本文關(guān)鍵詞：基于體內(nèi)自組裝膠束形成機(jī)制的羊脂油對淫羊藿黃酮苷元抗骨質(zhì)疏松增效機(jī)理研究　出處：《南京中醫(yī)藥大學(xué)》2015年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：本文較全面地查閱了淫羊藿抗骨質(zhì)疏松藥效物質(zhì)基礎(chǔ)相關(guān)報(bào)道,總結(jié)淫羊藿中的多種活性黃酮的抗骨質(zhì)疏松作用及其作用強(qiáng)度。結(jié)合我們實(shí)驗(yàn)室十多年的研究基礎(chǔ),基于淫羊藿活性黃酮的體內(nèi)代謝,闡述了淫羊藿抗骨質(zhì)疏松的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)并非某一種黃酮化合物,即不僅有活性最強(qiáng)但吸收差較的淫羊藿黃酮苷元,又有活性較強(qiáng)且吸收較好的淫羊藿黃酮次糖苷。羊脂油(SO)炙淫羊藿,是一種傳統(tǒng)的炮制技術(shù),能增強(qiáng)淫羊藿的溫腎助陽作用,起到增強(qiáng)淫羊藿抗骨質(zhì)疏松作用。既然,淫羊藿黃酮苷元具有很強(qiáng)的抗骨質(zhì)疏松活性,我們就結(jié)合SO炮制工藝,基于體內(nèi)自組裝膠束形成機(jī)制考察淫羊藿炮制輔料SO對淫羊藿黃酮苷元(CIT、IT)的抗骨質(zhì)疏松增效機(jī)制。1.SO增強(qiáng)了淫羊藿黃酮苷元抗骨質(zhì)疏松作用,但其自身沒有抗骨質(zhì)疏松作用摘除雌性大鼠雙側(cè)卵巢,造骨質(zhì)疏松模型,每周記錄大鼠體重變化,最后一次給藥后,對大鼠眼眶取血,檢測大鼠血清中的血清羥脯氨酸(HOP)和堿性磷酸酶(AKP)、骨保護(hù)素(OPG)、骨鈣素(OCN)、核因子κB受體活化因子配基(RANKL)、抗酒石酸鹽酸性磷酸酶5b(TRACP-5b)。隨后,分別取出子宮、脛骨和股骨,并記錄股骨和子宮重量,右側(cè)股骨先檢測骨密度(BMD),再進(jìn)行3D-μCT掃描,最后進(jìn)行免疫印跡實(shí)驗(yàn)(western blot)。左側(cè)股骨進(jìn)行基因和蛋白表達(dá)實(shí)時(shí)定量(RT-PCR)。右側(cè)脛骨進(jìn)行三點(diǎn)彎曲實(shí)驗(yàn),考察生物力學(xué)性質(zhì)。左側(cè)脛骨進(jìn)行免疫組化實(shí)驗(yàn),考察相關(guān)因子的表達(dá)。研究發(fā)現(xiàn),CIT、IT均具有較好的抗骨質(zhì)疏松作用,加入SO后,能增強(qiáng)CIT、IT的抗骨質(zhì)疏松作用,但是SO本身未體現(xiàn)出抗骨質(zhì)疏松作用。因此,我們推測SO的增效作用可能是其具有促進(jìn)CIT、IT的吸收而發(fā)揮增效作用。2.抗骨質(zhì)疏松黃酮苷元的體內(nèi)吸收、分布、代謝和排泄(ADME)過程的初步研究CIT、IT均具有一定的抗骨質(zhì)疏松作用,為了后續(xù)研發(fā),我們采用高分辨率質(zhì)譜,分析了CIT、IT在大鼠體內(nèi)的代謝產(chǎn)物及其代謝途徑。結(jié)果,鑒定出了CIT的59個(gè)代謝產(chǎn)物,其中在血漿、膽汁、尿液、糞便中分別有23、13、17、6個(gè)代謝產(chǎn)物；鑒定出了IT的43個(gè)代謝產(chǎn)物,其中在血漿、膽汁、糞便中分別有12、14、17個(gè)代謝產(chǎn)物。CIT和IT在大鼠體內(nèi)均產(chǎn)生了大量的代謝產(chǎn)物,葡萄糖醛酸化和硫酸酯化是他們共同的代謝過程。黃酮或異黃酮結(jié)構(gòu)上羥基,是葡萄糖醛酸化和硫酸酯化的主要位點(diǎn),羥基數(shù)量越多可能增加他們的結(jié)合親和力,也可能影響到藥物在體內(nèi)的代謝速度和藥理作用的差別。