本文關(guān)鍵詞：miR-17在乳腺癌中表達(dá)的臨床意義及其促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞增殖的實(shí)驗(yàn)研究　出處：《南京醫(yī)科大學(xué)》2017年博士論文　論文類(lèi)型：學(xué)位論文

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【摘要】：背景乳腺癌是我國(guó)女性最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一。乳腺癌的發(fā)生伴隨著基因、表觀遺傳以及各種各樣分子機(jī)制的變化。隨著乳腺癌的早期診斷的進(jìn)步,以及放射治療、各種輔助治療的發(fā)展,乳腺癌的預(yù)后已經(jīng)有了很大的提高,但是乳腺癌仍然是威脅廣大女性生命的最常見(jiàn)惡性腫瘤�；颊叩哪挲g、腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀態(tài)、組織病理學(xué)類(lèi)型、病理學(xué)分級(jí)、激素受體狀態(tài)常常被用來(lái)評(píng)估患者的預(yù)后以指導(dǎo)臨床決策。然而,由于乳腺癌基因背景以及對(duì)治療反應(yīng)的多樣性,這些評(píng)價(jià)乳腺癌的指標(biāo)還遠(yuǎn)遠(yuǎn)不夠,我們需要更多更好的生物標(biāo)記物來(lái)指導(dǎo)早期診斷,選擇合適的治療手段以及精準(zhǔn)的預(yù)測(cè)預(yù)后。MicroRNAs(miRNAs)是包含約20-25個(gè)核苷酸的小分子非編碼RNA,它通過(guò)對(duì)目標(biāo)mRNA降解和翻譯抑制起著轉(zhuǎn)錄后調(diào)控的作用。大量研究表明,miRNAs的異常表達(dá)和包括腫瘤在內(nèi)的許多疾病息息相關(guān)。一些miRNA可以作為抑癌基因或促癌基因在乳腺癌的形成過(guò)程中起著極為重要的作用,它們可以調(diào)控細(xì)胞增殖、分化、腫瘤轉(zhuǎn)移以及腫瘤血管形成�，F(xiàn)今用它作為腫瘤診斷、預(yù)后、預(yù)測(cè)治療反應(yīng)的生物標(biāo)記物已經(jīng)越來(lái)越得到學(xué)者們的一致認(rèn)同。近年來(lái),研究表明miR-17在多種腫瘤的形成中的發(fā)揮著重要作用。而關(guān)于miR-17在乳腺癌中的表達(dá)模式及臨床意義方面尚未有最新報(bào)道。目的本實(shí)驗(yàn)我們主要研究miR-17表達(dá)水平和乳腺癌患者臨床病理特征的關(guān)系,探討miR-17表達(dá)水平對(duì)乳腺癌總生存率(OS)的影響。同時(shí)通過(guò)實(shí)驗(yàn)明確miR-17的表達(dá)情況對(duì)乳腺癌細(xì)胞系的影響,為miR-17可能作為乳腺癌診斷、預(yù)后的生物學(xué)指標(biāo)奠定基礎(chǔ)。方法我們收集了 2008年1月至2009年12月期間在南京醫(yī)科大學(xué)附屬常州市第二人民醫(yī)院住院手術(shù)的乳腺癌患者標(biāo)本132例。通過(guò)qRT-PCR檢測(cè)miR-17在乳腺癌組織與癌旁組織中的表達(dá)情況。比較乳腺癌組織和癌旁正常組織miR-17表達(dá)的差異,并且觀察了不同病理分期的乳腺癌表達(dá)miR-17的差異。同時(shí)我們通過(guò)miR-17表達(dá)水平高低的不同,將患者分成miR-17高表達(dá)組和miR-17低表達(dá)組,分析兩組病人ER、PR、HER-2、CD44、COX-2、EGFR、PGP狀態(tài)以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況的差異。對(duì)于臨床資料,我們還通過(guò)Kaplan-Meier法和log-rank檢驗(yàn)來(lái)計(jì)算分析了 miR-17高表達(dá)組和miR-17低表達(dá)組從手術(shù)確定乳腺癌開(kāi)始到隨訪期結(jié)束的總生存期的差異。我們假設(shè)miR-17在乳腺癌中扮演著癌基因的角色,為了驗(yàn)證這個(gè)假設(shè),我們檢測(cè)了 miR-17在乳腺癌細(xì)胞MCF-7、MDA-MB-435S、MDA-MB-231和正常乳腺細(xì)胞系MCF10A中表達(dá)差異。在乳腺癌細(xì)胞MCF-7、MDA-MB-231中轉(zhuǎn)染miR-17 mimics或miR-17 inhibitor,通過(guò)MTT的方法觀察其對(duì)乳腺癌細(xì)胞增殖的影響。另外,我們還通過(guò)流式細(xì)胞檢測(cè)技術(shù)檢測(cè)了 miR-17對(duì)細(xì)胞周期的影響。最后通過(guò)裸鼠移植瘤實(shí)驗(yàn),驗(yàn)證miR-17的體內(nèi)成瘤能力。將20只小鼠隨機(jī)分成兩組,建立穩(wěn)定的移植瘤模型,每7天測(cè)量腫瘤體積,42天后處死小鼠,評(píng)估腫瘤。結(jié)果乳腺癌組織和癌旁正常組織相比,miR-17的表達(dá)顯著增高(p0.0001,n=40)。另外,病理分期越高,miR-17 的表達(dá)越高(Stage1 and Stage 2,p =0.5612;Stage 1 and Stage 3,p0.05;Stage 1 and Stage 4,p0.05)。數(shù)據(jù)顯示,miR-17 高表達(dá)組和低表達(dá)組ER表達(dá)水平和Her-2表達(dá)水平有差異(p0.05)。年齡、PR、CD44、COX-2、EGFR、PGP狀態(tài)以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況未見(jiàn)明顯差異。miR-17低表達(dá)組和高表達(dá)組相比總生存期較長(zhǎng),兩者有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05,n=36)。體外實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),與正常乳腺細(xì)胞系MCF10A相比,miR-17在乳腺癌細(xì)胞系MCF-7、MDA-MB-435S、MDA-MB-231 中表達(dá)水平更高。miR-17 mimics 促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞增殖,而miR-17 inhibitor抑制乳腺癌細(xì)胞增殖。同時(shí)發(fā)現(xiàn)miR17 inhibitor將乳腺癌細(xì)胞阻滯在細(xì)胞周期S期。通過(guò)移植瘤實(shí)驗(yàn),我們發(fā)現(xiàn),agomiR-17組小鼠的腫瘤更大,表明miR-17可以在體內(nèi)誘導(dǎo)腫瘤增長(zhǎng)。結(jié)論本研究表明,miR-17在乳腺癌組織和乳腺癌細(xì)胞系中表達(dá)上調(diào),miR-17上調(diào)可以促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞增殖。在乳腺癌患者中miR-17高表達(dá),總生存率較低。提示miR-17可能可以成為乳腺癌診斷和治療的新的生物標(biāo)記物。
【學(xué)位授予單位】：南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類(lèi)號(hào)】：R737.9

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