本文關(guān)鍵詞：淫羊藿素提升miR-370下調(diào)PIM1抑制肺癌的作用機制研究　出處：《吉林大學》2017年博士論文　論文類型：學位論文

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【摘要】：背景:miRNA在多種腫瘤發(fā)生發(fā)展中起著重要的作用,了解肺癌與miRNA的關(guān)系,對深入探討肺癌的機制至關(guān)重要,也為肺癌的治療提供了潛在的新靶點和新方法。淫羊藿素是傳統(tǒng)中藥淫羊藿中主要的有效成分,現(xiàn)代藥理學研究已經(jīng)證實了淫羊藿素具有抗腫瘤的實際功效。不過,淫羊藿素對肺癌的作用及其機制尚屬未知。目的:本文從臨床、動物、細胞三個角度,對肺癌發(fā)生發(fā)展中miRNA家族成員miR-370的作用及其對PIM1的調(diào)控進行了深入的探討。在此基礎(chǔ)之上,對淫羊藿素的肺癌抑制作用及其機制進行了分析,為淫羊藿素在肺癌領(lǐng)域的臨床應(yīng)用奠定一定的基礎(chǔ)。方法:采集肺癌臨床標本檢測miR-370水平,對肺癌患者生存時間進行隨訪,分析肺癌樣本中miR-370與PIM1的關(guān)系。以micro RNA數(shù)據(jù)庫與功能分析軟件對miR-370匹配蛋白進行預測,構(gòu)建熒光報告質(zhì)粒以雙熒光素酶測定法檢測miR-370與PIM1蛋白的結(jié)合情況。培養(yǎng)肺癌及正常肺部細胞株,定量PCR檢測mRNA轉(zhuǎn)錄,western-blot檢測蛋白表達,以CCK-8法測定肺癌細胞存活率、克隆形成實驗檢測肺癌細胞生長、Annexin V-FITC/PI流式細胞技術(shù)及caspase-3表達檢測肺癌細胞凋亡、劃痕實驗檢測肺癌細胞遷移能力、transwell實驗檢測肺癌細胞侵襲能力,構(gòu)建miR-370慢病毒、miR-370過表達質(zhì)粒、PIM1慢病毒、PIM1過表達質(zhì)粒,分別對miR-370和PIM1進行沉默和過表達,分析miR-370和PIM1在細胞中的作用。構(gòu)建肺癌移植裸鼠模型,觀察淫羊藿素對裸鼠體重、瘤體積的影響,以tunel法及casapse-3免疫組化法檢測淫羊藿素對裸鼠肺癌組織凋亡的作用,以定量PCR和western-blot對裸鼠肺癌組織中miR-370和PIM1的表達進行檢測。培養(yǎng)肺癌細胞,觀察淫羊藿素對肺癌細胞的活性、生長、凋亡、遷移、侵襲的影響。結(jié)果:通過臨床研究發(fā)現(xiàn),肺癌組織中miR-370的表達低于正常肺組織,并且miR-370高表達的肺癌患者在預后明顯好于miR-370低表達的患者;肺癌患者組織中miR-370與PIM1表達呈負相關(guān)。microRNA數(shù)據(jù)庫與功能分析軟件表明,miR-370可以與PIM1蛋白匹配,這一結(jié)果由雙熒光素報告實驗進一步證實。細胞實驗也發(fā)現(xiàn)正常肺部細胞中miR-370的含量遠高于兩種肺癌細胞中miR-370的含量,并且miR-370通過下調(diào)PIM1對肺癌細胞的活性、生長、遷移、侵襲等生物學行為均具有明顯的抑制作用,對肺癌細胞的凋亡具有顯著的促進作用。肺癌移植瘤裸鼠動物實驗的結(jié)果顯示:淫羊藿素能夠提升組織中miR-370水平、抑制PIM1表達,以此抑制肺癌瘤體積增長、促進肺癌荷瘤小鼠腫瘤細胞的凋亡。細胞實驗也證實了淫羊藿素能夠顯著地抑制肺癌細胞的活力、生長、遷移和侵襲,并促進肺癌細胞的凋亡,其抑制作用與提升miR-370和下調(diào)PIM1有關(guān)。結(jié)論:miR-370通過下調(diào)PIM1對肺癌具有的抑癌作用,淫羊藿素的肺癌抑制作用與提升miR-370和下調(diào)PIM1有關(guān)。
【學位授予單位】：吉林大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R734.2

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1 韓玲;淫羊藿素提升miR-370下調(diào)PIM1抑制肺癌的作用機制研究[D];吉林大學;2017年

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