本文關(guān)鍵詞：人胚胎干細(xì)胞來源視網(wǎng)膜前體細(xì)胞生物學(xué)特性的實(shí)驗(yàn)研究　出處：《鄭州大學(xué)》2017年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：背景:視網(wǎng)膜變性疾病(retinal degeneration,RD)是一類以視網(wǎng)膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)細(xì)胞或/和視網(wǎng)膜光感受器細(xì)胞功能異常而引起視網(wǎng)膜光感受器細(xì)胞凋亡為病理改變的致盲性眼病。RD的治療包括細(xì)胞移植、基因治療、藥物治療和人工視網(wǎng)膜假體等。眼部細(xì)胞移植具有可操控性,效果易于評價(jià),是國內(nèi)外研究的熱點(diǎn)。視網(wǎng)膜前體細(xì)胞(retinal precursor cell,RPC)、誘導(dǎo)多潛能干細(xì)胞(induced pluripotent stem cell,iPSC)、胚胎干細(xì)胞(embryonic stem cell,ESC)等多種來源的種子細(xì)胞用于移植至RD動物模型視網(wǎng)膜下腔,以觀察細(xì)胞移植治療視網(wǎng)膜變性疾病的效果。組織特異性來源的RPC在體外可懸浮或貼壁培養(yǎng),有一定的增殖能力和分化能力,移植至RD動物模型的視網(wǎng)膜下腔后可在一定程度上延緩視網(wǎng)膜變性的發(fā)展和改善視網(wǎng)膜功能。然而,組織特異性來源RPC來源局限,限制了其作為臨床轉(zhuǎn)化細(xì)胞的應(yīng)用。iPSC可經(jīng)患者自身成熟細(xì)胞誘導(dǎo)而來,具有較強(qiáng)的增殖能力和分化能力,在一定程度上減少了免疫排斥問題,將其來源的RPC移植至視網(wǎng)膜變性動物模型的視網(wǎng)膜下腔,可在一定程度上延緩視網(wǎng)膜變性的發(fā)展和改善視網(wǎng)膜功能。但是iPSC的轉(zhuǎn)化效率較低,增加了其作為移植細(xì)胞的成本和難度。目前,經(jīng)美國食品與藥品管理局(Food and Drug Administration,FDA)批準(zhǔn),人胚胎干細(xì)胞(human embryonic stem cell,hESC)來源的RPE細(xì)胞可用于Stargardt病和干性年齡相關(guān)性黃斑變性(Age-related Macular Degeneration,AMD)的Ⅰ/Ⅱ期臨床實(shí)驗(yàn),研究結(jié)果顯示在平均22月的隨訪中,移植細(xì)胞可以改善或維持部分患者的視功能,沒有發(fā)現(xiàn)異常增殖。本研究選擇用hESC作為研究對象,擬利用人胚胎干細(xì)胞來源的視網(wǎng)膜前體細(xì)胞作為移植細(xì)胞觀察其對RD的治療作用。本研究共分為三部分:第一部分:檢測本實(shí)驗(yàn)室hesc的干性特征和增殖能力。第二部分:由hesc定向向視網(wǎng)膜前體細(xì)胞誘導(dǎo)分化,并對誘導(dǎo)分化過程中各個(gè)階段用細(xì)胞免疫熒光(immunocytochemistry,icc),流式細(xì)胞術(shù)(flowcytometry,fcm)和細(xì)胞周期檢測等方法進(jìn)行鑒定,了解hesc在體外分化的生物學(xué)特性,明確適合于眼部移植細(xì)胞的發(fā)育階段。人胚胎干細(xì)胞作為臨床轉(zhuǎn)化細(xì)胞的一個(gè)重大問題是其具有致瘤性。由于胚胎干細(xì)胞的無限增殖能力,其在宿主體內(nèi)可能會無限增殖而致瘤。階段特異性胚胎表面抗原(stage-specificembryonicantigens,ssea)是胚胎干細(xì)胞的特異性標(biāo)記物,在人胚胎干細(xì)胞中表達(dá)為階段特異性胚胎表面抗原4(stage-specificembryonicantigen4,ssea4)。因此,為了降低hesc來源的細(xì)胞在宿主體內(nèi)的致瘤性,本實(shí)驗(yàn)在進(jìn)行細(xì)胞移植前,擬采用流式細(xì)胞分選術(shù)(fluorescence-activatedcellsorting,facs),用反向選擇的方法,將誘導(dǎo)分化過程中殘留的ssea4陽性的人胚胎干細(xì)胞排除,選擇ssea4陰性的hesc來源rpc作為移植細(xì)胞,檢測移植細(xì)胞的致瘤風(fēng)險(xiǎn)。第三部分:在第二部分的基礎(chǔ)上,借助流式細(xì)胞分選術(shù),將hesc來源的視網(wǎng)膜前體細(xì)胞用反向選擇的方法排除ssea4陽性的細(xì)胞。