凋亡相關(guān)基因CyclinDl和Bcl-2高表達,cyclopamine作用與rhShh相反。3.紫草素對成纖維細胞的增殖能力有較強的抑制作用,當(dāng)紫草素濃度達到5μM時,約50%左右的細胞受到抑制,濃度達到10μM時超過90%的細胞受到抑制,同時紫草素可以抑制細胞遷移,促進細胞凋亡,可以明顯下調(diào)瘢痕形成相關(guān)基因VEGF和Ⅰ型膠原酶、凋亡相關(guān)基因CyclinD1和Bcl-2的表達;紫草素對Shh信號通路基因Ptch-1和Gli-1的表達有一定的抑制作用,在HHSF組抑制作用更明顯。4.紫草素聯(lián)合Shh信號通路抑制劑cyclopamine可以增強對成纖維細胞增殖的抑制,促進細胞凋亡,VEGF、Ⅰ型膠原酶和Bcl-2等相關(guān)基因下調(diào)更加明顯。結(jié)論1.Shh信號通路在瘢痕修復(fù)過程中的成纖維細胞中呈激活狀態(tài)。2.阻斷Shh信號通路可以抑制成纖維細胞增殖,誘導(dǎo)成纖維細胞凋亡。3.紫草素可以抑制成纖維細胞過度增殖,同時下調(diào)VEGF、Ⅰ型膠原酶、cyclinD1、Bcl-2基因的表達水平。4.阻斷Shh信號通路對紫草素抑制成纖維細胞增殖和誘導(dǎo)成纖維細胞凋亡有增效作用。
【學(xué)位授予單位】：浙江中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R285

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本文編號：1336508