本文關(guān)鍵詞：葛根素對(duì)自發(fā)性高血壓大鼠血壓的干預(yù)作用及機(jī)制研究　出處：《中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院》2017年博士論文　論文類(lèi)型：學(xué)位論文

  更多相關(guān)文章： 葛根素 自發(fā)性高血壓大鼠 qPCR陣列 eNOS

【摘要】：心腦血管病是目前我國(guó)發(fā)病率、致殘率和死亡率最高的疾病,而高血壓是心腦血管病的主要危險(xiǎn)因素之一。高血壓病的發(fā)病機(jī)制復(fù)雜,有多種學(xué)說(shuō),如腎素血管緊張素醛固酮系統(tǒng)(renin-angiotensin-aldosterone system,RAAS)激活、交感神經(jīng)系統(tǒng)活性增強(qiáng)、腎性水鈉潴留、內(nèi)皮細(xì)胞功能損傷等是高血壓病主要學(xué)說(shuō)。血管內(nèi)皮細(xì)胞與平滑肌細(xì)胞構(gòu)成血管壁的主要部分,在維持血管張力及維持血管正常生理功能中至關(guān)重要,故本研究主要以主動(dòng)脈為載體,研究葛根素的降壓機(jī)制。近些年來(lái),越來(lái)越多的證據(jù)表明氧化應(yīng)激及其相關(guān)的氧化損傷是影響血管張力,參與高血壓病發(fā)生發(fā)展的主要原因之一。內(nèi)皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase,eNOS)主要由血管內(nèi)皮細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞分泌,是合成一氧化氮(nitricoxide,NO)的特異酶,在維持血管舒縮功能、抗氧化損傷、保護(hù)內(nèi)皮功能、抗血小板黏附聚集等多種生理病理過(guò)程中發(fā)揮作用。因此,研究eNOS及相關(guān)基因在降壓及血管保護(hù)中的作用,對(duì)于高血壓病的防治具有重要意義。近幾十年來(lái),高血壓病的發(fā)病機(jī)制及抗高血壓藥物研究取得了一定進(jìn)展,臨床常用降壓藥在降低血壓和防治靶器官損害等方面取得較好療效。但也存在一些不足,如副作用多、終身服藥、禁忌癥多、部分藥物聯(lián)合使用受限等使藥物的臨床應(yīng)用受到了一定限制,部分患者的血壓指標(biāo)不能令人滿(mǎn)意。中醫(yī)藥對(duì)高血壓病的研究取得了許多成果,得到了越來(lái)越多學(xué)者的關(guān)注,在調(diào)節(jié)機(jī)體整體平衡、控制血壓水平穩(wěn)定等方面發(fā)揮著獨(dú)特的優(yōu)勢(shì),其防治高血壓病作用的多效性、增效減副性、多靶點(diǎn)性、前瞻性、穩(wěn)定持久性均體現(xiàn)出了中醫(yī)藥特色。葛根始載于我國(guó)最早的中藥學(xué)著作《神農(nóng)本草經(jīng)》中,距今已有近2000年歷史�，F(xiàn)代中藥學(xué)在繼承前人經(jīng)驗(yàn)的基礎(chǔ)上,將葛根歸為解表藥,認(rèn)為其有解肌退熱、透疹、生津止渴、升陽(yáng)止瀉的作用。葛根素注射劑的上市及臨床應(yīng)用是一重大突破。藥理學(xué)發(fā)現(xiàn),葛根素注射液有降低心肌耗氧量、擴(kuò)張心腦血管、增強(qiáng)心肌收縮、改善微循環(huán)等功效,在冠心病、心肌缺血再灌注損傷、缺血性腦卒中、高血壓病、老年性癡呆等心腦血管疾病的治療中均發(fā)揮有效作用。本研究以自發(fā)性高血壓大鼠為模型,主要研究葛根素注射液的降壓機(jī)制。實(shí)驗(yàn)在第一部分借助qPCR陣列批量、精確的優(yōu)勢(shì),初步篩選葛根素降壓有效靶點(diǎn)。結(jié)果提示葛根素降壓機(jī)制與增加eNOS活性、激活eNOS/cGMP通路密切相關(guān)。基于此,為進(jìn)一步研究影響eNOS活性的因素,在實(shí)驗(yàn)第二部分,首先借助網(wǎng)絡(luò)數(shù)據(jù)庫(kù),檢索并得到與eNOS相關(guān)的基因,之后借助qPCR陣列技術(shù),進(jìn)一步研究葛根素降壓及血管保護(hù)機(jī)制。本研究分為兩部分:文獻(xiàn)綜述和實(shí)驗(yàn)研究。