本文關(guān)鍵詞：蘇木、川芎對肺癌干細胞樣細胞荷瘤小鼠模型原發(fā)和復(fù)發(fā)腫瘤的影響

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【摘要】：立題依據(jù)近年來,盡管對于肺癌的預(yù)防、診斷和治療取得了一定的進步,但其發(fā)病率與死亡率仍比其他惡性腫瘤要高,腫瘤的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移一直是影響腫瘤預(yù)后的主要原因。根據(jù)達爾文進化理論,腫瘤干細胞(cancer stem cell,CSCs)是一類較普通腫瘤細胞具有更強自我更新能力的細胞。針對腫瘤干細胞的治療策略,將為腫瘤的治療提供新的思路。CSCs被認為是具有異質(zhì)性和無限增殖能力的一小部分細胞亞群,在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、復(fù)發(fā)及轉(zhuǎn)移中都表現(xiàn)出來較普通腫瘤細胞更強的惡性生物學行為。根據(jù)腫瘤患者的臨床表現(xiàn)、血液流變學異常等現(xiàn)象,均可以說明腫瘤患者存在血瘀證,并與腫瘤患者的預(yù)后較差相關(guān)。另外手術(shù)也會損傷患者的血管內(nèi)皮細胞,激活凝血機制,使血液處于高凝狀態(tài)。因此在手術(shù)前后使用活血藥干預(yù)血液的高凝狀態(tài),對于改善干細胞樣細胞荷瘤小鼠的治療效果有一定的意義。前期研究中已經(jīng)證實蘇木、川芎等活血藥可能通過影響CD44V6、p-選擇素、CD29、E-cadherin、HIF-1 α的表達在一定程度上抑制肺癌的轉(zhuǎn)移行為。另外,蘇木含藥血清及蘇木水煎劑在體外實驗中均可以對肺癌細胞的增殖產(chǎn)生一定的抑制作用,這與其影響細胞的周期、侵襲及黏附能力有關(guān)。蘇木、川芎聯(lián)合順鉑可對肺癌干細胞樣細胞荷瘤小鼠腫瘤組織的HIF-1 α產(chǎn)生抑制作用,并從mRNA水平上抑制肺癌干細胞樣細胞的E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、Snail表達,抑制EMT上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化過程從而抑制腫瘤轉(zhuǎn)移。本課題是前期課題的延續(xù)與擴展,結(jié)合腫瘤干細胞理論,觀察蘇木、川芎及順鉑對肺癌干細胞樣細胞荷瘤小鼠手術(shù)模型的生長、復(fù)發(fā)等惡性生物學行為的影響,以期為臨床上合理選擇活血藥及其應(yīng)用時機,從肺癌干細胞的角度探索活血藥的可能作用機制及作用靶點,為充實肺癌血瘀證的治療理論及臨床上合理應(yīng)用活血藥提供借鑒。研究目的1、研究活血藥蘇木與川芎對肺癌干細胞樣細胞荷瘤小鼠模型原發(fā)和復(fù)發(fā)腫瘤的抑制作用;2、從HIF-1 α及上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化相關(guān)分子的角度,研究活血藥抑制肺癌干細胞樣細胞荷瘤小鼠模型原發(fā)和復(fù)發(fā)腫瘤的作用機制。研究方法1、模型制備:采用無血清培養(yǎng)法分選PG-BE1細胞系中的干細胞樣細胞亞群;將干細胞樣細胞亞群接種于老鼠下肢腳墊。采用藥物對小鼠進行干預(yù),第21天截肢并剝?nèi)⌒∈笤l(fā)瘤組織。繼續(xù)觀察小鼠的復(fù)發(fā)情況,并用藥物進行干預(yù),于第40天時獲取復(fù)發(fā)瘤組織;2、分組情況:對原發(fā)瘤組織進行分組。依據(jù)干預(yù)手段的不同,將肺癌干細胞樣細胞荷瘤小鼠模型原發(fā)瘤組織分為空白組、中藥組、中藥加順鉑組、順鉑組4組,分別用生理鹽水、中藥水煎液、中藥水煎液加順鉑、順鉑對小鼠進行干預(yù),第21天取原發(fā)瘤組織。對復(fù)發(fā)瘤組織進行分組。依據(jù)手術(shù)前后干預(yù)手段的不同,將肺癌干細胞樣細胞荷瘤小鼠分為空白組、中藥術(shù)前組、中藥術(shù)后組、順鉑術(shù)前組、順鉑術(shù)后組、中藥加順鉑術(shù)前組、中藥加順鉑術(shù)后組7組。