本文關(guān)鍵詞：MLF1IP在Luminal型乳腺癌中的表達(dá)及其對(duì)他莫昔芬敏感性的影響　出處：《南方醫(yī)科大學(xué)》2017年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：目的:內(nèi)分泌治療是Luminal型乳腺癌的重要治療方法,但原發(fā)或繼發(fā)性內(nèi)分泌治療耐藥問題已成為乳腺癌臨床治療的一大難題。有研究顯示人髓細(xì)胞白血病因子1相互作用蛋白基因(The myelodysplasia/myeloid leukemia factor 1-interacting protein,MLF1IP)與多種惡性腫瘤相關(guān),但關(guān)于MLF1IP基因與Luminal型乳腺癌關(guān)系尚未見報(bào)道。因此,本課題擬探討MLF1IP在Luminal型乳腺癌中的表達(dá)情況及其與他莫昔芬敏感性的關(guān)系,為乳腺癌內(nèi)分泌治療敏感人群的篩選提供新的指標(biāo),以及為逆轉(zhuǎn)他莫昔芬耐藥提供新的思路。方法:1.采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測Luminal型乳腺癌組織及配對(duì)癌旁組織中MLF1IP mRNA相對(duì)表達(dá)水平。并通過癌癥基因組圖譜(The Cancer Genome Atlas,TCGA)公共數(shù)據(jù)集研究MLF1IP基因在Luminal型乳腺癌中的表達(dá)情況及其對(duì)生存預(yù)后的影響。同時(shí),采用免疫組化染色對(duì)Luminal型乳腺癌組織中的MLF1IP蛋白表達(dá)進(jìn)行定位和半定量檢測,進(jìn)一步驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)結(jié)果。2.構(gòu)建MLF1IP基因沉默慢病毒載體,利用其感染MLF1IP高表達(dá)乳腺癌細(xì)胞株建立相關(guān)細(xì)胞模型,并采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR和Western Blot驗(yàn)證其MLF1IP沉默效果。采用CCK-8檢測細(xì)胞增殖能力,采用流式細(xì)胞周期分析檢測細(xì)胞周期構(gòu)成,采用流式細(xì)胞凋亡分析檢測細(xì)胞凋亡水平。采用Western Blot檢測多種細(xì)胞周期相關(guān)蛋白的表達(dá),觀察MLF1IP對(duì)細(xì)胞周期不同階段相關(guān)蛋白表達(dá)的影響。3.實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測他莫昔芬對(duì)MLF1IP誘導(dǎo)作用。CCK-8檢測MLF1IP基因沉默對(duì)乳腺癌細(xì)胞他莫昔芬藥物敏感性的影響。并在有或無他莫昔芬處理?xiàng)l件下,采用流式細(xì)胞凋亡分析檢測凋亡在MLF1IP介導(dǎo)乳腺癌細(xì)胞他莫昔芬耐藥中的作用。另外,采用Western Blot檢測多種細(xì)胞凋亡、P13K/AKT信號(hào)通路相關(guān)蛋白的表達(dá)水平變化,進(jìn)一步分析相關(guān)作用機(jī)制。結(jié)果:1.實(shí)時(shí)熒光定量PCR及TCGA數(shù)據(jù)庫檢索結(jié)果均顯示MLF1IP mRNA在Luminal型乳腺癌組織中的表達(dá)明顯高于癌旁組織。且MLF1IP高表達(dá)與Luminal型乳腺癌患者PR狀態(tài)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及不良預(yù)后等密切相關(guān)。免疫組化結(jié)果顯示MLF1IP蛋白主要定位于細(xì)胞漿,癌組織中陽性細(xì)胞比例明顯高于癌旁對(duì)照,并與腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、PR狀態(tài)顯著相關(guān)。2.MLF1IP基因沉默可顯著降低MCF-7細(xì)胞增殖能力,促使其細(xì)胞周期停滯于G1期,并可促進(jìn)MCF-7細(xì)胞死亡,但其對(duì)凋亡的作用有待于進(jìn)一步研究。此外,Western Blot實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明MCF7-shRNA細(xì)胞的Cyclin D1蛋白表達(dá)水平顯著低于MCF7-NC細(xì)胞,而Cyclin E、CDK2、CDK4、CDK6蛋白表達(dá)水平在兩組細(xì)胞間均無顯著差異。3.他莫昔芬可誘導(dǎo)MCF-7細(xì)胞MLF1IP表達(dá)。MLF1IP基因沉默可顯著增加MCF-7細(xì)胞他莫昔芬敏感性。在他莫昔芬刺激條件下,MLF1IP基因沉默可顯著抑制MCF-7細(xì)胞增殖并促進(jìn)其凋亡,兩組間差異大于無他莫昔芬刺激條件下增殖、凋亡水平的差異。Western Blot分析顯示,在他莫昔芬刺激條件下,MLF1IP基因沉默可顯著上調(diào)Bax、Caspase3、Caspase7、Caspase9蛋白表達(dá)水平,并下調(diào)Bcl-2蛋白表達(dá)水平。另外,對(duì)P13K/AKT信號(hào)通路的Western Blot檢測結(jié)果顯示MCF7-shRNA細(xì)胞的PTEN蛋白表達(dá)水平明顯高于MCF7-NC細(xì)胞,同時(shí)p-AKT蛋白表達(dá)水平明顯低于MCF7-NC細(xì)胞。提示MLF1IP可促進(jìn)AKT磷酸化,激活PI3K/AKT信號(hào)通路,而這種作用可能是通過抑制PTEN表達(dá)所致。結(jié)論:1.MLF1IP表達(dá)與Luminal型乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān),MLF1IP是Luminal型乳腺癌患者預(yù)后的潛在預(yù)測指標(biāo)。2.MLF1IP通過上調(diào)CyclinD1影響細(xì)胞周期,促進(jìn)MCF-7細(xì)胞增殖。MLF1IP基因沉默可顯著降低MCF-7細(xì)胞增殖能力,并可促進(jìn)MCF-7細(xì)胞死亡,但其對(duì)凋亡的作用有待于進(jìn)一步研究。3.MLF1IP相關(guān)的凋亡抵抗在MLF1IP介導(dǎo)乳腺癌細(xì)胞TAM特異性耐藥中扮演重要角色。MLF1IP可作為Luminal型乳腺癌他莫昔芬敏感性的預(yù)測因子,并且MLF1IP可能通過影響PI3K-PTEN/AKT信號(hào)通路活性,從而促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞他莫昔芬耐藥。
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R737.9

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