本文關(guān)鍵詞：腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞對(duì)胃癌復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的影響及其機(jī)制研究　出處：《南京醫(yī)科大學(xué)》2017年博士論文　論文類(lèi)型：學(xué)位論文

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【摘要】：本研究從臨床問(wèn)題出發(fā),發(fā)現(xiàn)問(wèn)題,進(jìn)一步從細(xì)胞和分子層面進(jìn)行驗(yàn)證,并探討其機(jī)制。本課題分為三部分:1、探討腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)(TAMs)、胃癌細(xì)胞EMT和胃癌干細(xì)胞在胃癌組織中的相關(guān)性及臨床意義;2、應(yīng)用克隆形成及懸浮培養(yǎng)分離AGS細(xì)胞不同克隆,即Holoclone、Meroclone和Paraclone,分離鑒定出胃癌干細(xì)胞;3、巨噬細(xì)胞對(duì)人胃癌細(xì)胞EMT及腫瘤干細(xì)胞的影響及相關(guān)機(jī)制的研究。方法:1.采用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)236例胃癌組織腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞及腫瘤干細(xì)胞標(biāo)記物的表達(dá)情況,分析胃癌組織中腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞與上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)換和腫瘤干細(xì)胞的相關(guān)性、臨床病理因素以及與腫瘤復(fù)發(fā)和患者預(yù)后預(yù)后之間的關(guān)系。2.將胃癌細(xì)胞AGS用含細(xì)胞因子EGF、bFGF的DMEM/F12的培養(yǎng)基出不同細(xì)胞克隆,分析不同細(xì)胞克隆形成集落的能力和自我更新能力,細(xì)胞免疫熒光法鑒定緊密克隆分化的異質(zhì)性和干細(xì)胞標(biāo)記物表達(dá)情況。3.應(yīng)用ELISA法分別檢測(cè)人胃癌細(xì)胞系A(chǔ)GS、人巨噬細(xì)胞及二者共培養(yǎng)體系中培養(yǎng)液上清中IL-6的濃度;應(yīng)用WesternBlot的方法比較外源性IL-6作用于人胃癌細(xì)胞系A(chǔ)GS后腫瘤干細(xì)胞標(biāo)志物CD44的變化情況;應(yīng)用細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)外源性IL-6對(duì)胃癌細(xì)胞運(yùn)動(dòng)、遷移能力的影響;應(yīng)用Transwell侵襲小室檢測(cè)外源性IL-6對(duì)胃癌細(xì)胞侵襲能力的影響;應(yīng)用WestemBlot的方法檢測(cè)巨噬細(xì)胞分泌的IL-6是否通過(guò)活化STAT3信號(hào)通路促進(jìn)胃癌干細(xì)胞表型,并促進(jìn)腫瘤細(xì)胞遷徙。結(jié)果:1.CD163+腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞(TAMs)的高表達(dá)與腫瘤惡性生物學(xué)特征相關(guān),尤其是腫瘤復(fù)發(fā)密切相關(guān)。在胃癌組織中存在腫瘤干細(xì)胞相關(guān)標(biāo)志物的高表達(dá)和腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞(TAMs)標(biāo)記CD163之間存在顯著相關(guān)性。對(duì)于有復(fù)發(fā)患者,CD163+腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞(TAMs)的高表達(dá)是一個(gè)獨(dú)立的不良預(yù)后因素。結(jié)論:腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞(TAMs)大量與腫瘤惡性生物學(xué)行為相關(guān),與腫瘤干細(xì)胞標(biāo)志物CD44和CD133的異常表達(dá)有關(guān),而且是一個(gè)獨(dú)立的預(yù)后不良因素。靶向針對(duì)胃癌組織中腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞(TAMs)的藥物可能成為胃癌,包括復(fù)發(fā)患者,潛在的治療策略。2.克隆形成結(jié)果發(fā)現(xiàn)胃癌細(xì)胞AGS克隆形成率為9.67±1.21%(n=6)。根據(jù)克隆形態(tài)將其分為緊密型,中間型和松散型三類(lèi)。三種類(lèi)型的克隆所占比例分別為15.1%,65.6%和19.3%。利用免疫細(xì)胞染色來(lái)自Holoelone克隆的細(xì)胞,結(jié)果發(fā)現(xiàn)Holoelone克隆可向胃腸上皮分化并高表達(dá)腫瘤干細(xì)胞標(biāo)記物CD44。Holoelone克隆不僅形成了與原有克隆類(lèi)似的Holoclone克隆,還可形成Merodone及Paraclone克隆,表明Holoclone來(lái)源的細(xì)胞具有自我更新能力。3.人巨噬細(xì)胞及其與人胃癌細(xì)胞系A(chǔ)GS共培養(yǎng)體系中培養(yǎng)液上清中IL-6濃度顯著高于人胃癌細(xì)胞系A(chǔ)GS(P0.001);IL-6在人胃癌癌內(nèi)與癌旁組織中均有表達(dá),其表達(dá)無(wú)個(gè)體與組織特異性,而IL-6與CD163二者在人胃癌癌內(nèi)與癌旁組織中表達(dá)存在正相關(guān)性(P0.0001);外源性IL-6可促進(jìn)胃癌細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)遷移能力及侵襲能力:外源性IL-6可以通過(guò)STAT3途徑激活CD44,從而使細(xì)胞向腫瘤干細(xì)胞樣表型轉(zhuǎn)化,并發(fā)生上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)變。結(jié)論:1.CSCs標(biāo)記物在腫瘤組織中表達(dá)異常升高,并且與胃癌的大小、浸潤(rùn)的深度、分化程度、TNM分期情況、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移程度等腫瘤惡性生物學(xué)行為以及患者預(yù)后情況相關(guān)密切。2.腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞(TAMs)大量與腫瘤惡性生物學(xué)行為相關(guān),與腫瘤干細(xì)胞標(biāo)志物的異常表達(dá)有關(guān),而且是一個(gè)獨(dú)立的預(yù)后不良因素。3.胃癌細(xì)胞株AGS細(xì)胞形成的克隆在形態(tài)和分化程度上具有異質(zhì)性。通過(guò)克隆形成能夠從胃癌細(xì)胞AGS細(xì)胞分選、篩查出腫瘤干細(xì)胞,即緊密型克隆(holoclone)。來(lái)自Holoclone克隆的細(xì)胞具有自我更新、多向分化等腫瘤干細(xì)胞的特性。4.巨噬細(xì)胞胞通過(guò)IL-6/STAT3信號(hào)通路上調(diào)CD44表達(dá),促進(jìn)胃癌干細(xì)胞表型和胃癌細(xì)胞侵襲遷徙。
【學(xué)位授予單位】：南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類(lèi)號(hào)】：R735.2

【參考文獻(xiàn)】

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1 Kang Li;Zeng Dan;Yu-Qiang Nie;;Gastric cancer stem cells in gastric carcinogenesis,progression,prevention and treatment[J];World Journal of Gastroenterology;2014年18期

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本文編號(hào)：1329227