分別用生理鹽水、術(shù)前用中藥水煎液、術(shù)后用中藥水煎液、術(shù)前用順鉑、術(shù)后用順鉑、術(shù)前用中藥水煎液聯(lián)合順鉑、術(shù)后用中藥水煎液聯(lián)合順鉑對小鼠進行干預(yù),第40天取復(fù)發(fā)瘤組織進行檢測;3、活血藥抑瘤作用研究:(1)采用觀察小鼠成瘤時間法,以觀察蘇木、川芎對肺癌干細胞樣細胞荷瘤小鼠成瘤時間的影響。(2)采用稱量法,觀察蘇木、川芎對肺癌干細胞樣細胞荷瘤小鼠術(shù)后體重的影響。(3)觀察小鼠腫瘤復(fù)發(fā)模型情況,計算蘇木、川芎對肺癌干細胞樣細胞荷瘤小鼠腫瘤復(fù)發(fā)率及復(fù)發(fā)率抑制率。(4)采用稱重法,對原發(fā)瘤組織和復(fù)發(fā)瘤組織進行稱重,觀察蘇木、川芎對原發(fā)瘤組織和復(fù)發(fā)瘤組織瘤重、抑瘤率、復(fù)發(fā)瘤重及復(fù)發(fā)瘤重抑制率的影響;4、活血藥抑瘤機制研究方法:(1)采用Western Blot法及免疫組化法檢測原發(fā)瘤組織和復(fù)發(fā)瘤組織HIF-1 α蛋白的表達,觀察蘇木、川芎對肺癌干細胞樣細胞荷瘤小鼠原發(fā)瘤組織和復(fù)發(fā)瘤組織HIF-1 α蛋白表達的影響。(2)采用Western Blot法、免疫組化法及免疫熒光法檢測原發(fā)瘤組織和復(fù)發(fā)瘤組織EMT相關(guān)分子E-cadherin、CD44S、CD44V6、β1整合素的表達,觀察蘇木、川芎對肺癌干細胞樣細胞荷瘤小鼠原發(fā)瘤組織和復(fù)發(fā)瘤組織EMT相關(guān)分子的影響。研究結(jié)果一、活血藥蘇木、川芎提高了化療藥順鉑的抑瘤率1、蘇木可提高順鉑對肺癌干細胞樣細胞荷瘤小鼠模型原發(fā)腫瘤的抑瘤率:肺癌干細胞樣細胞荷瘤小鼠各組體重的實驗結(jié)果顯示,術(shù)后各組間體重無統(tǒng)計學差異(P0.05)。原發(fā)瘤重方面,蘇木聯(lián)合順鉑組較空白組、蘇木組和順鉑組減少(P0.05)。順鉑組原發(fā)瘤重較空白組、蘇木組降低(P0.05)。蘇木組較空白組原發(fā)瘤重相當(P＞0.05)。在原發(fā)瘤抑制率方面,蘇木組抑瘤率為8.93%,順鉑組抑瘤率為35.27%,蘇木加順鉑組抑瘤率為48.76%。2、蘇木可提高順鉑對肺癌干細胞樣細胞荷瘤小鼠模型復(fù)發(fā)腫瘤的抑瘤率:與空白組、蘇木術(shù)前組、蘇木術(shù)后組、順鉑術(shù)前組、順鉑術(shù)后組比較,蘇木加順鉑術(shù)前組、蘇木加順鉑術(shù)后組復(fù)發(fā)瘤重明顯下降(P＜0.05),蘇木加順鉑術(shù)后組較蘇木加順鉑術(shù)前組復(fù)發(fā)瘤重下降明顯(P＜0.05);與空白組、蘇木術(shù)前組、蘇木術(shù)后組比較,順鉑術(shù)前組、順鉑術(shù)后組復(fù)發(fā)瘤重明顯下降(P0.05),順鉑術(shù)后組較順鉑術(shù)前組復(fù)發(fā)瘤重相當(P0.05)。與空白組比較,蘇木術(shù)前組復(fù)發(fā)瘤重相當(P＞0.05),蘇木術(shù)后組復(fù)發(fā)瘤重減少(P0.05)。肺癌荷瘤小鼠腫瘤復(fù)發(fā)瘤重抑制率分別為蘇木術(shù)前組5.69%,蘇木術(shù)后組23.57%,順鉑術(shù)前組41.46%,順鉑術(shù)后組45.53%,蘇木加順鉑術(shù)前組55.28%,蘇木加順鉑術(shù)后組70.73%。3、川芎可提高順鉑對肺癌干細胞樣細胞荷瘤小鼠模型原發(fā)腫瘤的抑瘤率:肺癌干細胞樣細胞荷瘤小鼠各組體重的實驗結(jié)果顯示,術(shù)后各組間體重無統(tǒng)計學差異(P＞0.05)。原發(fā)瘤重方面,川芎聯(lián)合順鉑組較空白組、川芎組和順鉑組減少(P＜0.05)。順鉑組原發(fā)瘤重較空白組、川芎組降低(P0.05)。在原發(fā)瘤抑制率方面,川芎相關(guān)各組抑瘤率為川芎組抑瘤率為-0.010%,順鉑組抑瘤率為38.63%,川芎加順鉑組抑瘤率為52.05%。4、川芎可提高順鉑對肺癌干細胞樣細胞荷瘤小鼠模型復(fù)發(fā)腫瘤的抑瘤率:與空白組、川芎術(shù)前組、川芎術(shù)后組、順鉑術(shù)前組、順鉑術(shù)后組比較,川芎加順鉑術(shù)前組、川芎加順鉑術(shù)后組復(fù)發(fā)瘤重明顯下降(P0.05),川芎加順鉑術(shù)前組與川芎加順鉑術(shù)后組表達相當;與空白組、川芎術(shù)前組、川芎術(shù)后組比較,順鉑術(shù)前組、順鉑術(shù)后組復(fù)發(fā)瘤重明顯下降(P0.05),順鉑術(shù)前組與順鉑術(shù)后組相當。