將篩選的ssea4陰性的視網(wǎng)膜前體細(xì)胞移植至視網(wǎng)膜變性疾病動物模型皇家外科學(xué)院(royalcollegeofsurgeon,rcs)大鼠視網(wǎng)膜下腔,以評估hesc來源的rpc移植治療視網(wǎng)膜變性疾病的效果;同時(shí),將hesc來源的rpc移植至嚴(yán)重聯(lián)合免疫缺陷小鼠皮下,以評估其安全性,為hesc向臨床轉(zhuǎn)化治療rd提供理論依據(jù)。第一部分人胚胎干細(xì)胞的培養(yǎng)鑒定及擬胚體的形成目的:檢測人胚胎干細(xì)胞的干性標(biāo)記和增殖能力;探索適合于本研究的擬胚體(embryonicbody,eb)形成方法。方法:體外培養(yǎng)人胚胎干細(xì)胞株h1,采用細(xì)胞免疫熒光染色、流式細(xì)胞檢測術(shù)、細(xì)胞周期檢測和細(xì)胞增殖曲線繪制等方法對人胚胎干細(xì)胞標(biāo)記物ssea4及細(xì)胞株h1的增殖能力進(jìn)行鑒定。比較懸浮培養(yǎng)法、懸滴培養(yǎng)法及aggrewelltm400培養(yǎng)板培養(yǎng)法形成的擬胚體的數(shù)量和大小。結(jié)果:1.體外培養(yǎng)的單個(gè)人胚胎干細(xì)胞特點(diǎn):體積小,核大,核與細(xì)胞質(zhì)的比例高。細(xì)胞集落特點(diǎn)為界限清晰,中心區(qū)發(fā)亮。2.流式細(xì)胞術(shù)檢測結(jié)果表明,不同代數(shù)p42、p47和p52人胚胎干細(xì)胞ssea4陽性比例分別為97.88±2.21%,98.04±1.85%和98.00±2.02%,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。細(xì)胞免疫熒光染色數(shù)據(jù)分析結(jié)果顯示,p42、p47和p52人胚胎干細(xì)胞ssea4陽性比例分別為97.22±2.11%,96.37±3.55%和96.33±3.44%,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。3.流式細(xì)胞術(shù)及細(xì)胞免疫熒光染色檢測細(xì)胞增殖標(biāo)記物ki67的陽性表達(dá)率,分別為98.50±3.01%和99.60±1.80%。細(xì)胞周期檢查結(jié)果顯示,66.24±3.27%細(xì)胞處于細(xì)胞周期的增殖期(g2/m和s期)。增殖曲線顯示hesc在傳代培養(yǎng)第5天達(dá)到增殖平臺期,細(xì)胞可增殖30倍以上。4.以種1ml細(xì)胞重懸液所形成eb數(shù)量來計(jì)算,懸滴培養(yǎng)法得到小直徑eb數(shù)量為0.33±0.58,中等大小eb數(shù)量為37.33±0.58,大直徑eb數(shù)量為0.67±0.58,中等大小eb數(shù)量與所形成的小直徑eb數(shù)量相比較具有明顯差異(p0.001),與大直徑eb數(shù)量相比較具有明顯差異(p0.001),小直徑eb數(shù)量與大直徑eb數(shù)量相比較差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義((p0.05)。懸浮培養(yǎng)法得到的小直徑eb數(shù)量為323.33±25.17,中等大小eb數(shù)量為348.33±25.66,大直徑eb數(shù)量為373.68±15.14,中等大小eb數(shù)量與小直徑eb數(shù)量相比較差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05),與大直徑eb數(shù)量相比較差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05),小直徑eb數(shù)量與大直徑eb數(shù)量相比較沒有明顯差異(p0.05)。用aggrewelltm400培養(yǎng)板培養(yǎng)方法,我們得到的小直徑eb數(shù)量為74.33±5.86,中等大小eb數(shù)量為906.68±60.28,大直徑eb數(shù)量為66.33±5.51,中等大小eb數(shù)量與小直徑eb數(shù)量相比較具有明顯差異(p0.001),與大直徑eb數(shù)量相比較具有明顯差異(p0.001),小直徑eb數(shù)量與大直徑eb數(shù)量相比較差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義((p0.05)。懸滴培養(yǎng)法及aggrewelltm400培養(yǎng)板培養(yǎng)法所形成eb直徑大小相對均一。三種方法均以種細(xì)胞1ml細(xì)胞重懸液所形成eb數(shù)量來計(jì)算。