本文關(guān)鍵詞：雷公藤甲素抑制前列腺腫瘤細胞增殖能力的分子機制研究　出處：《西北農(nóng)林科技大學(xué)》2017年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：Enzalutamide是用于治療去勢抵抗性前列腺癌(Castration-resistant Prostate Cancer,CRPC)的第二代雄激素受體(Androgen Receptor,AR)拮抗劑。但很遺憾,AR的功能性紊亂意味著患者最終會對enzalutamide產(chǎn)生耐藥性。這種功能性紊亂包括AR基因擴增,AR剪接突變體以及AR點突變等,因此急需開發(fā)新的藥物來治療這種難治性疾病。雷公藤甲素(Triptolide,TPL)是一種從中藥雷公藤(Tripterygium wilfordii Hook F.)中提取的主要活性化合物,由于其表現(xiàn)出抑制炎癥、囊腫、免疫抑制等多種生物活性,特別是TPL的抗腫瘤活性,使其成為藥物研究領(lǐng)域的研究熱點。已有研究表明TPL在前列腺癌細胞中具有抗癌活性。然而,TPL對CRPC細胞的影響和潛在機制仍處于未知階段。因此,本文主要以CRPC細胞為模型,研究TPL的抗癌活性以及作用機制,主要取得以下結(jié)果:1.通過Qg源和外源性報告基因?qū)嶒?結(jié)果表明低濃度TPL可以抑制AR-FL和AR-Vs(AR-V7和AR-V567es)的轉(zhuǎn)錄活性而不改變其蛋白質(zhì)水平。通過實時定量PCR以及western bloting技術(shù),檢測AR以及AR-Vs下游靶基因的mRNA水平以及PSA蛋白含量。結(jié)果表明TPL可以顯著抑制AR以及AR-Vs下游靶基因的表達,并能下調(diào)PSA的蛋白質(zhì)水平。2.通過使用CDK7選擇性抑制劑BS-181和染色質(zhì)免疫共沉淀技術(shù)分析TPL在AR S515磷酸化的作用機制。結(jié)果表明TPL下調(diào)pAR S515的蛋白質(zhì)水平,而對CDK7,XPB等一系列蛋白無影響。TPL可以顯著抑制AR結(jié)合到PSA啟動子以及RNA pol II,從而抑制AR轉(zhuǎn)錄活性。通過RNA干擾技術(shù)敲降XPB,發(fā)現(xiàn)其效果與TPL的作用相似。這些結(jié)果揭示TPL抑制AR轉(zhuǎn)錄活性是通過CDK7/XPB途徑抑制AR S515磷酸化得以實現(xiàn)。3.通過多種CRPC細胞模型檢測低濃度TPL的細胞毒性,結(jié)果表明低濃度TPL可以降低表達AR或AR-Vs的前列腺癌細胞的增殖能力,并誘導(dǎo)細胞凋亡。4.通過MTT實驗,細胞克隆形成實驗以及Western bloting實驗檢測TPL和enzalutamide的聯(lián)合作用效果。結(jié)果表明低濃度TPL與enzalutamide具有協(xié)同效應(yīng),在體外可以抑制CRPC細胞的增殖和克隆形成能力,誘導(dǎo)PARP和Caspase 3的切割。制作22Rv1異種移植瘤模型檢測兩者的體內(nèi)效果,發(fā)現(xiàn)在CRPC異種移植瘤模型中TPL提高了enzalutamide的抗癌效果。綜上所述,本研究的結(jié)果表明,TPL通過CDK7/XPB途徑抑制AR S515磷酸化從而抑制AR-FL和AR-Vs的轉(zhuǎn)錄活性。體內(nèi)和體外的實驗證實TPL是一個治療CRPC的潛在藥物,并可結(jié)合enzalutamide來治療CRPC。
【學(xué)位授予單位】：西北農(nóng)林科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R737.25

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本文編號：1315552