本文關(guān)鍵詞：雙區(qū)段檢測提高乙型肝炎病毒核酸檢測性能的研究　出處：《北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院》2017年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

  更多相關(guān)文章： 乙肝病毒 核酸檢測 real-time PCR 雙區(qū)段

【摘要】：乙型肝炎病毒(HepatitisB virus,HBV)是一種嚴(yán)重危害人類健康的DNA病毒。HBV DNA定量檢測在乙肝治療過程中發(fā)揮重要作用,是抗病毒治療效果監(jiān)測重要指標(biāo)。目前用于HBVDNA定量試劑多采用的是單引物/探針的設(shè)計方法,但是HBV病毒具有較高的突變率和耐藥突變,如果標(biāo)本引物/探針結(jié)合區(qū)發(fā)生錯配,可導(dǎo)致HBVDNA定量值低于實際值,甚至出現(xiàn)假陰性。本文基于HBVDNA基因組保守區(qū),設(shè)計了一種新的雙引物/雙探針的策略,建立了一種雙重?zé)晒釮BVDNA定量PCR方法。方法包括引物探針的設(shè)計與篩選、體系的建立和優(yōu)化。并對建立的檢測體系進行了方法學(xué)評價,包括線性范圍、最低檢出限(the limit of detection,LOD),特異性等。為驗證其臨床實用性,我們將新的定量方法的定量值分別與商品化試劑COBAS TaqManHBVTest,version2以及達安定量試劑進行比較和一致性分析。對其中定量值差別10倍以上的標(biāo)本,進行測序和質(zhì)粒驗證。結(jié)果顯示:本研究建立的雙引物/雙探針的HBVDNA定量方法具有良好的檢測性能。與商品化COBAS TaqMan HBV Test version 2以及達安定量試劑定量值具有良好的一致性。兩種試劑均存在與本研究建立方法定量值差10倍以上標(biāo)本,測序結(jié)果發(fā)現(xiàn)在COBAS TaqMan HBV Test version 2試劑反向引物nt1962和1963位置存在突變位點。用包含這些突變序列的質(zhì)粒進行定量驗證,COBAS TaqManHBVTest version 2試劑對質(zhì)粒定量值存在偏低的情況。方法中S區(qū)和C區(qū)定量值具有良好的一致性(R2=0.9657),但有5例樣本存在C區(qū)定量值低于S區(qū)10倍以上的情況,測序結(jié)果發(fā)現(xiàn)這部分標(biāo)本在引物結(jié)合區(qū)存在突變。本研究建立的雙引物/雙探針的HBVDNA定量方法,可降低因單引物/單探針與標(biāo)本序列錯配導(dǎo)致定量值偏低的風(fēng)險,為臨床對HBV的診斷、治療、預(yù)后提供準(zhǔn)確依據(jù)。HBV核酸檢測是血液核酸篩查(nucleotide acid test,NAT)重要組成部分,在防止HBV經(jīng)輸血傳播,保障輸血安全中發(fā)揮重要作用。HBV是高度變異的病毒,單區(qū)段的HBV核酸篩查可能存在漏檢風(fēng)險,威脅輸血安全。本研究中,建立了一套基于HBV保守的S和C區(qū)的HBV核酸檢測方法。對其進行了最低檢出限和特異性等方法學(xué)評價。用自建方法對兩種血篩試劑:浩源和Cobas TaqScreen MPX Test,version 2檢測陰陽性不一致的標(biāo)本進行檢測,并對標(biāo)本進行HBV DNA定量檢測。結(jié)果顯示:自建方法具有良好的方法學(xué)檢測性能。浩源和Cobas TaqScreen MPX Test,version 2血篩試劑檢測不一致標(biāo)本中,8例標(biāo)本HBV DNA定量濃度高于其LOD發(fā)生漏檢,間接證明HBV核酸血液篩查中,單區(qū)段檢測存在漏檢風(fēng)險,雙區(qū)段檢測可有助于降低漏檢風(fēng)險,保障輸血安全。
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R512.62;R440

【相似文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 楊芳;;HCV核酸檢測方法[J];中國艾滋病性病;2008年01期

2 李文;王歡;王乃紅;楊群身;傅雪梅;王麗紅;李瑩;趙欣;;血站核酸檢測實驗室建設(shè)和管理的細(xì)節(jié)問題[J];中國輸血雜志;2011年07期

3 王乃紅;李文;;血站開展病毒核酸檢測工作模式初探[J];中國輸血雜志;2011年07期

4 李浩;任誠誠;孫雪梅;;Procleix Tigris全自動核酸檢測系統(tǒng)的使用前確認(rèn)[J];中國輸血雜志;2012年S1期

5 李秋鳳;;血液核酸檢測與酶免檢測的誤區(qū)及定位思考[J];中國輸血雜志;2012年S1期

6 劉榮;紀(jì)杰;;核酸檢測 傳感生命[J];科技創(chuàng)新與品牌;2012年11期

7 黃杰;高尚先;;核酸檢測參考物質(zhì)研究進展[J];首都醫(yī)藥;2007年24期

8 朱海峰;朱永寶;陳富強;張妍;曹磊;;濟南地區(qū)無償獻血者核酸檢測結(jié)果分析[J];中國輸血雜志;2010年S1期

9 冷嬋;王中梅;于磊;姚鳳蘭;汪德海;葛紅衛(wèi);;血站核酸檢測實驗室風(fēng)險識別、評估及控制方法探討[J];中國輸血雜志;2011年07期

10 馬書章;田曉娟;佟利家;;血源篩查核酸檢測應(yīng)用現(xiàn)狀及研發(fā)中應(yīng)關(guān)注的問題[J];首都醫(yī)藥;2012年24期