與空白組比較,川芎術(shù)前組、川芎術(shù)后組復(fù)發(fā)瘤重相當(P＞0.05)。肺癌荷瘤小鼠腫瘤復(fù)發(fā)瘤重抑制率分別為川芎術(shù)前組0.8%,川芎術(shù)后組3.23%,順鉑術(shù)前組40.32%,順鉑術(shù)后組45.97%,川芎加順鉑術(shù)前組54.03%,川芎加順鉑術(shù)后組 54.03%。二、活血藥蘇木、川芎通過具體的分子調(diào)控機制實現(xiàn)抑瘤作用(一)蘇木、川芎使HIF-1α在實驗?zāi)[瘤模型中的表達減少1、HIF-1α在經(jīng)蘇木干預(yù)后的原發(fā)腫瘤模型的表達減少:Western Blot 法檢測蘇木相關(guān)各組對原發(fā)瘤組織HIF-1 α的表達強度方面,蘇木聯(lián)合順鉑組較順鉑組、蘇木組、空白組HIF-1 α表達少,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05),順鉑組HIF-1 α表達較蘇木組及空白組少,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05),蘇木組較空白組HIF-1α表達量少,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。免疫組化法檢測HIF-1α的表達,乏氧環(huán)境較常氧環(huán)境條件下培養(yǎng)的干細胞樣細胞接種到小鼠體內(nèi)后HIF-1 α的表達增多。原發(fā)瘤組織中,蘇木聯(lián)合順鉑組較順鉑組、蘇木組、空白組HIF-1α的表達強度降低。順鉑組較蘇木組、空白組HIF-1α的表達強度降低。蘇木組較空白組HIF-1 α的表達強度相當。2、HIF-1 α在經(jīng)蘇木干預(yù)后的腫瘤復(fù)發(fā)模型中的表達減少:Western Blot法檢測蘇木相關(guān)各組對復(fù)發(fā)瘤組織HIF-1 α表達方面,蘇木相關(guān)各組小鼠復(fù)發(fā)瘤組織HIF-1α的表達強度排序為:空白手術(shù)組=蘇木術(shù)前組蘇木術(shù)后組順鉑術(shù)前組順鉑術(shù)后組=蘇木加順鉑術(shù)前組蘇木加順鉑術(shù)后組。表明蘇木加順鉑術(shù)后組較蘇木加順鉑術(shù)前組、順鉑術(shù)后組、順鉑術(shù)前組、蘇木術(shù)后組、蘇木術(shù)前組HIF-1α表達量更少(P0.05)。蘇木加順鉑術(shù)前組與順鉑術(shù)后組HIF-1α表達量相當,較順鉑術(shù)前組、蘇木術(shù)后組、蘇木術(shù)前組HIF-1α表達量更少(P0.05)。順鉑術(shù)前組較蘇木術(shù)后組、蘇木術(shù)前組HIF-1 α表達量更少(P0.05)。蘇木術(shù)后組較蘇木術(shù)前組HIF-1α表達量更少(P0.05)。蘇木術(shù)前組與空白手術(shù)組HIF-1 α表達相當(P0.05)。免疫組化法檢測HIF-1 α的表達,在復(fù)發(fā)瘤組織中,蘇木術(shù)前組及蘇木術(shù)后組較空白組HIF-1 α的表達相當,蘇木加順鉑術(shù)后組、蘇木加順鉑術(shù)前組、順鉑術(shù)后組、順鉑術(shù)前組HIF-1 α的表達較蘇木術(shù)前組、蘇木術(shù)后組和空白組降低,但各組間未見顯著差異。3、HIF-1 α在經(jīng)川芎干預(yù)后的原發(fā)腫瘤模型的表達減少:Western Blot法檢測川芎相關(guān)各組對原發(fā)瘤組織HIF-1 α的表達強度方面,川芎聯(lián)合順鉑組較順鉑組、川芎組、空白組HIF-1 α表達較少,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05),順鉑組HIF-1α表達較川芎組及空白組較少,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05),川芎組較空白組HIF-1 α表達量較少,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。