本文關(guān)鍵詞：高黏附力重組乳酸乳球菌靶向投遞KiSS1蛋白對(duì)結(jié)直腸癌細(xì)胞的抑制作用研究　出處：《中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)》2017年博士論文　論文類(lèi)型：學(xué)位論文

  更多相關(guān)文章： 乳酸乳球菌 黏附蛋白CwaA KiSS1RGD 投遞載體 結(jié)直腸癌

【摘要】：口服給藥是最常用的藥物治療方式,然而對(duì)于某些蛋白質(zhì)類(lèi)活性物質(zhì)和藥物在經(jīng)過(guò)口服后往往由于胃腸的苛刻環(huán)境而發(fā)生失活或降解,因此不能發(fā)揮其正常功效。近年來(lái),乳酸菌被認(rèn)為是最有潛力的作為敏感性功能蛋白和藥物的投遞載體。其中,乳酸乳球菌作為一種理想的功能蛋白投遞載體,具有非入侵性,抗原性弱,胞外分泌蛋白少等優(yōu)點(diǎn)。利用乳酸乳球菌表達(dá)細(xì)菌或病毒的抗原基因方面已經(jīng)取得了很大的進(jìn)步,然而對(duì)于利用乳酸乳球菌投遞功能蛋白用于癌癥治療的可行性卻少有報(bào)道。KiSS1蛋白是一種癌轉(zhuǎn)移抑制蛋白,已經(jīng)報(bào)道了在各種癌癥中具有轉(zhuǎn)移抑制作用。然而這種功能蛋白是否可以利用乳酸菌進(jìn)行表達(dá)并具有功能活性應(yīng)用于癌癥治療中未見(jiàn)報(bào)道。本論文主要探究乳酸乳球菌作為KiSS1的投遞表達(dá)載體的可行性,并通過(guò)重組植物乳桿菌CwaA黏附蛋白改善乳酸乳球菌黏附特性,同時(shí)加入RGD修飾標(biāo)簽修飾KiSS1蛋白來(lái)增強(qiáng)投遞的靶向性和對(duì)結(jié)直腸癌的抑制效果。為利用乳酸乳球菌作為功能蛋白投遞載體在癌癥治療中的應(yīng)用提供了理論基礎(chǔ)。本研究首先對(duì)實(shí)驗(yàn)室保存的一株黏附力較好的植物乳桿菌NL42進(jìn)行了全基因組測(cè)序,通過(guò)比較基因組學(xué)的分析方法,發(fā)現(xiàn)并鑒定了參與植物乳桿菌黏附作用的新的功能蛋白CwaA,通過(guò)在乳酸乳球中表達(dá)該黏附蛋白顯著改善了乳酸乳球菌的黏附特性,以期利用該菌株作為腸道活體投遞功能蛋白的模式載體菌株。研究利用乳酸乳球菌Nice表達(dá)系統(tǒng)成功分泌表達(dá)了人源的KiSS1蛋白,并通過(guò)體外實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證了 KiSS1蛋白對(duì)于人結(jié)直腸癌細(xì)胞HT-29具有增殖遷移抑制效果,主要表現(xiàn)在促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡,并通過(guò)細(xì)胞表面的GPR54受體激活ERK-MAPK信號(hào)通路,實(shí)現(xiàn)對(duì)MMP-9的下調(diào)表達(dá)而發(fā)揮其功能。為了增強(qiáng)投遞的靶向性,本研究選用了對(duì)癌細(xì)胞表面整合素有特異性結(jié)合的配體RGD基序修飾KiSS1蛋白,成功實(shí)現(xiàn)了乳酸乳球菌表達(dá)融合蛋白KiSSIRGD。加入RGD靶向配體基序標(biāo)簽后,HT-29細(xì)胞對(duì)融合KiSS1蛋白的吸收更強(qiáng),同時(shí)也增強(qiáng)了 KiSS1蛋白對(duì)HT-29細(xì)胞的增殖抑制,遷移抑制和促凋亡作用效果。通過(guò)利用Caco2單層細(xì)胞模型模擬小腸上皮細(xì)胞來(lái)驗(yàn)證功能蛋白的轉(zhuǎn)運(yùn)和吸收,實(shí)驗(yàn)結(jié)果證實(shí)了帶有和不帶有RGD的KiSS1蛋白均可以通過(guò)Caco2細(xì)胞單層的吸收轉(zhuǎn)運(yùn)。這些研究結(jié)果證實(shí)了乳酸菌作為功能蛋白KiSS1投遞載體用于癌癥治療的可行性,而且這種投遞作用不局限于黏膜表面的投遞治療也可以用于周身投遞治療。最后我們利用黏附力增強(qiáng)的乳酸乳球菌表達(dá)了 RGD修飾的KiSS1蛋白,與野生型乳酸乳球菌相比較在功能蛋白分泌量和投遞效果方面進(jìn)一步增強(qiáng),更有利于日后應(yīng)用在口服投遞治療中。本研究闡明了益生菌-乳酸乳球菌可以通過(guò)基因工程的定向改造用于分泌具有生物活性的RGD修飾的KiSS1蛋白,并且所分泌的蛋白可以通過(guò)小腸的轉(zhuǎn)運(yùn)吸收,為利用乳酸乳球菌投遞功能蛋白用于癌癥治療產(chǎn)品的開(kāi)發(fā)及應(yīng)用提供重要的理論依據(jù)。
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類(lèi)號(hào)】：R96

