發(fā)布時間：2017-12-25 15:03

  本文關(guān)鍵詞：WRAP53及其相互作用蛋白在肺腺癌發(fā)生發(fā)展過程中的作用及機(jī)制研究　出處：《浙江大學(xué)》2017年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：第一部分:WRAP53高表達(dá)在肺腺癌發(fā)生發(fā)展過程中的作用及機(jī)制探討目的:通過臨床、細(xì)胞生物學(xué)及生物信息學(xué)探索P53基因WD反義重復(fù)序列(WRAP53)蛋白高表達(dá)在肺腺癌發(fā)生發(fā)展過程中的作用。方法:我們檢測了本院收集的75對腫瘤組織和對應(yīng)癌旁組織的臨床病理組織中WRAP53表達(dá)水平,然后分析了 WRAP53高表達(dá)患者的臨床特征;我們通過RNAi技術(shù)沉默了 WRAP53蛋白的表達(dá),并觀察其對肺腺癌增殖能力的影響;通過細(xì)胞周期和凋亡檢測觀察肺腺癌細(xì)胞增殖能力減弱的原因;通過細(xì)胞周期同步化獲得處于S期早期的A549細(xì)胞;通過免疫共沉淀(Co-IP)和液相色譜/質(zhì)譜法(LC/MS)得到在S期早期和WRAP53蛋白發(fā)生相互作用的蛋白。結(jié)果:熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(qRT-PCR)結(jié)果顯示W(wǎng)RAP53表達(dá)量在腫瘤組織中較癌旁組織中更高;WRAP53高表達(dá)在腫瘤大小超過3cm的患者和小于3cm的患者中存在顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p0.05),腫瘤超過3cm的患者WRAP53更有可能發(fā)生高表達(dá);WRAP53蛋白表達(dá)量下降可導(dǎo)致肺腺癌細(xì)胞增殖能力減弱,原因?yàn)榧?xì)胞G1/期周期阻滯;Co-IP聯(lián)用LC/MS發(fā)現(xiàn)S期早期A549細(xì)胞中和WRAP53發(fā)生相互作用的蛋白若干。結(jié)論:通過上述研究證實(shí)WRAP53在肺腺癌中的臨床、細(xì)胞生物學(xué)和生物信息學(xué)的意義,其互作蛋白的進(jìn)一步研究有助于我們更好的認(rèn)識其在肺腺癌中扮演的角色。第二部分:RUVBL1蛋白下調(diào)通過多種機(jī)制抑制肺腺癌腫瘤增殖的研究目的:第一部分研究中發(fā)現(xiàn)了細(xì)胞S期早期和WRAP53發(fā)生相互作用的蛋白Ruvb樣ATP酶1(RUVBL1),本部分研究旨在探索RUVBL1蛋白表達(dá)下調(diào)在肺腺癌細(xì)胞中扮演的角色。方法:我們檢測了本院收集的72對腫瘤組織和對應(yīng)癌旁組織的臨床病理組織中RUVBL1表達(dá)水平,也在肺腺癌細(xì)胞系和正常肺細(xì)胞系中進(jìn)行了驗(yàn)證;我們通過RNAi技術(shù)沉默了 RUVBL1蛋白的表達(dá),并觀察其對肺腺癌增殖能力的影響;通過細(xì)胞周期和凋亡檢測觀察肺腺癌細(xì)胞增殖能力減弱的原因;通過免疫印跡實(shí)驗(yàn)探索引起細(xì)胞周期阻滯出現(xiàn)的機(jī)制并通過回復(fù)實(shí)驗(yàn)進(jìn)行了驗(yàn)證;借助RUVBL1過表達(dá)實(shí)驗(yàn)對上述結(jié)果進(jìn)行了驗(yàn)證;最后通過免疫熒光和免疫印跡實(shí)驗(yàn)觀察RUVBL1下調(diào)引發(fā)的細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激現(xiàn)象。結(jié)果:RUVBL1表達(dá)在肺腺癌組織較癌旁組織更高;在肺腺癌細(xì)胞系比正常肺細(xì)胞系高;RUVBL1蛋白表達(dá)量下降可導(dǎo)致肺腺癌細(xì)胞增殖能力減弱,而出現(xiàn)減弱的原因?yàn)榧?xì)胞G1/期周期阻滯;而RUVBL1下調(diào)引發(fā)的周期阻滯是由AKT/GSK-3β/cyclin D1通路抑制及細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激IRE1α通路激活引發(fā)的。肺腺癌細(xì)胞中RUVBL1的過表達(dá)驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)結(jié)果也驗(yàn)證了上述結(jié)果。結(jié)論:通過上述研究首次證實(shí)RUVBL1在肺腺癌發(fā)生發(fā)展過程中具有重要作用,其作為有前途的臨床診療目的蛋白值得更進(jìn)一步研究。第三部分:HSPA2蛋白下調(diào)通過多種機(jī)制抑制肺腺癌腫瘤增殖的研究目的:第一部分研究中發(fā)現(xiàn)了細(xì)胞S期早期和WRAP53發(fā)生相互作用的熱休克蛋白A2(HSPA2),本部分研究旨在探索HSPA2蛋白表達(dá)下調(diào)在肺腺癌細(xì)胞中扮演的角色。方法:我們檢測了本院收集的85對腫瘤組織和對應(yīng)癌旁組織的臨床病理組織中HSPA2表達(dá)水平,也在肺腺癌細(xì)胞系和正常肺細(xì)胞系中進(jìn)行了驗(yàn)證;我們通過RNAi技術(shù)沉默了 HSPA2蛋白的表達(dá),并觀察其對肺腺癌增殖能力的影響;通過細(xì)胞周期和凋亡檢測觀察肺腺癌細(xì)胞增殖能力減弱的原因;通過免疫印跡實(shí)驗(yàn)探索引起細(xì)胞周期阻滯出現(xiàn)的機(jī)制并通過回復(fù)實(shí)驗(yàn)進(jìn)行了驗(yàn)證;最后通過免疫熒光和免疫印跡實(shí)驗(yàn)觀察HSPA2下調(diào)引發(fā)的細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激現(xiàn)象。結(jié)果:HSPA2表達(dá)在肺腺癌組織較癌旁組織更高;在肺腺癌細(xì)胞系比正常肺細(xì)胞系高;HSPA2蛋白表達(dá)量下降可導(dǎo)致肺腺癌細(xì)胞增殖能力減弱,而出現(xiàn)減弱的原因?yàn)榧?xì)胞G1/期周期阻滯;而HSPA2下調(diào)引發(fā)的周期阻滯是由磷酸化Erk1/2通路磷酸化及細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激IRE1α、PERK通路激活引發(fā)的。肺腺癌細(xì)胞中RUVBL1的過表達(dá)驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)結(jié)果也驗(yàn)證了上述結(jié)果。結(jié)論:通過上述研究首次證實(shí)HSPA2在肺腺癌發(fā)生發(fā)展過程中具有重要作用,其作為有前途的臨床診療目的蛋白值得更進(jìn)一步研究。
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R734.2

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本文編號：1333294