免疫組化法檢測原發(fā)瘤組織HIF-1α的表達,川芎加順鉑組與順鉑組表達比較,HIF-1α的表達未見顯著差異,較川芎組和空白組HIF-1 α表達明顯下調(diào)。川芎組與空白組比較,HIF-1α的表達相當。4、HIF-1 α在經(jīng)川芎干預(yù)后的復(fù)發(fā)腫瘤模型中的表達減少:Western Blot法檢測川芎相關(guān)各組對復(fù)發(fā)瘤組織HIF-1 α表達方面,川芎相關(guān)各組對小鼠復(fù)發(fā)瘤組織HIF-1α的表達強度影響的排序為:空白組=川芎術(shù)前組川芎術(shù)后組順鉑術(shù)前組順鉑術(shù)后組=川芎加順鉑術(shù)前組川芎加順鉑術(shù)后組。表明川芎加順鉑術(shù)后組較川芎加順鉑術(shù)前組、順鉑術(shù)后組、順鉑術(shù)前組、川芎術(shù)后組、川芎術(shù)前組、K手術(shù)組可以明顯抑制轉(zhuǎn)移瘤組織HIF-1α的表達(P0.05)。川芎加順鉑術(shù)前組與順鉑術(shù)后組比較,HIF-lα的表達相當(P＞0.05),但較順鉑術(shù)前組、川芎術(shù)后組、川芎術(shù)前組、空白手術(shù)組表達更少(P0.05)。順鉑術(shù)前組較川芎術(shù)后組、川芎術(shù)前組、空白手術(shù)組HIF-1α的表達更少(P0.05)。川芎術(shù)后組較川芎術(shù)前組、空白手術(shù)組HIF-1α的表達更少(P0.05)。川芎術(shù)前組與空白手術(shù)組HIF-1 α的表達相當(P0.05)。免疫組化法檢測HIF-1 α的表達,在復(fù)發(fā)瘤組織中,川芎加順鉑術(shù)后組較川芎加順鉑術(shù)前組、順鉑術(shù)前、順鉑術(shù)后組、川芎術(shù)前組、川芎術(shù)后組、空白手術(shù)組HIF-1α表達減少。川芎加順鉑術(shù)前組、順鉑術(shù)前、順鉑術(shù)后組HIF-1α的表達相當。川芎術(shù)前與川芎術(shù)后組較空白手術(shù)組HIF-1 α表達相當。(二)上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化相關(guān)分子在實驗?zāi)[瘤模型中的表達出現(xiàn)變化1、上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化相關(guān)分子在經(jīng)蘇木干預(yù)后的原發(fā)腫瘤模型中的表達出現(xiàn)變化:(1)E-Cad表達增多,Western blot法檢測蘇木相關(guān)各組對原發(fā)瘤組織E-Cad表達方面,低氧濃度環(huán)境較常氧環(huán)境下培養(yǎng)的干細胞樣細胞接種到小鼠體內(nèi)的原發(fā)瘤組織E-Cad表達弱于常氧環(huán)境(P0.05)。蘇木加順鉑組較順鉑組、蘇木組、空白組E-Cad表達量增加,有統(tǒng)計學差異(P＜0.05)。蘇木組及順鉑組E-Cad的表達與空白組相當,無統(tǒng)計學差異(P＞0.05)。免疫組化法檢測蘇木對原發(fā)瘤組織E-Cad表達量的影響,常氧環(huán)境培養(yǎng)較低氧環(huán)境培養(yǎng)的PG-BE1干細胞樣細胞接種到肺癌荷瘤小鼠體內(nèi)的E-Cad表達強度增加。各用藥組與空白組相比,E-Cad的表達無明顯差異。(2)CD44V6的表達減少,Western blot法檢測蘇木相關(guān)各組對原發(fā)瘤組織CD44V6表達方面,低氧環(huán)境較常氧環(huán)境下的干細胞樣細胞接種到小鼠體內(nèi)產(chǎn)生的原發(fā)瘤組織CD44V6的表達較常氧環(huán)境無明顯差異(P＞0.05)。蘇木加順鉑術(shù)前組較順鉑術(shù)前組、蘇木術(shù)前組、空白手術(shù)組CD44V6表達較少(P0.05),順鉑組較蘇木組、空白組CD44V6的表達較少(P＜0.05),蘇木組較空白組CD44V6的表達較少(P0.05)。免疫組化法檢測蘇木對原發(fā)瘤組織CD44V6表達量影響,蘇木相關(guān)各組CD44V6熒光表達強度相當。(3)β1整合素表達減少,Western blot法檢測蘇木相關(guān)各組對原發(fā)瘤組織β1整合素表達量的影響,發(fā)現(xiàn)低氧環(huán)境下培養(yǎng)的干細胞樣細胞接種到小鼠體內(nèi)后較常氧環(huán)境β1整合素的表達上調(diào)(P0.05)。