懸滴培養(yǎng)法形成總eb數(shù)量為38.33±0.58;懸浮培養(yǎng)法形成的總eb數(shù)量為1045.33±62.32,與懸滴培養(yǎng)法所形成eb數(shù)量相比較,具有明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p0.001);aggrewelltm400培養(yǎng)板培養(yǎng)法所形成的eb數(shù)量約為1047.33±51.39,與懸滴法培養(yǎng)所形成eb數(shù)量相比較,具有明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p0.001),與懸浮培養(yǎng)法所形成總的eb數(shù)量相比較,沒有明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p0.05)。懸浮培養(yǎng)法與aggrewelltm400培養(yǎng)板培養(yǎng)法所形成擬胚體數(shù)量較大,與懸滴培養(yǎng)法相比較具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.001)。結(jié)論:1.人胚胎干細(xì)胞株h1具有傳代穩(wěn)定性,能夠維持人胚胎干細(xì)胞的增殖能力。2.懸滴培養(yǎng)、懸浮培養(yǎng)或aggrewelltm400培養(yǎng)板培養(yǎng)等方法均可形成eb,懸浮培養(yǎng)方法形成的eb具有數(shù)量大的優(yōu)點(diǎn),但是eb大小不均一;懸滴培養(yǎng)方法形成的eb具有大小均一的優(yōu)點(diǎn),但是數(shù)量相對有限;aggrewelltm400培養(yǎng)板的方法所形成的eb具有數(shù)量多,大小均一的優(yōu)點(diǎn)。因此,本實(shí)驗(yàn)選擇aggrewelltm400培養(yǎng)板形成eb的方法。第二部分人胚胎干細(xì)胞向視網(wǎng)膜前體細(xì)胞的定向分化目的:探索hesc在體外高效定向誘導(dǎo)分化為視網(wǎng)膜前體細(xì)胞的方法。方法:首先我們用aggrewelltm400培養(yǎng)板培養(yǎng)法將hesc在體外形成eb,然后將eb懸浮培養(yǎng)3天后換用視網(wǎng)膜前體細(xì)胞培養(yǎng)基貼壁培養(yǎng),在培養(yǎng)的第10天,在視網(wǎng)膜前體細(xì)胞培養(yǎng)基中添加t3和taurine。在誘導(dǎo)分化培養(yǎng)的第0天、10天、20天、30天及40天,對分化細(xì)胞的形態(tài)和細(xì)胞標(biāo)記物等進(jìn)行鑒定。結(jié)果:1.hesc的細(xì)胞周期時(shí)相為g0/g1期占40.81±4.44%,s期占36.25±3.91%,g2/m期占22.95±3.21%;誘導(dǎo)分化第10天,g0/g1期、s器和g2/m期細(xì)胞分別占67.49±2.75%、19.38±3.25%和13.12±5.08%;誘導(dǎo)分化第20天,g0/g1期、s器和g2/m期細(xì)胞分別占80.70±1.59%、9.43±0.73%和9.87±0.97%;誘導(dǎo)分化第30天,g0/g1期、s器和g2/m期細(xì)胞分別占81.53±2.76%、6.23±1.54%和12.24±4.31%;誘導(dǎo)分化第40天,g0/g1期、s器和g2/m期細(xì)胞分別占88.89±1.45%、5.74±1.20%和5.37±1.16%。同一細(xì)胞周期時(shí)相與hesc的數(shù)據(jù)相比較,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.001)。2.流式細(xì)胞術(shù)及細(xì)胞免疫熒光檢測顯示hesc中ki67的陽性表達(dá)率為98.70±0.92%,在分化培養(yǎng)的第10天、20天、30天及40天,ki67的陽性率分別為86.40±5.54%,44.23±3.29%,15.10±4.32%,7.87±1.69%。細(xì)胞免疫熒光檢測結(jié)果,分化第0天、10天、20天、30天和40天ki67的陽性表達(dá)率分別為97.70±0.92%,91.40±3.63%,42.90±2.52%,13.77±2.28%和7.20±2.39%。