相關(guān)會議論文 前10條

1 朱海峰;朱永寶;陳富強;張妍;曹磊;;濟南地區(qū)無償獻血者核酸檢測結(jié)果分析[A];中國輸血協(xié)會第五屆輸血大會論文專集（摘要篇）[C];2010年

2 黃杰;高尚先;;核酸檢測參考物質(zhì)研究進展[A];2007年全國生化與生物技術(shù)藥物學(xué)術(shù)年會論文集[C];2007年

3 文海燕;王靜;劉衡川;;懸浮芯片技術(shù)在微生物核酸檢測中應(yīng)用進展[A];重慶市預(yù)防醫(yī)學(xué)會2012年學(xué)術(shù)年會論文集[C];2012年

4 孫森;郭建;楊忠思;楊志夏;劉波;;核酸檢測模式下如何做好血液庫存管理[A];中國輸血協(xié)會第五屆輸血大會論文專集（摘要篇）[C];2010年

5 任芙蓉;王憬惺;趙海燕;張遠(yuǎn)志;文國新;姚富柱;高國靜;嚴(yán)力行;江朝富;白旭華;美黑麗·鐵木爾;涂源泉;朱發(fā)明;鄭優(yōu)榮;崔莉;龔曉燕;鄭鵬;Paul Ness;Hua Shan;;我國5城市獻血者HIV及HCV核酸檢測研究[A];中國輸血協(xié)會第四屆輸血大會論文集[C];2006年

6 陳浩;曹明;;淺談傳染病醫(yī)院的臨床核酸檢測實驗室管理[A];第三屆全國臨床檢驗實驗室管理學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2005年

7 范行良;李長貴;高榮寶;邱平;邵銘;秦成峰;王軍志;;甲型H1N1流感病毒核酸檢測試劑比較[A];2010年中國藥學(xué)大會暨第十屆中國藥師周論文集[C];2010年

8 趙曉洋;宮濟武;林東;周航;孫崢;田利紅;劉燕明;;我國獻血者篩查風(fēng)險模型與核酸檢測應(yīng)用的初探[A];第五次全國中青年檢驗醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2006年

9 葉賢林;王良華;尚桂芳;楊立新;周一炎;;全自動核酸提取儀在血液核酸檢測中的應(yīng)用研究[A];中國輸血協(xié)會第三屆輸血大會論文專輯[C];2004年

10 常宏偉;李開春;范玉珍;李朝陽;臧遠(yuǎn)成;高玲;王德全;楊衛(wèi);;流感病毒RT-PCR核酸檢測及流行病學(xué)特點[A];華東地區(qū)第十次流行病學(xué)學(xué)術(shù)會議暨華東地區(qū)流行病學(xué)學(xué)術(shù)會議20周年慶典論文集[C];2010年

相關(guān)重要報紙文章 前10條

1 記者 黃錦軍;省血液中心成核酸檢測試點單位[N];江西日報;2010年

2 記者 朱國旺;核酸檢測可提高輸血安全性[N];中國醫(yī)藥報;2010年

3 朱國旺;核酸檢測成為傳統(tǒng)血液安全檢測方法的重要補充[N];中國醫(yī)藥報;2011年

4 駐太倉首席記者 徐允上 通訊員 李孝忠;太倉有了核酸檢測廠[N];蘇州日報;2011年

5 本報記者 項錚;緩解血荒難題 核酸檢測亮相[N];科技日報;2012年

6 本報記者 唐學(xué)良;政策促血篩核酸檢測市場放量[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2013年

7 本報記者 楊俊堅;羅氏診斷發(fā)力核酸檢測[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2013年

8 本報記者 李瑤;核酸檢測的中國機會[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2012年

9 本報記者 項錚;諾華診斷推新技術(shù)NAT進中國[N];科技日報;2012年

10 記者 梁姍　實習(xí)生 張競成;用血患者有了“安全鎖”[N];南寧日報;2010年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前4條

1 陳柱;基于磁分離的現(xiàn)場核酸檢測平臺若干關(guān)鍵技術(shù)研究[D];東南大學(xué);2016年

2 劉超;雙區(qū)段檢測提高乙型肝炎病毒核酸檢測性能的研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2017年

3 尹惠瓊;藍(lán)舌病病毒核酸通用檢測試劑盒的研制[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2008年

4 王利勇;基于水溶性碳納米粒子的核酸檢測[D];河北大學(xué);2012年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 趙俊鵬;血液病毒核酸檢測與酶聯(lián)免疫檢測比較研究[D];河北聯(lián)合大學(xué);2014年

2 王卓妍;實施核酸檢測后獻血者HBV篩查策略的探討[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2015年

3 尹峰;基于STM32的核酸檢測系統(tǒng)研究[D];華中科技大學(xué);2014年

4 姚楚;硅基銀片的等離子體熒光增強效應(yīng)及其在蛋白質(zhì)核酸檢測中的應(yīng)用[D];蘇州大學(xué);2016年

5 蔣娜;一種核酸提取磁球和四種腦炎病毒核酸檢測試劑盒（熒光PCR法）的研制[D];河南中醫(yī)藥大學(xué);2016年

6 張德才;基于表面等離子共振生物傳感器的核酸檢測新技術(shù)研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2013年

7 王美玉;丙型病毒性肝炎臨床診斷核酸檢測策略評估[D];中國疾病預(yù)防控制中心;2014年

8 趙丹;基于等溫擴增技術(shù)的電化學(xué)生物傳感器對核酸檢測的新策略研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2014年

9 謝珊;人乳頭瘤病毒高危型的CODEHOP檢測及-16、-18型核酸檢測質(zhì)控物的研究[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2007年

10 趙志超;核酸檢測與線粒體染色熒光染料的合成與應(yīng)用[D];大連理工大學(xué);2013年

，

本文編號：1322261