蘇木加順鉑組較DDP組、蘇木組、空白組β1整合素表達較少(P0.05),順鉑組較蘇木組、空白手術(shù)組β 1整合素表達較少(P0.05),蘇木組較空白手術(shù)組β1整合素的表達相當(P＞0.05)。免疫組化法檢測蘇木對原發(fā)瘤組織β1整合素表達量的影響,發(fā)現(xiàn)在常氧環(huán)境較低氧環(huán)境下培養(yǎng)的PG-BE1干細胞樣細胞接種到小鼠后的β1整合素表達量相當(P＞0.05)。蘇木加順鉑組較順鉑組、蘇木組、空白手術(shù)組β1整合素表達量較低,順鉑組較蘇木組、空白組β1整合素表達量較低。蘇木組β1整合素表達量較空白組降低。2、上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化相關(guān)分子在經(jīng)蘇木干預(yù)后的復(fù)發(fā)腫瘤模型中的表達出現(xiàn)變化:(1)E-Cad表達增多,Western Blot法檢測蘇木相關(guān)各組對復(fù)發(fā)瘤組織E-Cad表達方面,蘇木加順鉑術(shù)后組較蘇木加順鉑術(shù)前組、空白手術(shù)組E-Cad表達量增加,差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05),較蘇木加順鉑術(shù)前組、順鉑術(shù)后組、順鉑術(shù)前組、蘇木術(shù)后組、蘇木術(shù)前組表達量相當(P＞(0.05)。蘇木加順鉑術(shù)前組、順鉑術(shù)后組、順鉑術(shù)前組、蘇木術(shù)后組、蘇木術(shù)前組、空白手術(shù)組E-Cad表達量相當,差異不具有統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。免疫組化法檢測蘇木對復(fù)發(fā)瘤組織E-Cad表達量,蘇木加順鉑術(shù)后組E-Cad表達量較空白手術(shù)組、蘇木術(shù)前組、蘇木術(shù)后組、順鉑術(shù)前組、順鉑術(shù)后組、蘇木加順鉑術(shù)前組增加。蘇木加順鉑術(shù)前組、順鉑術(shù)后組、順鉑術(shù)前組、蘇木術(shù)后組、蘇木術(shù)前組、空白手術(shù)組E-Cad表達量相當。(2)CD44V6的表達減少,Western blot法檢測蘇木相關(guān)各組對復(fù)發(fā)瘤組織CD44V6表達方面,蘇木相關(guān)各組小鼠復(fù)發(fā)瘤組織CD44V6的表達強度排序為:空白手術(shù)=蘇木術(shù)前組蘇木術(shù)后組順鉑術(shù)前組=蘇木加順鉑術(shù)前組順鉑術(shù)后組蘇木加順鉑術(shù)后組。蘇木加順鉑術(shù)后組較蘇木加順鉑術(shù)前組、順鉑術(shù)后組、順鉑術(shù)前、蘇木術(shù)后、蘇木術(shù)前、空白手術(shù)組CD44V6表達較少,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。順鉑術(shù)后組較蘇木加順鉑術(shù)前組、順鉑術(shù)前、蘇木術(shù)后、蘇木術(shù)前、空白手術(shù)組CD44V6表達較少(P0.05)。順鉑術(shù)前組與蘇木加順鉑術(shù)前組表達相當,較蘇木術(shù)后組、蘇木術(shù)前組、空白手術(shù)表達較少(P0.05)。蘇木術(shù)后組較空白手術(shù)、蘇木術(shù)前組CD44V6表達較少(P0.05)�？瞻资中g(shù)、蘇木術(shù)前組表達相當(P0.05)。免疫組化法檢測蘇木對復(fù)發(fā)瘤組織CD44V6表達量影響,蘇木相關(guān)各組CD44V6熒光表達強度相當。(3)β1整合素表達減少,Western blot法檢測蘇木相關(guān)各組對復(fù)發(fā)瘤組織β1整合素表達量的影響,發(fā)現(xiàn)蘇木相關(guān)各組小鼠復(fù)發(fā)瘤組織β 1整合素的表達強度排序為空白手術(shù)=蘇木術(shù)前組蘇木術(shù)后組順鉑術(shù)前組蘇木加順鉑術(shù)前組=順鉑術(shù)后組蘇木加順鉑術(shù)后組。