分化培養(yǎng)第10天與未分化狀態(tài)相比較,ki67表達(dá)量下降,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.01);分化培養(yǎng)第20天與分化培養(yǎng)第10天相比較,ki67表達(dá)量下降,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.001);分化培養(yǎng)第30天,與分化培養(yǎng)第20天相比較,ki67表達(dá)量下降,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.001);分化培養(yǎng)的第40天,與分化培養(yǎng)第30天的細(xì)胞相比較ki67的表達(dá)量下降(p0.05)3.hesc的標(biāo)記物ssea4在細(xì)胞未分化時(shí)表達(dá)率為98.80±1.02%,在分化的第10天、20天、30天和40天,ssea4的陽性率分別為48.80±4.20%,7.64±1.13%,2.21±0.79%,0.93±0.44%,與前一個(gè)時(shí)間點(diǎn)相比較,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.01)。4.流式細(xì)胞術(shù)檢測,在誘導(dǎo)分化第0天、10天、20天、30天和40天,pax6的表達(dá)量分別為0.63±0.16%,34.73±2.10%,45.63±2.94%,30.97±2.12%,12.23±2.79%;sox2的表達(dá)量分別為0.40±0.27%,49.07±4.51%,69.47±4.58%,17.20±2.82%,11.10±1.99%;rax的表達(dá)量分別為0.31±0.18%,66.70±6.98%,46.77±6.69%,11.33±2.53%,9.70±1.87%;nestin的表達(dá)量分別為0.61±0.26%,82.10±6.86%,69.20±5.47%,23.00±6.06%,6.90±2.46%。免疫熒光半定量分析,在分化的第0天、10天、20天、30天和40天,pax6的表達(dá)量分別為0%,35.73±5.10%,44.69±4.38%,28.96±3.51%,11.69±3.58%;sox2的表達(dá)量分別為0%,50.88±3.42%,67.68±3.52%,18.34±3.12%,12.29±2.03%;rax的表達(dá)量分別為0%,65.68±7.15%,48.03±6.58%,10.24±2.47%,10.05±2.03%;nestin的表達(dá)量分別為0%,80.12±7.03%,67.20±5.64%,22.35±5.87%,7.09±2.74%。與前一個(gè)時(shí)間點(diǎn)相比較,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。5.在誘導(dǎo)分化0天、10天、20天、30天和40天,流式細(xì)胞術(shù)檢測otx2表達(dá)量分別為0.49±0.16%,9.93±2.01%,65.40±5.57%,39.20±3.70%,21.10±3.89%;免疫熒光染色otx2表達(dá)量分別為0.49±0.16%,3.27±1.46%,61.07±3.45%,39.33±3.67%和21.67±4.33%。光感受器前體細(xì)胞標(biāo)記物crx在分化第20天時(shí)檢測到有表達(dá),流式細(xì)胞術(shù)檢測結(jié)果為8.17±1.48%,隨后表達(dá)量逐漸增多,在分化第30天及40天時(shí)表達(dá)量分別為35.07±2.40%和49.30±5.10%。流式細(xì)胞術(shù)檢測結(jié)果顯示視網(wǎng)膜光感受器細(xì)胞標(biāo)記物recoverin在分化的第0天、10天、20天、30天和40天的陽性表達(dá)率分別為0.24±0.18%,0.72±0.55%,6.77±0.95%,16.49±1.99%和24.14±3.04%。結(jié)論:1.hesc在誘導(dǎo)分化的過程中,細(xì)胞增殖能力逐漸下降。2.懸浮培養(yǎng)和貼壁培養(yǎng)相結(jié)合的方法,通過添加誘導(dǎo)因子,可以將hesc誘導(dǎo)為視網(wǎng)膜前體細(xì)胞和視網(wǎng)膜光感受器前體細(xì)胞。3.誘導(dǎo)分化第20天的細(xì)胞主要為視網(wǎng)膜前體細(xì)胞,我們選擇誘導(dǎo)分化第20天的細(xì)胞進(jìn)行下一步的實(shí)驗(yàn)。第三部分人胚胎干細(xì)胞來源視網(wǎng)膜前體細(xì)胞治療視網(wǎng)膜變性疾病的有效性及安全性研究目的:探討hesc來源的視網(wǎng)膜前體細(xì)胞移植至rcs大鼠視網(wǎng)膜下腔后的存活、遷移能力,及對視網(wǎng)膜結(jié)構(gòu)和功能的影響,并進(jìn)行安全性檢測。