在化學(xué)結(jié)構(gòu)上,IT具有3個(gè)酚羥基(C-3,C-5和C-7),而CIT有2個(gè)酚羥基(C-3,C-5)。由于這種差別的存在,CIT與IT也必將存在不同的藥理作用和藥效強(qiáng)度。3.SO的增效作用是其能促進(jìn)淫羊藿黃酮苷元的吸收,而發(fā)揮增效作用如果SO能促進(jìn)淫羊藿活性苷元(CIT、IT)的吸收,那么在SO的作用下,淫羊藿活性苷元(CIT、IT)的相對生物利用度應(yīng)有顯著提高。因此,緊接著采用血藥濃度法,監(jiān)測羊脂油作用下的CIT、IT的血藥濃度,并繪制大鼠口服后的濃度-時(shí)間變化曲線,計(jì)算藥動(dòng)學(xué)參數(shù),并評價(jià)SO對CIT、IT生物利用度的影響。加入SO組的CIT、IT的Cmax和AUC較單一的CIT、IT組均有顯著增加,SO的加入提高了CIT、IT的生物利用度。4.SO的促吸收作用是其所含大量的具有表面活性劑樣作用的脂肪酸類成分SO是來源于牛科動(dòng)物綿羊Ovis aries linnaeus或山羊Capra hircus linnaeus的脂肪油,含有豐富的無機(jī)元素和脂肪酸,這些豐富的脂肪酸均具有脂肪長鏈以及表面活性,這就與我們的前期研究相吻合。因此,我們采用GC-qMS分析聯(lián)用技術(shù)以及專業(yè)數(shù)據(jù)庫,全面分析了SO中脂肪酸組成,最終鑒定出了其中25種脂肪酸,并建立了同時(shí)測定SO中10種主要脂肪酸的分析方法。結(jié)果發(fā)現(xiàn),硬脂酸、棕櫚酸、油酸是SO中的主要脂肪酸類成分。此外,我們還采用ICP-MS分析技術(shù),建立了同時(shí)測定SO中14種無機(jī)元素含量的方法。這些工作對闡述SO中的化學(xué)組成,建立炮制輔料SO的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn),具有重要意義。5.SO中的脂肪酸類成分與機(jī)體分的泌膽酸鹽類成分共同作用,在體內(nèi)自組裝成納米混合膠束,并作為黃酮苷元的載體,而促進(jìn)苷元的吸收,體現(xiàn)增效作用SO中的脂肪酸在化學(xué)結(jié)構(gòu)上同時(shí)存在親水基和疏水基,即可能具有一定的表面活性及表面活性劑樣作用。再加上正常機(jī)體能分泌膽汁中的膽汁酸及其鹽類也是一種生物表面活性劑。當(dāng)CIT或IT與SO一同口服進(jìn)入體內(nèi)后,在SO自身富含的脂肪酸類成分及機(jī)體內(nèi)膽酸鹽的共同作用下,可自組裝形成一種混合納米膠束,并作為CIT或者1T的載體,而改善CIT或者IT的吸收,最終體現(xiàn)出增效作用。我們通過體外模擬,也證實(shí)了我們的假說：在SO與膽酸鹽的共同作用下,脂肪酸類成分與膽酸鹽能自組裝形成混合膠束,這種混合膠束能形成粒徑較小、粒子更穩(wěn)定的自組裝膠束。大鼠在體腸灌流實(shí)驗(yàn)表明,SO作用下與CIT、IT自組裝形成膠束后,改善了CIT、IT的滲透系數(shù),促進(jìn)了CIT、IT的腸吸收。綜上所述,SO之所以能夠增強(qiáng)淫羊藿黃酮苷元的抗骨質(zhì)疏松作用,是由于SO中含有大量的具有表面活性劑樣作用的脂肪酸類成分(硬脂酸、棕櫚酸、油酸),能與體內(nèi)的膽酸鹽類成分在體內(nèi)自組裝成膠束,并作為苷元的載體,促進(jìn)苷元的在體腸吸收而增效。
【學(xué)位授予單位】：南京中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R285.5

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：1315033