蘇木加順鉑術(shù)后組較順鉑術(shù)后組、蘇木加順鉑術(shù)前組、順鉑術(shù)前組、蘇木術(shù)后組、蘇木術(shù)前組、空白手術(shù)組可抑制復(fù)發(fā)瘤組織β]整合素的表達(P0.05)。蘇木加順鉑術(shù)前組與順鉑術(shù)后組β 1整合素的表達相當(P0.05),較順鉑術(shù)前組、蘇木術(shù)后組、蘇木術(shù)前組、空白手術(shù)組表達量少(P0.05)。順鉑術(shù)前組較蘇木術(shù)后組、蘇木術(shù)前組、空白手術(shù)組β1整合素的表達量少(P0.05)。蘇木術(shù)后組較蘇木術(shù)前組、空白手術(shù)組β 1整合素的表達量少(P0.05)。蘇木術(shù)前組、空白手術(shù)組βl整合素的表達量相當(P0.05)。免疫組化法檢測蘇木對復(fù)發(fā)瘤組織β1整合素表達量的影響,發(fā)現(xiàn)蘇木加順鉑術(shù)后組與蘇木加順鉑術(shù)前組β1整合素的表達相當,較蘇木術(shù)前、蘇木術(shù)后、順鉑術(shù)前、順鉑術(shù)后組降低。蘇木術(shù)前、蘇木術(shù)后、順鉑術(shù)前、順鉑術(shù)后組表達相當,未見明顯差異，，較空白手術(shù)組β1整合素的表達降低。3、上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化相關(guān)分子在經(jīng)川芎干預(yù)后的原發(fā)腫瘤模型中的表達出現(xiàn)變化:(1)CD44V6的表達減少,Western blot法檢測川芎對原發(fā)瘤組織CD44V6表達方面,川芎加順鉑組較順鉑術(shù)前組、川芎組、空白手術(shù)組CD44V6表達量低(P0.05)。順鉑組較川芎組、空白手術(shù)組CD44V6表達量低(P0.05)。川芎組較空白手術(shù)組CD44V6表達量低(P＜0.05)。免疫組化法檢測川芎對原發(fā)瘤組織CD44V6表達量影響,發(fā)現(xiàn)川芎相關(guān)各組CD44V6熒光表達強度相當。(2)β 1整合素表達減少,Western blot法檢測川芎相關(guān)各組對原發(fā)瘤組織β1整合素表達量的影響,發(fā)現(xiàn)川芎加順鉑組較順鉑組、川芎組、空白手術(shù)組β 1整合素表達量顯著較少(P0.05)。順鉑組較川芎組、空白手術(shù)組β 1整合素表達量顯著較少(P0.05)。川芎組較空白手術(shù)組β1整合素表達量顯著較少(P0.05)。免疫組化法檢測川芎對原發(fā)瘤組織β 1整合素表達量的影響,發(fā)現(xiàn)川芎加順鉑組較順鉑、川芎組、空白手術(shù)組β1整合素的表達下調(diào)。順鉑組較川芎組、空白手術(shù)組β1整合素的表達下調(diào)。川芎組較空白手術(shù)組91整合素的表達下調(diào)。4、上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化相關(guān)分子在經(jīng)川芎干預(yù)后的復(fù)發(fā)腫瘤模型中的表達出現(xiàn)變化:(1)E-Cad表達增多,Western blot法檢測川芎相關(guān)各組對復(fù)發(fā)瘤組織E-Cad表達方面,川芎加順鉑術(shù)后組較川芎加順鉑術(shù)前組、順鉑術(shù)后組、順鉑術(shù)前組、川芎術(shù)后組、川芎術(shù)前組、空白手術(shù)組E-Cad表達量增加,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。川芎加順鉑術(shù)前組、順鉑術(shù)后組、順鉑術(shù)前組、川芎術(shù)后組、川芎術(shù)前組、空白手術(shù)組E-Cad表達量相當,差異不具有統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。免疫組化法檢測川芎對復(fù)發(fā)瘤組織E-Cad表達量,川芎加順鉑術(shù)后組較川芎加順鉑術(shù)前組、順鉑術(shù)后組、順鉑術(shù)前組、川芎術(shù)后組、川芎術(shù)前組、空白手術(shù)組復(fù)發(fā)瘤組織E-Cad表達量增加。川芎加順鉑術(shù)前組、順鉑術(shù)后組、順鉑術(shù)前組、川芎術(shù)后組、川芎術(shù)前組、空白手術(shù)組E-Cad表達量相當。