方法:根據(jù)本實(shí)驗(yàn)第二部分的結(jié)果,我們選擇體外分化培養(yǎng)第20天的細(xì)胞,用流式細(xì)胞分選術(shù)篩選ssea4陰性細(xì)胞,并用cm-dil標(biāo)記,將其移植入出生后3周的rcs大鼠視網(wǎng)膜下腔,對移植后第4周、8周和12周視網(wǎng)膜下腔及外核層存活的細(xì)胞數(shù)量進(jìn)行計(jì)數(shù);對細(xì)胞治療組、偽手術(shù)組和野生型大鼠組在細(xì)胞移植后第4周、8周和12周的視網(wǎng)膜進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色(immunohistochemistry,ihc),并測量視網(wǎng)膜外核層(outernuclearlayer,onl)厚度。同時(shí)對細(xì)胞移植組和偽手術(shù)組在移植手術(shù)進(jìn)行前1天,移植手術(shù)進(jìn)行后第4周、8周和12周的視網(wǎng)膜電圖(electroretinogram,erg)進(jìn)行檢測。將12只嚴(yán)重聯(lián)合免疫缺陷小鼠(severecombinedimmunedeficiency,scid)隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組和陽性對照組兩組,分別在腹股溝皮下注射hesc來源rpc和hesc,觀察是否有成瘤或其他病變。結(jié)果:1.移植術(shù)后第4周、8周和12周,移植細(xì)胞多位于穿刺點(diǎn)附件的視網(wǎng)膜下腔。移植術(shù)后第4周,視網(wǎng)膜輕度脫離;移植術(shù)后第8周,視網(wǎng)膜較移植后第4周時(shí)平伏,移植后第12周,視網(wǎng)膜較移植術(shù)后第8周時(shí)平伏。移植細(xì)胞在視網(wǎng)膜下腔可存活,并向外核層遷移。移植后第4周、8周及12周單個(gè)視野移植細(xì)胞的存活數(shù)量分別為7.77±0.97,5.87±0.42,4.33±0.61。單因素方差分析結(jié)果顯示移植后第4周、8周及12周,細(xì)胞的存活數(shù)量差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.01)。2.細(xì)胞治療組外核層厚度在移植后第4周、8周及12周分別為28.60±1.84μm,23.32±0.84μm,19.82±1.18μm,與偽手術(shù)組視網(wǎng)膜外核層厚度7.12±1.01μm,6.70±0.52μm,4.22±0.73μm相比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。野生型大鼠視網(wǎng)膜外核層厚度在同周齡分別為44.74±1.31μm,44.84±1.92μm,45.82±3.29μm。細(xì)胞治療組與野生型大鼠組相比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。3.細(xì)胞治療組在移植前,移植后第4周、8周和12周的ergb波幅值分別為76.51±1.60μv,72.47±8.03μv,44.37±10.77μv和8.40±1.99μv;偽手術(shù)組在移植前,移植后第4周、8周和12周ergb波幅值分別為77.28±2.33μv,39.08±3.88μv,18.20±5.51μv和6.13±0.86μv。移植手術(shù)進(jìn)行前及移植治療手術(shù)后第12周,細(xì)胞治療組與偽手術(shù)組ergb波波幅相比較,差異無無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05),移植治療手術(shù)后第4周及8周,細(xì)胞治療組與偽手術(shù)組ergb波波幅相比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。4.安全性實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示實(shí)驗(yàn)組和陽性對照組均未出現(xiàn)免疫排斥反應(yīng),實(shí)驗(yàn)組小鼠均未見畸胎瘤形成,陽性對照組出現(xiàn)畸胎瘤,發(fā)生率為33.3%。結(jié)論:1.人胚胎干細(xì)胞來源的視網(wǎng)膜前體細(xì)胞在RCS大鼠視網(wǎng)膜下腔可以存活、遷移,細(xì)胞的存活數(shù)量隨移植時(shí)間的延長而減少。2.人胚胎干細(xì)胞來源的視網(wǎng)膜前體細(xì)胞在一定程度上保護(hù)RCS大鼠視網(wǎng)膜結(jié)構(gòu),延緩視網(wǎng)膜外核層的變性、萎縮和視網(wǎng)膜光感受器細(xì)胞的凋亡。3.人胚胎干細(xì)胞來源的視網(wǎng)膜前體細(xì)胞對RCS大鼠的ERG結(jié)果有一定的改善作用。4.初步安全性實(shí)驗(yàn)未發(fā)現(xiàn)hESC來源的RPC具有致瘤性,安全性檢測尚需進(jìn)一步的研究。
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R774.1

