本文關(guān)鍵詞：結(jié)直腸癌中CYP24A1異常表達的臨床意義及調(diào)控機制的研究　出處：《吉林大學(xué)》2017年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：目的:結(jié)直腸癌是人類常見的惡性腫瘤,其發(fā)病率居全球惡性腫瘤第三位,每年約有136萬新發(fā)病例,病死率居第四位,每年約有69萬人死于結(jié)直腸癌。近年來,結(jié)直腸癌發(fā)病率在我國呈上升趨勢,成為影響公眾健康的重大疾病。流行病學(xué)及實驗研究均表明,維生素D與結(jié)直腸癌的發(fā)病密切相關(guān)。維生素D可通過抗增殖,促分化,促凋亡,抑制血管生成,免疫調(diào)節(jié)等途徑發(fā)揮抗結(jié)直腸癌的作用,維生素D及其代謝通路正成為結(jié)直腸癌防治研究領(lǐng)域中的熱點。維生素D_3是維生素D最重要的形式,其活性代謝產(chǎn)物為1,25(OH)_2D_3。1,25(OH)_2D_3通過與VDR結(jié)合,調(diào)控多個基因表達,發(fā)揮抗腫瘤生物活性。CYP24A1是維生素D代謝過程中的限速酶,將25(OH)D_3,1,25(OH)_2D_3分別羥化為24,25(OH)_2D_3和1α,24,25(OH)_3D_3而失去生物學(xué)活性,在1,25(OH)_2D_3抗腫瘤作用中發(fā)揮至關(guān)重要的調(diào)節(jié)作用。研究表明,CYP24A1是一個潛在的癌基因,在乳腺癌、肺癌、食管癌等組織中異常表達且與腫瘤惡性程度及患者不良預(yù)后相關(guān),在某些類型腫瘤中CYP24A1異常表達受DNA甲基化的調(diào)控。目前,國內(nèi)外關(guān)于結(jié)直腸癌組織中CYP24A1及VDR表達情況的研究較少,CYP24A1及VDR的表達與結(jié)直腸癌患者臨床病理學(xué)指標(biāo)及預(yù)后之間的關(guān)聯(lián)性尚不明確,DNA甲基化是否能夠調(diào)控結(jié)直腸癌細胞中CYP24A1的表達也有待進一步闡明�；诖�,本研究擬通過實驗揭示在結(jié)直腸癌發(fā)病及進展過程中,VDR及CYP24A1表達與患者臨床病理學(xué)信息及預(yù)后的相關(guān)性,以及其表達的變化對1,25(OH)_2D_3抗結(jié)直腸癌功能的影響,同時,對CYP24A1在結(jié)直腸癌中表達的調(diào)控機制進行探討,闡明DNA甲基化在調(diào)控結(jié)直腸癌細胞CYP24A1表達中的作用。方法:(1)根據(jù)結(jié)直腸癌的自然演變過程,系統(tǒng)收集正常、癌前病變及癌組織,包括57例正常腸粘膜、12例腸腺瘤、99例腸癌組織,構(gòu)建組織芯片,通過免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測VDR及CYP24A1表達水平的變化,探討其與患者臨床信息包括年齡、性別、腫瘤位置、腫瘤大小、分化程度、浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、血管浸潤、神經(jīng)浸潤以及預(yù)后信息的關(guān)聯(lián)性并進行統(tǒng)計分析;使用ELISA實驗方法對40例健康體檢者、12例腺瘤患者、46例結(jié)直腸癌患者的血清25(OH)D_3水平進行檢測;(2)在腸癌細胞系SW480、Caco2中,通過WST-1細胞增殖及細胞毒性檢測試劑盒分別檢測1,10,100,200n M四個劑量1,25(OH)_2D_3處理24h,48h,96h后,腫瘤細胞相對存活率的變化,通過RT-PCR檢測100n M 1,25(OH)_2D_3處理SW480、Caco2細胞系后VDR,CYP24A1 mRNA表達水平的變化;在Caco2細胞系中通過RNAi技術(shù)對CYP24A1基因表達進行干涉,通過WST-1試劑盒檢測干涉CYP24A1后1,25(OH)_2D_3對Caco2細胞增殖抑制作用的變化;(3)通過BSP實驗檢測5例結(jié)直腸癌組織及配對正常組織中CYP24A1啟動子區(qū)甲基化水平的差異,并通過5-氮雜-2-脫氧胞苷對結(jié)直腸癌細胞系SW480、Caco2進行去甲基化處理,通過RT-PCR比較處理前后細胞中CYP24A1基因mRNA表達水平的改變,此外,對Caco2細胞進行去甲基化處理后,通過RT-PCR檢測1,25(OH)_2D_3調(diào)控CYP24A1表達的變化,在組織和細胞層面研究DNA甲基化在CYP24A1基因表達中的調(diào)控作用。結(jié)果:(1)成功構(gòu)建了結(jié)直腸癌組織芯片并與免疫組織化學(xué)技術(shù)相結(jié)合檢測CYP24A1和VDR的表達。