(2)CD44V6表達減少,Western blot法檢測川芎相關(guān)各組對復(fù)發(fā)瘤組織CD44V6表達的影響,川芎相關(guān)各組小鼠復(fù)發(fā)瘤組織CD44V6的表達強度排序為:空白手術(shù)=川芎術(shù)前組川芎術(shù)后組=順鉑術(shù)前組=川芎加順鉑術(shù)前組順鉑術(shù)后組川芎加順鉑術(shù)后組。表明川芎加順鉑術(shù)后組較川芎加順鉑術(shù)前組、順鉑術(shù)后組、順鉑術(shù)前組、川芎術(shù)后組、川芎術(shù)前組、空白手術(shù)可以明顯抑制復(fù)發(fā)瘤組織CD44V6的表達(P0.05)。順鉑術(shù)后組較川芎加順鉑術(shù)前組、順鉑術(shù)前組、川芎術(shù)后組、川芎術(shù)前組、空白手術(shù)組可以明顯抑制復(fù)發(fā)瘤組織CD44V6的表達(P0.05)。川芎加順鉑術(shù)前組、順鉑術(shù)前組、川芎術(shù)后組CD44V6表達相當,較川芎術(shù)前組、空白手術(shù)組表達較少(P0.05)。川芎術(shù)前組、空白手術(shù)組表達相當(P0.05)。免疫組化法檢測川芎對復(fù)發(fā)瘤組織CD44V6表達量影響,川芎相關(guān)各組CD44V6熒光表達強度相當(P0.05)。(3)β1整合素表達減少,Western blot法檢測川芎相關(guān)各組對復(fù)發(fā)瘤組織β 1整合素表達量的影響,發(fā)現(xiàn)川芎相關(guān)各組對小鼠復(fù)發(fā)瘤組織β 1整合素的表達強度影響排序為:空白手術(shù)=川芎術(shù)前組川芎術(shù)后組順鉑術(shù)前組川芎加順鉑術(shù)前組=順鉑術(shù)后組川芎加順鉑術(shù)后組。川芎加順鉑術(shù)后組較川芎加順鉑術(shù)前組、順鉑術(shù)后組、順鉑術(shù)前組、川芎術(shù)后組、川芎術(shù)前組、空白手術(shù)組可明顯抑制β1整合素的表達(P0.05),順鉑術(shù)后組與川芎加順鉑術(shù)前組β1整合素的表達相當(P＞0.05),較順鉑術(shù)前組、川芎術(shù)后組、川芎術(shù)前組、空白手術(shù)組β1整合素的表達量少(P0.05)。順鉑術(shù)前組較川芎術(shù)后組、川芎術(shù)前組、空白手術(shù)組β1整合素的表達量少(P＜0.05)。川芎術(shù)后組較川芎術(shù)前組、空白手術(shù)組β1整合素的表達量少(P0.05)。川芎術(shù)前組、空白手術(shù)組β 1整合素的表達量相當(P＞0.05)。免疫組化法檢測川芎對復(fù)發(fā)瘤組織β 1整合素表達量的影響,發(fā)現(xiàn)β 1整合素表達強度排序為空白手術(shù)=川芎術(shù)前組川芎術(shù)后組順鉑術(shù)前組川芎加順鉑術(shù)前組=順鉑術(shù)后組川芎加順鉑術(shù)后組。研究結(jié)論一、活血藥具備輔助化療藥順鉑適度抑瘤的作用1、蘇木不會對肺癌干細胞樣細胞荷瘤小鼠成瘤時間產(chǎn)生影響,但蘇木聯(lián)合順鉑組可延長順鉑組的成瘤時間。蘇木并未對肺癌荷瘤小鼠原發(fā)瘤重產(chǎn)生影響,但蘇木可以協(xié)同順鉑增加對原發(fā)瘤重的抑制作用。2、手術(shù)后使用蘇木可以協(xié)同順鉑發(fā)揮對小鼠復(fù)發(fā)瘤的抑制作用,而且這種抑制作用較術(shù)前使用蘇木加順鉑的抑制作用更明顯。在手術(shù)后使用蘇木可對復(fù)發(fā)瘤產(chǎn)生一定程度的抑制作用。3、川芎不會對肺癌干細胞樣細胞荷瘤小鼠成瘤時間產(chǎn)生影響,但川芎聯(lián)合順鉑組可延長順鉑組的成瘤時間。川芎并未對肺癌荷瘤小鼠原發(fā)瘤重產(chǎn)生影響,但川芎可以協(xié)同順鉑增加對原發(fā)瘤重的抑制作用。4、手術(shù)后及手術(shù)前使用川芎可以協(xié)同順鉑發(fā)揮對小鼠復(fù)發(fā)瘤的抑制作用,手術(shù)前與手術(shù)后的抑制作用相當。在手術(shù)后使用川芎并未對復(fù)發(fā)瘤產(chǎn)生一定的抑制作用,但川芎可以協(xié)同順鉑增加對復(fù)發(fā)瘤的抑制作用。二、活血藥抑瘤作用的分子機制(一)活血藥使HIF-1 α在實驗?zāi)[瘤模型中的表達減少1、蘇木協(xié)同順鉑使用可以抑制原發(fā)瘤組織中HIF-1 α的表達,而且這種抑制效果要優(yōu)于順鉑和蘇木單獨使用。