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 ;我科學(xué)家育出人胚胎干細(xì)胞[J];發(fā)明與創(chuàng)新;2003年11期

2 耿嘉tD;;人胚胎干細(xì)胞核心轉(zhuǎn)錄調(diào)控途徑[J];國外醫(yī)學(xué)(計(jì)劃生育/生殖健康分冊);2006年04期

3 ;人胚胎干細(xì)胞轉(zhuǎn)化為肝細(xì)胞[J];現(xiàn)代醫(yī)院;2008年08期

4 ;最大人胚胎干細(xì)胞遺傳變異研究結(jié)果發(fā)布[J];生物醫(yī)學(xué)工程與臨床;2012年01期

5 石程;王承艷;沈浣;;人胚胎干細(xì)胞建系研究中的倫理管理[J];國際生殖健康/計(jì)劃生育雜志;2012年01期

6 謝蜀生;應(yīng)當(dāng)重視人胚胎干細(xì)胞的研究[J];科技導(dǎo)報(bào);2000年05期

7 胡顯文,陳昭烈,黃培堂;人胚胎干細(xì)胞的研究[J];生物技術(shù)通訊;2000年02期

8 徐令,黃紹良,李樹濃,吳旋;人胚胎成纖維細(xì)胞對人胚胎干細(xì)胞生長的作用[J];中國病理生理雜志;2001年01期

9 李濤,麥慶云,周燦權(quán),莊廣倫;人胚胎干細(xì)胞原代克隆生長及其傳代的研究[J];解剖學(xué)報(bào);2003年06期

10 孫博文;人胚胎干細(xì)胞建系和鑒定[J];生命科學(xué);2003年04期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 韋東;;人胚胎干細(xì)胞相關(guān)發(fā)明可專利性研究[A];發(fā)展知識產(chǎn)權(quán)服務(wù)業(yè)，，支撐創(chuàng)新型國家建設(shè)-2012年中華全國專利代理人協(xié)會年會第三屆知識產(chǎn)權(quán)論壇論文選編(第一部分)[C];2011年