1文獻(xiàn)綜述:該部分從葛根的古今研究進(jìn)展、葛根素防治高血壓病的臨床和基礎(chǔ)研究進(jìn)展、高血壓與氧化應(yīng)激三部分進(jìn)行綜述。2實(shí)驗(yàn)研究:包括以下兩部分:研究一葛根素對(duì)自發(fā)性高血壓大鼠血壓的干預(yù)作用及機(jī)制初探目的:探討葛根素對(duì)自發(fā)性高血壓大鼠血壓的干預(yù)作用及機(jī)制。方法:60只自發(fā)性高血壓大鼠隨機(jī)分為模型組(生理鹽水,腹腔注射給藥)、氯沙坦鉀組(每天按32.5mg.Kg-1灌胃給藥)、常規(guī)劑量葛根素組(每天按40mg·kg-1腹腔注射)和高劑量葛根素組(每天按80mg·kg-1腹腔注射),以Wistar-Kyoto(WKY)大鼠做為正常對(duì)照組(生理鹽水,腹腔注射給藥),每組15只,連續(xù)給藥10周。每周對(duì)大鼠收縮壓、舒張壓及心率進(jìn)行檢測(cè)。超聲心動(dòng)圖檢測(cè)大鼠主動(dòng)脈內(nèi)徑及心功能,以HE染色、馬松染色觀察藥物對(duì)大鼠主動(dòng)脈病理組織形態(tài)學(xué)影響,并檢測(cè)大鼠血漿腎素-血管緊張素Ⅱ-醛固酮水平,以qPCR陣列技術(shù)檢測(cè)主動(dòng)脈高血壓相關(guān)基因mRNA水平的變化,繼而借助String及KEGG Pathway數(shù)據(jù)庫(kù)對(duì)差異基因進(jìn)行網(wǎng)絡(luò)分析。用酶聯(lián)免疫吸附法和免疫蛋白印跡技術(shù)驗(yàn)證目的基因在蛋白水平的變化。結(jié)果:模型組收縮壓、舒張壓較對(duì)照組明顯升高(P0.001);與模型組比較,高劑量葛根素組、氯沙坦鉀組收縮壓、舒張壓均顯著降低(P0.05或P0.01);給藥9周后,模型組心率較對(duì)照組明顯增加(P0.05),高劑量、常規(guī)劑量葛根素組心率與模型組比較明顯降低(P0.01),氯沙坦鉀組心率未見(jiàn)明顯變化(P0.05)。模型組主動(dòng)脈內(nèi)徑較對(duì)照組明顯增寬(P0.001);氯沙坦鉀組主動(dòng)脈內(nèi)徑較模型組顯著變窄(P0.05),葛根素組較模型組未見(jiàn)明顯差異(P0.05),但有減小趨勢(shì)。模型組EF值、FS值較對(duì)照組均明顯降低(P0.01);葛根素高劑量、常規(guī)劑量組EF、FS值較模型組明顯升高(P0.001),氯沙坦鉀組較模型組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。模型組大鼠主動(dòng)脈內(nèi)中膜厚度較對(duì)照組明顯增加(P0.001);與模型組比較,氯沙坦鉀組、葛根素高劑量、葛根素常規(guī)劑量組內(nèi)中膜厚度均顯著降低(P0.001)。模型組血漿腎素、血管緊張素ⅡI水平與對(duì)照組比較均未見(jiàn)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);常規(guī)劑量、高劑量葛根素組血管緊張素Ⅱ水平較模型組顯著降低(P0.05或P0.01),且較氯沙坦鉀組降低更為明顯(P0.01);氯沙坦鉀組血管緊張素Ⅱ水平較模型組升高(P0.05);與模型組比較,給藥組均能顯著降低大鼠血漿中腎素水平(P0.01);各組間醛固酮水平未見(jiàn)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。對(duì)qPCR陣列篩選得到的18個(gè)差異表達(dá)基因進(jìn)行網(wǎng)絡(luò)分析發(fā)現(xiàn),eNOS與Cav1、Agtr1b關(guān)系密切;此外,Adrb1、Agtr1b、Gucy 1 a3、Gucy 1 b3、Kcnmal、Mylk、Mylk3、eNOS、Pde3a、Pde5a 均參與 cGMP/PKG通路的活化;Agtr1b、Gucy1a3、Gucy1b3、Kcnmal、Mylk、Mylk3、Ptgir 參與血管平滑肌收縮;Gucy1a3、Gucy1b3、Mylk、Mylk3、eNOS、Ptgir 均與血小板活化有關(guān)。用酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)血清中cGMP、PGI2水平,發(fā)現(xiàn)模型組血清中cGMP、PGI2水平較對(duì)照組均明顯下降(P0.05);與模型組相比,氯沙坦鉀組、高劑量及常規(guī)劑量葛根素組cGMP、PGI2水平均明顯升高(P0.01或P0.001)。