本文關(guān)鍵詞：雙區(qū)段檢測(cè)提高乙型肝炎病毒核酸檢測(cè)性能的研究　出處：《北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院》2017年博士論文　論文類(lèi)型：學(xué)位論文

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【摘要】：乙型肝炎病毒(HepatitisB virus,HBV)是一種嚴(yán)重危害人類(lèi)健康的DNA病毒。HBV DNA定量檢測(cè)在乙肝治療過(guò)程中發(fā)揮重要作用,是抗病毒治療效果監(jiān)測(cè)重要指標(biāo)。目前用于HBVDNA定量試劑多采用的是單引物/探針的設(shè)計(jì)方法,但是HBV病毒具有較高的突變率和耐藥突變,如果標(biāo)本引物/探針結(jié)合區(qū)發(fā)生錯(cuò)配,可導(dǎo)致HBVDNA定量值低于實(shí)際值,甚至出現(xiàn)假陰性。本文基于HBVDNA基因組保守區(qū),設(shè)計(jì)了一種新的雙引物/雙探針的策略,建立了一種雙重?zé)晒釮BVDNA定量PCR方法。方法包括引物探針的設(shè)計(jì)與篩選、體系的建立和優(yōu)化。并對(duì)建立的檢測(cè)體系進(jìn)行了方法學(xué)評(píng)價(jià),包括線(xiàn)性范圍、最低檢出限(the limit of detection,LOD),特異性等。為驗(yàn)證其臨床實(shí)用性,我們將新的定量方法的定量值分別與商品化試劑COBAS TaqManHBVTest,version2以及達(dá)安定量試劑進(jìn)行比較和一致性分析。對(duì)其中定量值差別10倍以上的標(biāo)本,進(jìn)行測(cè)序和質(zhì)粒驗(yàn)證。結(jié)果顯示:本研究建立的雙引物/雙探針的HBVDNA定量方法具有良好的檢測(cè)性能。與商品化COBAS TaqMan HBV Test version 2以及達(dá)安定量試劑定量值具有良好的一致性。兩種試劑均存在與本研究建立方法定量值差10倍以上標(biāo)本,測(cè)序結(jié)果發(fā)現(xiàn)在COBAS TaqMan HBV Test version 2試劑反向引物nt1962和1963位置存在突變位點(diǎn)。用包含這些突變序列的質(zhì)粒進(jìn)行定量驗(yàn)證,COBAS TaqManHBVTest version 2試劑對(duì)質(zhì)粒定量值存在偏低的情況。方法中S區(qū)和C區(qū)定量值具有良好的一致性(R2=0.9657),但有5例樣本存在C區(qū)定量值低于S區(qū)10倍以上的情況,測(cè)序結(jié)果發(fā)現(xiàn)這部分標(biāo)本在引物結(jié)合區(qū)存在突變。本研究建立的雙引物/雙探針的HBVDNA定量方法,可降低因單引物/單探針與標(biāo)本序列錯(cuò)配導(dǎo)致定量值偏低的風(fēng)險(xiǎn),為臨床對(duì)HBV的診斷、治療、預(yù)后提供準(zhǔn)確依據(jù)。HBV核酸檢測(cè)是血液核酸篩查(nucleotide acid test,NAT)重要組成部分,在防止HBV經(jīng)輸血傳播,保障輸血安全中發(fā)揮重要作用。HBV是高度變異的病毒,單區(qū)段的HBV核酸篩查可能存在漏檢風(fēng)險(xiǎn),威脅輸血安全。本研究中,建立了一套基于HBV保守的S和C區(qū)的HBV核酸檢測(cè)方法。對(duì)其進(jìn)行了最低檢出限和特異性等方法學(xué)評(píng)價(jià)。用自建方法對(duì)兩種血篩試劑:浩源和Cobas TaqScreen MPX Test,version 2檢測(cè)陰陽(yáng)性不一致的標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè),并對(duì)標(biāo)本進(jìn)行HBV DNA定量檢測(cè)。結(jié)果顯示:自建方法具有良好的方法學(xué)檢測(cè)性能。浩源和Cobas TaqScreen MPX Test,version 2血篩試劑檢測(cè)不一致標(biāo)本中,8例標(biāo)本HBV DNA定量濃度高于其LOD發(fā)生漏檢,間接證明HBV核酸血液篩查中,單區(qū)段檢測(cè)存在漏檢風(fēng)險(xiǎn),雙區(qū)段檢測(cè)可有助于降低漏檢風(fēng)險(xiǎn),保障輸血安全。
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類(lèi)號(hào)】：R512.62;R440

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本文編號(hào)：1322261