2 吳應(yīng)積;FenhuaLuo;Aileen Lu;John W.McDanold;;間隙連接蛋白在人胚胎干細(xì)胞中的表達(dá)[A];第九次全國生殖生物學(xué)學(xué)術(shù)研討會論文摘要集[C];2003年

3 張麗瑞;李旭;陳葳;;人胚胎干細(xì)胞建系的方法學(xué)研究進(jìn)展[A];全國首屆動物生物技術(shù)學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2004年

4 羅向東;;人胚胎干細(xì)胞的分離培養(yǎng)及應(yīng)用前景[A];中華醫(yī)學(xué)會第六屆全國燒傷外科學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2001年

5 趙海軍;趙惠萍;林戈;周藥;劉天成;盧光t;;不同造血微環(huán)境對誘導(dǎo)人胚胎干細(xì)胞向造血干細(xì)胞分化的影響[A];第一屆中華醫(yī)學(xué)會生殖醫(yī)學(xué)分會、中國動物學(xué)會生殖生物學(xué)分會聯(lián)合年會論文匯編[C];2007年

6 龔玉萍;Tamihiro Kamata;Andrew D.Leavitt;;體外人胚胎干細(xì)胞造血/血管內(nèi)皮系統(tǒng)發(fā)育的研究[A];第11次中國實(shí)驗(yàn)血液學(xué)會議論文匯編[C];2007年

7 魯振宇;張?jiān)粕?王毅娜;羅海寧;杜ng瑞;;應(yīng)用人胚胎肺組織成纖維細(xì)胞飼養(yǎng)層培養(yǎng)人胚胎干細(xì)胞的研究[A];第一屆中華醫(yī)學(xué)會生殖醫(yī)學(xué)分會、中國動物學(xué)會生殖生物學(xué)分會聯(lián)合年會論文匯編[C];2007年

8 劉超;Su Guo;;人胚胎干細(xì)胞神經(jīng)外胚層分化研究[A];中國解剖學(xué)會2013年年會論文文摘匯編[C];2013年

9 陳彤;王征宇;DavidTScadden;陳彤;謝毅;;人胚胎干細(xì)胞向造血祖細(xì)胞誘導(dǎo)分化的研究[A];中華醫(yī)學(xué)會第八次全國血液學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2004年

10 裴海云;王韞芳;楊印祥;習(xí)佳飛;裴雪濤;;誘導(dǎo)人胚胎干細(xì)胞分化為肝細(xì)胞樣細(xì)胞[A];第11次中國實(shí)驗(yàn)血液學(xué)會議論文匯編[C];2007年

中國重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 記者 白毅;全球最大規(guī)模人胚胎干細(xì)胞遺傳變異研究成果發(fā)布[N];中國醫(yī)藥報(bào);2011年

2 記者 胡德榮;125株人胚胎干細(xì)胞株系將全球共享[N];健康報(bào);2012年

3 記者 徐瑞哲;為“細(xì)胞治療”進(jìn)入臨床鋪路[N];解放日報(bào);2012年

4 本版編輯邋海飛魚 Emily;人胚胎干細(xì)胞生成紅細(xì)胞輸血不用愁[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2008年

5 新華;視網(wǎng)膜自我修復(fù)研究有突破[N];福建科技報(bào);2007年

6 新訊;視網(wǎng)膜自我修復(fù)研究有突破[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2007年