免疫蛋白印跡技術(shù)發(fā)現(xiàn),模型組p-eNOS水平較對(duì)照組明顯降低(P0.01);與模型組比較,高劑量葛根素組p-eNOS水平明顯升高(P0.05),氯沙坦鉀組無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)意義,但較模型組有升高趨勢(shì)(P0.05)。各組eNOS總蛋白表達(dá)量無(wú)明顯差異(P0.05)。模型組Agtr1蛋白表達(dá)量較對(duì)照組明顯升高(P0.01),氯沙坦鉀、高劑量葛根素干預(yù)后能明顯降低主動(dòng)脈Agtr1蛋白水平(P0.01)。各組間Agtr2蛋白水平無(wú)明顯差異(P0.05)。結(jié)論:葛根素降低自發(fā)性高血壓大鼠血壓,其機(jī)制與增加eNOS活性密切相關(guān)。葛根素通過(guò)下調(diào)Cav1、Agtr1b表達(dá)量,影響eNOS活性,此外eNOS/cGMP通路參與葛根素對(duì)血壓的調(diào)節(jié)。研究二基于eNOS相關(guān)基因,進(jìn)一步探討葛根素的降壓機(jī)制目的:基于eNOS在血壓調(diào)控中的作用,探討葛根素對(duì)主動(dòng)脈的保護(hù)作用及機(jī)制。方法:自發(fā)性高血壓大鼠隨機(jī)分組后,分別給藥葛根素和氯沙坦鉀,連續(xù)給藥10周后,以生化法檢測(cè)大鼠血清中NO、MDA、O2..水平及SOD含量,酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)大鼠血清中eNOS水平,以qPCR陣列技術(shù)檢測(cè)主動(dòng)脈eNOS互作基因的變化,繼而借助String及KEGGPathway數(shù)據(jù)庫(kù)對(duì)差異基因進(jìn)行網(wǎng)絡(luò)分析,并檢測(cè)目的基因蛋白水平變化。結(jié)果:給藥10周后,模型組血清NO水平較對(duì)照組顯著降低(P0.001),高劑量葛根素組、氯沙坦鉀組大鼠NO水平較模型組顯著升高(P0.01或P0.001)。與對(duì)照組比較,模型組MDA水平明顯升高(P0.001);與模型組比較,常規(guī)劑量、高劑量葛根素組和氯沙坦鉀組MDA水平明顯降低(P0.01或P0.001)。模型組O2-·水平較對(duì)照組顯著升高(P0.001),給藥組各組間O2-·水平較模型組無(wú)明顯差異(P0.05),但有降低趨勢(shì)。各組間SOD含量較模型組無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。模型組血清e(cuò)NOS水平較對(duì)照組明顯降低(P0.001),與模型組比較,氯沙坦鉀組、高劑量葛根素組及常規(guī)劑量葛根素組eNOS水平明顯增加(P0.001或P0.01)。對(duì)qPCR陣列篩選得到的12個(gè)差異表達(dá)基因進(jìn)行網(wǎng)絡(luò)分析發(fā)現(xiàn),eNOS與HSP90β1、Cav1關(guān)系密切。此外,葛根素還影響Decr1、Gpx2、Prdx5、Prdx3等氧化酶的表達(dá),參與PI3K/Akt、雌激素通路和黏著斑的調(diào)節(jié)。免疫蛋白印跡結(jié)果提示,模型組Hsp90蛋白表達(dá)水平較對(duì)照組明顯升高(P0.05),氯沙坦鉀組、葛根素組Hsp90蛋白水平較模型組顯著降低(P0.05或P0.001)。模型組與對(duì)照組比較,PI3K蛋白表達(dá)量無(wú)明顯變化,但有降低趨勢(shì);氯沙坦鉀、高劑量葛根素組PI3K蛋白表達(dá)量較模型組明顯升高(P0.001或P0.01)。各組間Akt及p-Akt蛋白水平均無(wú)明顯變化(P0.05)。結(jié)論:葛根素可明顯降低大鼠血清中MDA水平,升高NO、eNOS水平;eNOS活性受Hsp90、Hsp70及Nox調(diào)節(jié)。此外,葛根素通過(guò)增強(qiáng)抗氧化酶系統(tǒng)的防御功能,調(diào)控PI3K/Akt通路發(fā)揮抗氧化應(yīng)激和降壓作用。
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類(lèi)號(hào)】：R285.5

