本文關鍵詞：WRAP53及其相互作用蛋白在肺腺癌發(fā)生發(fā)展過程中的作用及機制研究　出處：《浙江大學》2017年博士論文　論文類型：學位論文

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【摘要】：第一部分:WRAP53高表達在肺腺癌發(fā)生發(fā)展過程中的作用及機制探討目的:通過臨床、細胞生物學及生物信息學探索P53基因WD反義重復序列(WRAP53)蛋白高表達在肺腺癌發(fā)生發(fā)展過程中的作用。方法:我們檢測了本院收集的75對腫瘤組織和對應癌旁組織的臨床病理組織中WRAP53表達水平,然后分析了 WRAP53高表達患者的臨床特征;我們通過RNAi技術沉默了 WRAP53蛋白的表達,并觀察其對肺腺癌增殖能力的影響;通過細胞周期和凋亡檢測觀察肺腺癌細胞增殖能力減弱的原因;通過細胞周期同步化獲得處于S期早期的A549細胞;通過免疫共沉淀(Co-IP)和液相色譜/質譜法(LC/MS)得到在S期早期和WRAP53蛋白發(fā)生相互作用的蛋白。結果:熒光定量聚合酶鏈式反應(qRT-PCR)結果顯示W(wǎng)RAP53表達量在腫瘤組織中較癌旁組織中更高;WRAP53高表達在腫瘤大小超過3cm的患者和小于3cm的患者中存在顯著的統(tǒng)計學差異(p0.05),腫瘤超過3cm的患者WRAP53更有可能發(fā)生高表達;WRAP53蛋白表達量下降可導致肺腺癌細胞增殖能力減弱,原因為細胞G1/期周期阻滯;Co-IP聯(lián)用LC/MS發(fā)現(xiàn)S期早期A549細胞中和WRAP53發(fā)生相互作用的蛋白若干。結論:通過上述研究證實WRAP53在肺腺癌中的臨床、細胞生物學和生物信息學的意義,其互作蛋白的進一步研究有助于我們更好的認識其在肺腺癌中扮演的角色。第二部分:RUVBL1蛋白下調通過多種機制抑制肺腺癌腫瘤增殖的研究目的:第一部分研究中發(fā)現(xiàn)了細胞S期早期和WRAP53發(fā)生相互作用的蛋白Ruvb樣ATP酶1(RUVBL1),本部分研究旨在探索RUVBL1蛋白表達下調在肺腺癌細胞中扮演的角色。方法:我們檢測了本院收集的72對腫瘤組織和對應癌旁組織的臨床病理組織中RUVBL1表達水平,也在肺腺癌細胞系和正常肺細胞系中進行了驗證;我們通過RNAi技術沉默了 RUVBL1蛋白的表達,并觀察其對肺腺癌增殖能力的影響;通過細胞周期和凋亡檢測觀察肺腺癌細胞增殖能力減弱的原因;通過免疫印跡實驗探索引起細胞周期阻滯出現(xiàn)的機制并通過回復實驗進行了驗證;借助RUVBL1過表達實驗對上述結果進行了驗證;最后通過免疫熒光和免疫印跡實驗觀察RUVBL1下調引發(fā)的細胞內質網(wǎng)應激現(xiàn)象。結果:RUVBL1表達在肺腺癌組織較癌旁組織更高;在肺腺癌細胞系比正常肺細胞系高;RUVBL1蛋白表達量下降可導致肺腺癌細胞增殖能力減弱,而出現(xiàn)減弱的原因為細胞G1/期周期阻滯;而RUVBL1下調引發(fā)的周期阻滯是由AKT/GSK-3β/cyclin D1通路抑制及細胞內質網(wǎng)應激IRE1α通路激活引發(fā)的。肺腺癌細胞中RUVBL1的過表達驗證實驗結果也驗證了上述結果。結論:通過上述研究首次證實RUVBL1在肺腺癌發(fā)生發(fā)展過程中具有重要作用,其作為有前途的臨床診療目的蛋白值得更進一步研究。第三部分:HSPA2蛋白下調通過多種機制抑制肺腺癌腫瘤增殖的研究目的:第一部分研究中發(fā)現(xiàn)了細胞S期早期和WRAP53發(fā)生相互作用的熱休克蛋白A2(HSPA2),本部分研究旨在探索HSPA2蛋白表達下調在肺腺癌細胞中扮演的角色。方法:我們檢測了本院收集的85對腫瘤組織和對應癌旁組織的臨床病理組織中HSPA2表達水平,也在肺腺癌細胞系和正常肺細胞系中進行了驗證;我們通過RNAi技術沉默了 HSPA2蛋白的表達,并觀察其對肺腺癌增殖能力的影響;通過細胞周期和凋亡檢測觀察肺腺癌細胞增殖能力減弱的原因;通過免疫印跡實驗探索引起細胞周期阻滯出現(xiàn)的機制并通過回復實驗進行了驗證;最后通過免疫熒光和免疫印跡實驗觀察HSPA2下調引發(fā)的細胞內質網(wǎng)應激現(xiàn)象。結果:HSPA2表達在肺腺癌組織較癌旁組織更高;在肺腺癌細胞系比正常肺細胞系高;HSPA2蛋白表達量下降可導致肺腺癌細胞增殖能力減弱,而出現(xiàn)減弱的原因為細胞G1/期周期阻滯;而HSPA2下調引發(fā)的周期阻滯是由磷酸化Erk1/2通路磷酸化及細胞內質網(wǎng)應激IRE1α、PERK通路激活引發(fā)的。肺腺癌細胞中RUVBL1的過表達驗證實驗結果也驗證了上述結果。結論:通過上述研究首次證實HSPA2在肺腺癌發(fā)生發(fā)展過程中具有重要作用,其作為有前途的臨床診療目的蛋白值得更進一步研究。
【學位授予單位】：浙江大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R734.2

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