7 玉淑 編譯;“ＯＴＸ２”基因控制視網(wǎng)膜視細(xì)胞生長[N];大眾科技報(bào);2003年

8 聞聲;英國：試驗(yàn)視網(wǎng)膜疾病基因療法[N];中國醫(yī)藥報(bào);2007年

9 保健時(shí)報(bào)實(shí)習(xí)記者 沈娜;讓我們的雙眸明亮依然[N];保健時(shí)報(bào);2013年

10 英文化;微型機(jī)器醫(yī)生執(zhí)行重大醫(yī)療任務(wù)[N];科技日報(bào);2004年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 邵敬芝;人胚胎干細(xì)胞來源視網(wǎng)膜前體細(xì)胞生物學(xué)特性的實(shí)驗(yàn)研究[D];鄭州大學(xué);2017年

2 許慧芳;人胚胎干細(xì)胞的優(yōu)化培養(yǎng)以及向神經(jīng)干細(xì)胞的分化研究[D];華中科技大學(xué);2009年

3 俞妍慧;組織因子在人胚胎干細(xì)胞誘導(dǎo)分化過程中表達(dá)及調(diào)控的研究[D];中南大學(xué);2013年

4 周兟;維持人胚胎干細(xì)胞不分化的鼠飼養(yǎng)層細(xì)胞標(biāo)準(zhǔn)化操作的建立與殘留的絲裂霉素C對人胚胎干細(xì)胞基因組穩(wěn)定性影響的研究[D];中南大學(xué);2009年

5 焦淑潔;血管內(nèi)皮生長因子在人胚胎干細(xì)胞神經(jīng)分化過程中的作用及相關(guān)機(jī)制研究[D];華中科技大學(xué);2009年

6 尹明;基于基因打靶技術(shù)的人胚胎干細(xì)胞向功能性肝細(xì)胞分化的研究[D];吉林大學(xué);2014年

7 劉雨瀟;人胚胎干細(xì)胞向造血細(xì)胞誘導(dǎo)分化的研究[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2008年

8 徐晨明;人胚胎干細(xì)胞建系及線粒體和細(xì)胞骨架的分布模式與胚胎干細(xì)胞分化關(guān)系的研究[D];浙江大學(xué);2008年

9 蘇位君;人胚胎干細(xì)胞來源內(nèi)皮細(xì)胞作為細(xì)胞載體對轉(zhuǎn)移性乳腺癌進(jìn)行靶向治療的研究[D];南開大學(xué);2012年

10 方貞付;人胚胎干細(xì)胞和兔胚胎干細(xì)胞的建系與鑒定[D];中國科學(xué)院研究生院（上海生命科學(xué)研究院）;2005年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 韋東;人胚胎干細(xì)胞相關(guān)發(fā)明可專利性研究[D];華東政法大學(xué);2011年

2 王丹;三氯乙烯抑制人胚胎干細(xì)胞向心肌分化的機(jī)制研究[D];蘇州大學(xué);2015年

3 吳一湘;酪氨酸促進(jìn)人胚胎干細(xì)胞向視網(wǎng)膜色素上皮高效分化的研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2015年

4 馬永賓;人胚胎干細(xì)胞源間充質(zhì)干細(xì)胞分泌的微囊泡對大鼠坐骨神經(jīng)損傷修復(fù)研究[D];江蘇大學(xué);2016年

5 李奇;人胚胎干細(xì)胞凍存體系的優(yōu)化及其向視網(wǎng)膜上皮細(xì)胞的分化研究[D];吉林大學(xué);2016年

6 鄭良棟;人胚胎干細(xì)胞抗腫瘤作用的體外初步研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2016年

7 呂林潔;人胚胎干細(xì)胞分化為可自我更新的神經(jīng)干細(xì)胞[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2016年

8 曾玉曉;二維和三維誘導(dǎo)的人胚胎干細(xì)胞來源RPE細(xì)胞的生物學(xué)特性比較研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2016年

9 韓兵;原始生殖細(xì)胞來源的人胚胎干細(xì)胞分離、培養(yǎng)與鑒定[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2004年

10 耿嘉tD;人胚胎干細(xì)胞建系相關(guān)影響因素研究[D];鄭州大學(xué);2007年

本文編號：1315564