CYP24A1在腸癌、腺瘤、正常組織中的高表達率分別為69.7%、66.7%、21.1%,CYP24A1在腸癌組織中和腺瘤組織的表達均顯著高于正常組織,而腸癌及腺瘤組織中的表達尚不存在差異;VDR在腸癌、腺瘤、正常組織中高表達率分別為27.3%、58.3%、64.9%,VDR在腸癌中的高表達率顯著低于腺瘤組織和正常組織,腺瘤組織和正常組織中VDR的表達暫未發(fā)現(xiàn)差異。CYP24A1表達與腫瘤浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及血管浸潤情況密切相關(guān);VDR表達與腫瘤的浸潤深度相關(guān);(2)CYP24A1高表達組結(jié)直腸癌患者的總生存期及無病生存期顯著低于低表達組,Cox比例風(fēng)險回歸模型顯示,CYP24A1表達是結(jié)直腸癌無病生存期的獨立影響因素(HR=2.829,95%CI=(1.092-7.330),P=0.032)。VDR高表達組結(jié)直腸癌患者的總生存期及無病生存期與低表達組結(jié)直腸癌患者的總生存期及無病生存期無顯著性差異;(3)結(jié)直腸癌患者血清25(OH)D_3水平為非正態(tài)分布,其中位數(shù)為10.80ng/ml,四分位數(shù)間距為(4.58,28.21),腺瘤患者血清25(OH)D_3水平為63.29±32.95ng/ml,健康體檢者血清25(OH)D_3水平為67.91±33.26ng/ml。結(jié)直腸癌患者血清25(OH)D_3水平明顯低于健康對照組及腺瘤組,腺瘤組與健康對照組尚無差異。血清25(OH)D_3水平與CYP24A1的表達,在腺瘤患者中呈負相關(guān)(r=-0.614,P=0.034),在結(jié)直腸癌患者中暫無相關(guān)性。血清25(OH)D_3水平與VDR的表達,在結(jié)直腸癌及腸腺瘤患者中無相關(guān)性;(4)不同劑量1,25(OH)_2D_3作用于SW480細胞系、Caco2細胞系,在不同時間點觀察其抑制細胞增殖作用,結(jié)果發(fā)現(xiàn)100n M 1,25(OH)_2D_3作用于SW480細胞系,在48h時間點開始出現(xiàn)抑制增殖的作用,隨著作用時間的延長、劑量的增加,其抑制作用愈加明顯,而在各時間點Caco2細胞系中均未發(fā)現(xiàn)其抑制細胞增殖作用。經(jīng)檢測,Caco2細胞系中CYP24A1表達顯著高于SW480細胞系,在Caco2細胞系中干涉CYP24A1的表達后,結(jié)果發(fā)現(xiàn)100n M 1,25(OH)_2D_3作用于Caco2細胞系,在48h時間點出現(xiàn)抑制增殖的作用,細胞相對存活率變?yōu)閷φ战M的76.23%,與對照組相比具有統(tǒng)計學(xué)差異;(5)CYP24A1 mRNA表達與其啟動子區(qū)甲基化水平在正常腸粘膜組織和結(jié)直腸癌組織中無相關(guān)性(r=-0.483,P=0.226);在Caco2細胞系中,使用不同劑量DAC進行去甲基化處理后,各組細胞與對照組比較,CYP24A1 mRNA表達均增高,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義,而在SW480細胞系中未觀察到此作用。在Caco2細胞系中,經(jīng)DAC去甲基化處理后1,25(OH)_2D_3誘導(dǎo)CYP24A1表達增高的程度高于未經(jīng)DAC處理組,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)論:(1)CYP24A1在腸癌及腺瘤組織中表達升高,VDR在腸癌組織中的表達量低于腺瘤組織以及正常組織;CYP24A1高表達率在T3-T4期高于Tis-T2期,在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組高于未轉(zhuǎn)移組,血管浸潤組高于未發(fā)生浸潤組。VDR高表達率在Tis-T2期高于T3-T4期。(2)CYP24A1高表達與結(jié)直腸癌患者不良預(yù)后相關(guān),CYP24A1高表達者總生存期及無病生存期低于低表達者,Cox比例風(fēng)險回歸模型顯示,CYP24A1是無病生存期的獨立影響因素。(3)結(jié)直腸癌患者血清25(OH)D_3水平低于健康人群和腺瘤患者,在腺瘤患者中,CYP24A1的表達與血清25(OH)D_3水平呈負相關(guān)。(4)腸癌細胞中CYP24A1表達上調(diào)會影響1,25(OH)_2D_3的抗腫瘤活性,在Caco2細胞系中,抑制CYP24A1的表達將增強1,25(OH)_2D_3的抗腫瘤活性。(5)結(jié)直腸癌組織中CYP24A1 mRNA表達與CYP24A1啟動子區(qū)甲基化水平無相關(guān)性。但在特定細胞系中,DNA甲基化參與了CYP24A1表達的調(diào)控。
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R735.34