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 向鑫玲;張英春;馬放;張?zhí)m威;李少慧;;乳酸桿菌的表面特性及其黏附能力的研究[J];食品工業(yè)科技;2016年07期

2 張春麗;郝攀;成_g;馬超;馬歡;王榮福;閆平;康磊;張麗;王彥福;郭鳳琴;李全忠;張明霞;;~(131)I-c(RGD)_2在荷不同類(lèi)型腫瘤小鼠中的生物分布與顯像研究[J];腫瘤學(xué)雜志;2014年11期

3 劉淑杰;李永明;徐子偉;;重組乳酸乳球菌表達(dá)外源蛋白的研究進(jìn)展[J];中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào);2014年03期

4 蔡凱凱;黃占旺;葉德軍;孫長(zhǎng)濤;;益生菌調(diào)節(jié)腸道菌群及免疫調(diào)節(jié)作用機(jī)理[J];中國(guó)飼料;2011年18期

5 孫錄;戴維群;王華;;含RGD的細(xì)胞粘附肽抑制人胃癌細(xì)胞BGC823增殖及誘導(dǎo)其凋亡作用[J];中國(guó)實(shí)驗(yàn)診斷學(xué);2011年03期

6 孫進(jìn);周婷婷;常桂芳;樂(lè)國(guó)偉;施用暉;;嗜酸乳桿菌黏附派伊爾結(jié)及抑制病原菌侵襲性的研究[J];中華微生物學(xué)和免疫學(xué)雜志;2009年04期

7 張春麗;楊銘;王榮福;;RGD肽與整合素α_vβ_3受體結(jié)合的構(gòu)效關(guān)系及放射性標(biāo)記配體的設(shè)計(jì)[J];腫瘤學(xué)雜志;2009年01期

8 狄靜芳;賀進(jìn)田;徐瑞光;陳希;趙寶華;;具有抗血小板聚集功能的新型葡激酶突變體的表達(dá)、純化及性質(zhì)[J];微生物學(xué)報(bào);2008年09期

9 劉倩;邵占濤;陳營(yíng);;兩株乳桿菌對(duì)牙鲆體表及消化道粘液的粘附特性[J];中國(guó)微生態(tài)學(xué)雜志;2007年01期

10 魏銀萍;王斌;魏泓;;益生菌株對(duì)HT-29細(xì)胞的粘附及對(duì)致病菌的粘附抑制性能研究[J];中國(guó)藥業(yè);2006年08期

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 雷涵;重組乳酸乳球菌作為黏膜輸送載體的研究[D];上海交通大學(xué);2010年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 黃新鳳;利用AcmA蛋白在乳酸乳球菌表面展示錳超氧化物歧化酶[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2009年

，

本文編號(hào)：1313868