2、手術(shù)后使用蘇木可以協(xié)同順鉑發(fā)揮對小鼠模型復(fù)發(fā)瘤中HIF-1 α的表達抑制作用,而且這種抑制作用較術(shù)前使用蘇木加順鉑的抑制作用更明顯。在手術(shù)后使用蘇木可對復(fù)發(fā)瘤模型中HIF-1 α的表達產(chǎn)生一定程度的抑制作用。3、川芎可以協(xié)同順鉑增加對原發(fā)瘤組織模型中HIF-1 α的表達抑制作用,而且這種抑制效果要優(yōu)于順鉑和蘇木單獨使用。4、川芎可以協(xié)同順鉑發(fā)揮對小鼠術(shù)后復(fù)發(fā)瘤中HIF-1 α的表達抑制作用,而術(shù)前使用川芎并不能起到這種抑制作用。(二)上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化相關(guān)分子在實驗?zāi)[瘤模型中的表達出現(xiàn)變化1、蘇木可以協(xié)同順鉑增加原發(fā)瘤組織E-Cad的表達,減少CD44V6、β1整合素的表達抑制作用,其中對CD44V6的抑制作用要強于順鉑、蘇木單獨使用,而蘇木組并未對原發(fā)瘤組織E-Cad、β1整合素表達起到作用,蘇木相關(guān)各組對原發(fā)瘤組織CD44S的表達并未產(chǎn)生影響。2、蘇木可以協(xié)同順鉑增加對小鼠復(fù)發(fā)瘤模型E-Cad的表達,減少CD44V6、61整合素的表達,但術(shù)前使用蘇木加順鉑、術(shù)前使用順鉑、術(shù)后使用順鉑、術(shù)前用蘇木、術(shù)后用蘇木對E-Cad的抑制作用不明顯,術(shù)前使用蘇木并未增加順鉑對CD44V6的抑瘤作用,可增加順鉑對β 1整合素的抑制作用。術(shù)后使用蘇木可以在一定程度上抑制CD44V6的表達。蘇木相關(guān)各組對CD44S表達并未產(chǎn)生影響。3、川芎可以協(xié)同順鉑增加對原發(fā)瘤組織CD44V6、β 1整合素的抑制作用,而且對CD44V6的抑制作用要強于順鉑、川芎。川芎相關(guān)各組對原發(fā)瘤組織E-Cad表達并未產(chǎn)生影響。川芎可對原發(fā)瘤組織β1整合素、CD44V6起到抑制作用,并不會對E-Cad的表達產(chǎn)生抑制作用。川芎相關(guān)各組對原發(fā)瘤組織CD44S的表達并未產(chǎn)生影響。4、川芎可以協(xié)同順鉑增加對小鼠復(fù)發(fā)瘤模型E-Cad的表達,減少CD44V6、β1整合素的表達,但術(shù)前使用川芎加順鉑、術(shù)前使用順鉑、術(shù)后使用順鉑、術(shù)前用川芎、術(shù)后用川芎對E-Cad的表達增加作用不明顯,術(shù)前使用川芎并未增加順鉑對CD44V6表達的抑制作用,可明顯增加順鉑對β 1整合素的表達抑制作用。術(shù)后使用川芎可以在一定程度上抑制CD44V6、β1整合素的表達。川芎相關(guān)各組對CD44S表達并未產(chǎn)生影響。綜上所述,在腫瘤生長模型中,合理應(yīng)用蘇木、川芎配合順鉑化療可以增強對原發(fā)瘤的抑制作用,而且這種抑制作用比單純用順鉑更顯著。在術(shù)后復(fù)發(fā)模型中,手術(shù)后應(yīng)用中藥聯(lián)合順鉑對復(fù)發(fā)瘤組織的抑制作用最佳。這也為臨床上合理選擇活血藥的應(yīng)用時機提供實驗基礎(chǔ)。創(chuàng)新性一、建立PG干細胞樣細胞荷瘤小鼠手術(shù)模型,觀察蘇木、川芎對肺癌干細胞樣細胞荷瘤小鼠腫瘤原發(fā)和復(fù)發(fā)模型的影響,發(fā)現(xiàn)蘇木、川芎具有一定的抑制肺癌干細胞樣細胞荷瘤小鼠原發(fā)和復(fù)發(fā)腫瘤模型的作用,查閱國內(nèi)外文獻未見相關(guān)報道。二、蘇木、川芎抑制肺癌干細胞樣細胞荷瘤小鼠腫瘤原發(fā)模型和復(fù)發(fā)模型的機制與其抑制HIF-1 α和EMT相關(guān)分子表達相關(guān)。
【學位授予單位】：中國中醫(yī)科學院
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R285.5

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本文編號：1307139