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9 章江;;監(jiān)測結(jié)直腸癌非常必要[J];國外醫(yī)學(xué)情報;2004年04期

10 郜文秀,楊艷芳,梁小波,李耀平,李佩珍;細胞粘附分子變異體在結(jié)直腸癌中的表達及預(yù)后[J];中國公共衛(wèi)生;2005年07期

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4 王錫山;;結(jié)直腸癌治療的困惑之我見[A];第九屆全國腫瘤轉(zhuǎn)移學(xué)術(shù)大會暨2011年黑龍江省醫(yī)學(xué)會腫瘤學(xué)年會報告集[C];2011年

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6 本報記者 孫剛;預(yù)防結(jié)直腸癌：請管住嘴[N];解放日報;2013年

7 上海市中醫(yī)醫(yī)院腫瘤科 侯鳳剛 副主任醫(yī)師;中醫(yī)藥在結(jié)直腸癌治療中的作用和特色[N];上海中醫(yī)藥報;2014年

8 李華虹 孫瑜淼 記者 李麗云 實習(xí)生 陰浩;專家呼吁：結(jié)直腸癌應(yīng)多學(xué)科規(guī)范化診療[N];科技日報;2014年

9 ;降低結(jié)直腸癌復(fù)發(fā)有新療法[N];人民日報;2003年

10 韓自力;新化療方案可高效治療結(jié)直腸癌[N];健康報;2007年

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1 孫鴻燕;結(jié)直腸癌中CYP24A1異常表達的臨床意義及調(diào)控機制的研究[D];吉林大學(xué);2017年

2 陳濤;MicroRNA-31/FIH-1調(diào)控關(guān)系在結(jié)直腸癌發(fā)生發(fā)展中的作用及其機制研究[D];復(fù)旦大學(xué);2014年

3 任翡;MYBL2基因在結(jié)直腸癌的表達及機制的初步探討[D];復(fù)旦大學(xué);2014年

4 吳朋;結(jié)直腸癌中microRNA-615基因甲基化及其生物學(xué)特性探究[D];復(fù)旦大學(xué);2014年

5 李澤武;MicroRNA-203靶向ZNF217基因調(diào)控結(jié)直腸癌生物學(xué)行為的研究[D];山東大學(xué);2015年

6 徐興遠;低分子肝素對結(jié)直腸癌患者預(yù)后的影響及相關(guān)機制的研究[D];復(fù)旦大學(xué);2014年

7 梁洪亮;miR-454在結(jié)直腸癌中的功能及其作用機制[D];山東大學(xué);2015年

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9 珠珠;云南省Lynch綜合征候選基因標(biāo)志物研究[D];昆明醫(yī)科大學(xué);2014年

10 周智航;SEMA3F通過下調(diào)ASCL2-CXCR4軸而抑制結(jié)直腸癌轉(zhuǎn)移的分子機制[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2015年

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1 顏斐斐;術(shù)后結(jié)直腸癌患者癌因性疲乏與影響因素的研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2009年

2 李斌;結(jié)直腸癌患者就診延遲分析[D];中南大學(xué);2009年

3 葉建杰;慈溪市結(jié)直腸癌危險因素病例對照研究[D];浙江大學(xué);2008年

4 趙波;結(jié)直腸癌危險因素及臨床流行病學(xué)特征的調(diào)查與分析[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2013年

5 宋艷敏;PAQR3基因甲基化水平與結(jié)直腸癌關(guān)系的研究[D];河北大學(xué);2015年

6 黎江;Oct4B1在結(jié)直腸癌干細胞中的表達及其與Twist的相關(guān)性研究[D];遵義醫(yī)學(xué)院;2015年

7 楊文婷;PD-L1、SIRT1在結(jié)直腸癌組織中的表達及意義[D];福建醫(yī)科大學(xué);2015年

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本文編號：1317536