本文關(guān)鍵詞：非經(jīng)典MHC I類分子HLA-G在廣西肝癌家族聚集性中的作用

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【摘要】：1.研究背景原發(fā)性肝癌是一種常見的惡性腫瘤,世界上肝癌的發(fā)病率和死亡率地域差別較大。中國(guó)是肝癌的高發(fā)區(qū)之一,肝癌的發(fā)病率和死亡率分別占所有惡性腫瘤的第3位和第3位。肝癌發(fā)生是環(huán)境因素和遺傳因素相互作用的結(jié)果,目前已達(dá)到共識(shí)的病因包括慢性乙肝病毒(hepatitis B virus,HBV)或/和丙肝病毒感染(hepatitis C virus,HCV)、黃曲霉毒素的暴露、酒精攝入過(guò)多及個(gè)體遺傳因素等。廣西是我國(guó)肝癌高發(fā)地區(qū)之一,其發(fā)病率和死亡率均高于全國(guó)平均水平。廣西某些肝癌高發(fā)地區(qū)存在肝癌家族聚集現(xiàn)象,即在一個(gè)家族中發(fā)生肝癌的病例數(shù)達(dá)到2人或2人以上。目前,廣西肝癌家族聚集發(fā)生機(jī)制尚未完全明確。其中,肝癌家族聚集與肝炎病毒感染、黃曲霉毒素、飲用不潔水源等外因的研究較多,而對(duì)內(nèi)在的遺傳因素則所知較少。HLA-G是機(jī)體一個(gè)重要的免疫耐受因子,能夠調(diào)節(jié)多種免疫細(xì)胞的生物學(xué)功能,發(fā)揮免疫抑制的功能。HLA-G與惡性腫瘤的關(guān)系是近年來(lái)研究的一個(gè)熱點(diǎn),HLA-G基因多態(tài)性及蛋白的表達(dá)與多種惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展關(guān)系密切。前期研究表明,HLA-G參與了肝炎病毒感染的轉(zhuǎn)歸和肝癌的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程,但其與肝癌家族聚集的關(guān)系研究尚未見報(bào)道。本課題應(yīng)用配對(duì)病例-對(duì)照研究方法,以廣西肝癌高發(fā)家族家庭成員為研究對(duì)象,選擇無(wú)癌家族家庭成員作為對(duì)照,擬從HLA-G基因多態(tài)性和蛋白表達(dá)水平的角度,探討其與肝癌家族聚集性的關(guān)系,從遺傳學(xué)角度去尋找肝癌家族聚集性的危險(xiǎn)因素和潛在的預(yù)測(cè)指標(biāo)。2.方法(1)樣本收集:以來(lái)自廣西肝癌高發(fā)區(qū)11個(gè)縣區(qū)的35個(gè)肝癌高發(fā)家族中140名家庭成員作為實(shí)驗(yàn)組。其中,HBs Ag(+)35名,HBs Ag(-)105名。一級(jí)親屬57名,二級(jí)親屬39名,三級(jí)親屬44名。為減少混雜因素的影響,以相同性別、年齡±5歲、相同民族、相同生活環(huán)境、相同生活習(xí)慣作為配對(duì)條件,以140名無(wú)癌家族家庭成員作為對(duì)照組。所有受試者均接受肝炎病毒血清學(xué)標(biāo)志物、HIV和肝功能等的檢測(cè)。排除非血緣關(guān)系的家族成員,排除甲肝、丙肝、戊肝及HIV感染者。所有受試對(duì)象均未接受過(guò)抗病毒治療。收集完整的受試者人口學(xué)資料和臨床資料。所有研究對(duì)象空腹采外周靜脈血10m L,分別注入抗凝(EDTA)管(6ml)和有蓋普通無(wú)菌干燥管(4ml),進(jìn)行分裝,并保存于-80℃冰箱中�？鼓糜谔崛⊥庵苎准�(xì)胞DNA。干燥管血樣離心后留取血清進(jìn)行ELISA法檢測(cè)s HLA-G抗體的濃度。(2)聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)結(jié)合測(cè)序法檢測(cè)HLA-G基因多態(tài)性:采用試劑盒嚴(yán)格按照說(shuō)明書的步驟進(jìn)行提取外周血DNA。采用聚合PCR和測(cè)序技術(shù)對(duì)HLA-G基因3’UTR區(qū)14bp插入/缺失多態(tài)性、+3142C/G、+3187A/G以及位于HLA-G基因第三外顯子的HLA-G*0105N等位基因進(jìn)行多態(tài)性分析。并比較不同位點(diǎn)基因型與肝癌家族聚集的關(guān)系。(3)采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測(cè)血清中s HLA-G的水平:嚴(yán)格按照ELISA試劑盒中說(shuō)明書要求操作,對(duì)所有受試對(duì)象外周血中可溶性HLA-G(solube HLA-G,s HLA-G)的水平進(jìn)行檢測(cè),并分析肝癌高發(fā)家族家庭成員與無(wú)癌家族家庭成員s HLA-G水平的差異。3.結(jié)果(1)HLA-G基因多態(tài)性與肝癌家族聚集的關(guān)系檢測(cè)結(jié)果顯示:對(duì)于HLA-G3’UTR區(qū)而言,14bp插入/缺失基因型頻率分布在肝癌高發(fā)家族家庭成員組和無(wú)癌家族家庭成員組中的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(c2=8.69,P=0.01)。相對(duì)于+14bp/+14bp基因型來(lái)說(shuō),-14bp/-14bp基因型可能增加肝癌家族聚集的風(fēng)險(xiǎn)(OR=4.00,95%CI=1.38-11.61,P=0.01);而+14bp/-14bp則不能增加肝癌家族聚集的風(fēng)險(xiǎn)(OR=2.54,95%CI=0.87-7.43,P=0.09)。