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 邢占良;舒寶瑞;劉春玲;賈子雷;郭亞?wèn)|;;葛根素聯(lián)合替米沙坦對(duì)肥胖性高血壓患者氧化應(yīng)激和血管內(nèi)皮功能的影響[J];河北醫(yī)藥;2016年15期

2 李曉潔;林宇涵;劉彥彬;黃蕾;周明生;;葛根素對(duì)高血壓大鼠內(nèi)皮功能障礙的影響[J];中國(guó)現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué);2016年07期

3 黃華;丁菁;粟鳳;張倩;陸德琴;;葛根素預(yù)處理上調(diào)內(nèi)皮型一氧化氮合酶的表達(dá)減輕人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞缺氧/復(fù)氧損傷[J];中國(guó)病理生理雜志;2016年05期

4 續(xù)暢;鐘萌;馬致潔;姜爍;謝俊大;梁麗娟;王曉東;趙奎君;;葛根芩連湯的現(xiàn)代研究進(jìn)展[J];吉林中醫(yī)藥;2015年06期

5 高學(xué)敏;張德芹;陳可冀;徐磊;;松齡血脈康膠囊“血脈同治”組方理論探析[J];中西醫(yī)結(jié)合心腦血管病雜志;2015年06期

6 黃幀檜;陳莉;柏松;汪江濤;丁伯平;;葛根素聯(lián)用氯沙坦對(duì)腎性高血壓大鼠心肌MMP-1/TIMP-1比值的影響[J];中成藥;2014年03期

7 黃幀檜;柏松;張年寶;崔衛(wèi)東;丁伯平;;葛根素對(duì)自發(fā)性高血壓大鼠心肌纖維化的影響及其機(jī)制(英文)[J];中國(guó)病理生理雜志;2014年03期

8 符青偉;;愈風(fēng)寧心滴丸治療神經(jīng)性頭痛的臨床研究[J];中醫(yī)臨床研究;2014年04期

9 嚴(yán)偉;;探討葛根素注射液治療70例妊娠高血壓綜合征患者的效果[J];中國(guó)傷殘醫(yī)學(xué);2013年12期

10 董珍宇;高穎;吳圣賢;;基于真實(shí)世界的松齡血脈康膠囊治療原發(fā)性高血壓研究[J];中西醫(yī)結(jié)合心腦血管病雜志;2013年03期

，

本文編號(hào)：1314946