兩組的+14bp、-14bp等位基因頻率分布差異也有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(c2=7.88,P=0.01),-14bp等位基因與肝癌家族聚集的風(fēng)險(xiǎn)增加有關(guān)(OR=1.70,95%CI=1.17-2.46,P=0.01)。而在本研究中,對(duì)于HLA-G+3142C/G位點(diǎn),基因型和等位基因的分布在肝癌高發(fā)家族家庭成員組和無(wú)癌家族家庭成員組中的差異都沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(c2=2.08,P=0.35;c2=0.28,P=0.60)。+3187A/G位點(diǎn)的基因型分布及等位基因頻率在兩組中的差異也未見統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(c2=3.35,P=0.19;c2=0.01,P=0.93)。而對(duì)于位于第三外顯子的HLA-G*0105N的多態(tài)性分析發(fā)現(xiàn),在本研究所納入的研究對(duì)象中,只檢測(cè)到HLA-G*0105NC/C和C/-兩種,并沒有發(fā)現(xiàn)-/-基因型。在分析HLA-G*0105N基因多態(tài)性與肝癌家族聚集性的關(guān)系時(shí),發(fā)現(xiàn)其基因型頻率和等位基因頻率在兩組中的分布并沒有顯著性差異(c2=0.88,P=0.19;c2=0.73,P=0.39)。(2)s HLA-G與肝癌家族聚集的關(guān)系檢測(cè)結(jié)果表明,肝癌高發(fā)家族家庭成員血清s HLA-G水平顯著高于無(wú)癌家族家庭成員(22.83U/ml vs 15.45U/ml,P=0.00)。為排除HBV感染的混雜因素,進(jìn)一步分析,HBs Ag(+)的肝癌高發(fā)家族家庭成員的s HLA-G水平高于HBs Ag(+)的無(wú)癌家族家庭成員,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(32.06U/ml vs21.96U/ml,P=0.04);HBs Ag(-)的肝癌高發(fā)家族家庭成員的s HLA-G水平高于HBs Ag(-)的無(wú)癌家族家庭成員,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(23.26U/ml vs12.93U/ml,P=0.00)。而在高發(fā)家族中,s HLA-G濃度在HCC先證者的一級(jí)親屬、二級(jí)親屬和三級(jí)親屬中分別為39.84U/ml、19.87U/ml和20.96U/ml。與二級(jí)親屬、三級(jí)親屬相比,一級(jí)親屬的s HLA-G水平顯示升高(P=0.00,P=0.00)。s HLA-G的水平在家族中有2例HCC患者的家庭成員組,家族中有3例HCC患者的家庭成員組以及家族中有3例HCC患者的家庭成員組分別為25.89U/ml,27.66U/ml以及22.38U/ml,s HLA-G在三組中濃度的差別沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.98)。(3)HLA-G基因多態(tài)性與s HLA-G水平的關(guān)系,分析肝癌高發(fā)家族家庭成員組中HLA-G基因多態(tài)性與s HLA-G水平的關(guān)系,結(jié)果顯示對(duì)于HLA-G 14bp插入/缺失多態(tài)性,s HLA-G水平在基因型-14bp/-14bp、+14bp/-14bp和+14bp/+14bp個(gè)體中的分別為31.41U/ml,24.14U/ml和17.69U/ml,s HLA-G水平在三組間的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.22)。對(duì)于HLA-G+3142C/G位點(diǎn),s HLA-G水平在基因型C/C、C/G和G/G個(gè)體中的分別為34.45U/ml,23.64U/ml和23.93/ml,s HLA-G水平在三組間的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.15)。對(duì)于HLA-G+3187A/G位點(diǎn),s HLA-G水平在基因型A/A、A/G和G/G個(gè)體中的分別為24.14U/ml,27.35U/ml和35.69/ml,s HLA-G水平在三組間的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.81)。HLA-G*0105N,s HLA-G水平在基因型C/C和C/-基因型分別為27.35U/ml和25.87U/ml,差異也無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.67)。4.結(jié)論(1)HLA-G基因14bp插入/缺失多態(tài)性與肝癌家族聚集性有關(guān)。而HLA-G+3142C/G、+3187A/G位點(diǎn)和HLA-G*0105N可能不是肝癌家族聚集性的危險(xiǎn)因素。(2)肝癌高發(fā)家族家庭成員外周血中s HLA-G水平升高可能是促進(jìn)肝癌家族聚集性發(fā)生的一個(gè)危險(xiǎn)因素。(3)在本次研究所納入的人群中,未發(fā)現(xiàn)HLA-G基因多態(tài)性與s HLA-G表達(dá)水平存在相關(guān)性。
【學(xué)位授予單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R735.7

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本文編號(hào)：1303848