本文關(guān)鍵詞：第一部分：HECTD3預(yù)測及調(diào)控晚期卵巢漿液性腺癌鉑類化療敏感性的機(jī)制研究 第二部分：保留盆腔自主神經(jīng)的宮頸癌根治術(shù)應(yīng)用于局部晚期宮頸癌的臨床研究

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【摘要】：目的:以卡鉑為基礎(chǔ)的聯(lián)合化療在卵巢癌治療中占有重要地位,而鉑類耐藥是導(dǎo)致卵巢癌預(yù)后不良的主要因素,尋找預(yù)測以及逆轉(zhuǎn)鉑類耐藥的分子靶點意義重大。前期研究中發(fā)現(xiàn)新型E3泛素連接酶HECTD3可保護(hù)細(xì)胞避免凋亡,并且在乳腺癌和宮頸癌中與鉑類耐藥相關(guān)。本文將對HECTD3在卵巢癌中的表達(dá)及參與鉑類耐藥的調(diào)控機(jī)制進(jìn)行研究。方法:研究分四步進(jìn)行,采用的實驗方法包括,1)收集2007年5月至2013年1月我院初治的晚期卵巢漿液性腺癌150例納入回顧性研究,手術(shù)標(biāo)本制作成組織芯片。通過免疫組化染色(IHC)評價卵巢癌組織中HECTD3表達(dá)與其他臨床-病理因素的相關(guān)性;通過隨訪進(jìn)行生存統(tǒng)計,并采用Kaplan-Meier法進(jìn)行生存分析,Log-rank檢驗進(jìn)行預(yù)后單因素分析,Cox回歸模型行進(jìn)行預(yù)后多因素分析。2)采用蛋白印跡法(WB)對比SKOV3及順鉑誘導(dǎo)的耐藥細(xì)胞系SKOV3R(DDP)中HECTD3的表達(dá)差異。通過流式檢測上述兩種細(xì)胞系對卡鉑誘導(dǎo)的凋亡差異。構(gòu)建HECTD3敲降的穩(wěn)轉(zhuǎn)SKOV3R及對照細(xì)胞系,應(yīng)用AnnexinV/PI雙染法通過流式細(xì)胞術(shù)檢測敲降株與對照株對卡鉑誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的差異。用上述細(xì)胞系構(gòu)建小鼠皮下荷瘤模型,給予卡鉑治療,對比腫瘤的抑制效果。3)選用Her2抑制劑(Lapatininb,Neratinib和Herceptin)分別處理 SKOV3、SKOV3R 和 A2780 細(xì)胞系,WB 檢測 HECTD3 和 pSTAT3的表達(dá)情況。隨后,應(yīng)用siRNA在SKOV3和A2780細(xì)胞中瞬時敲降Her2,并通過WB檢測Her2、HECTD3和pSTAT3的表達(dá)情況。進(jìn)一步在組織水平通過IHC分析HECTD3與Her2的表達(dá)相關(guān)性。此外,在SKOV3細(xì)胞系中分別敲降STAT3及過表達(dá)STAT3,并通過WB檢測pSTAT3和HECTD3的表達(dá)情況。后通過雙熒光素酶報告基因檢測法定位STAT3影響HECTD3啟動子活性的序列。4)選用SKOV3細(xì)胞分別給予卡鉑單藥、拉帕替尼單藥及聯(lián)合藥物處理,通過流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡差異;進(jìn)而用SKOV3細(xì)胞系構(gòu)建小鼠皮下荷瘤模型,給予同上分組藥物處理,治療結(jié)束后剖取腫瘤大小對比拉帕替尼與卡鉑聯(lián)合與任一單藥的抑制效果差異。結(jié)果:本研究發(fā)現(xiàn),1)卵巢漿液性腺癌組織芯片IHC評分與臨床病理資料分析結(jié)果顯示鉑敏感或鉑耐藥復(fù)發(fā)與HECTD3的表達(dá)水平密切相關(guān)(P0.01)。在卵巢漿液性腺癌中HECTD3表達(dá)高,預(yù)后差。多因素分析結(jié)果顯示HECTD3的表達(dá)水平(P0.05)、FIGO分期(P0.05)和殘存腫瘤大小(P0.05)是PFS的獨(dú)立預(yù)后影響因素;僅HECTD3的表達(dá)水平(P0.05)是OS的獨(dú)立影響因素。2)在細(xì)胞水平研究發(fā)現(xiàn),SKOV3R細(xì)胞系中HECTD3的表達(dá)顯著高于其親本SKOV3細(xì)胞系,且SKOV3R較SKOV3對卡鉑具有耐藥性。體外研究結(jié)果顯示,敲降HECTD3可提高SKOV3R對卡鉑誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡;在體內(nèi)研究中同樣觀察到HECTD3表達(dá)降低可一定程度逆轉(zhuǎn)SKOV3R對卡鉑的敏感性。3)耐藥機(jī)制研究發(fā)現(xiàn),Her2-STAT3信號通路參與調(diào)控HECTD3的表達(dá),WB檢測發(fā)現(xiàn)抑制Her2可協(xié)同降低pSTAT3和HECTD3的表達(dá)水平。并證實STAT3可直接調(diào)節(jié)HECTD3的轉(zhuǎn)錄活性。此外,在組織水平通過IHC驗證Her2與HECTD3表達(dá)呈正相關(guān)(spearman相關(guān)系數(shù)為0.214,P=0.007)。4)拉帕替尼聯(lián)合高/低濃度的卡鉑較卡鉑單藥在體外可顯著促進(jìn)卵巢癌細(xì)胞的凋亡(A2780:CBP-H P=0.047;SKOV3:CBP-L P=0.045,CBP-H P=0.032)。拉帕替尼聯(lián)合卡鉑較任一單藥在體內(nèi)亦可顯著抑制卵巢癌腫瘤生長(CBP+L vs CBP P0.0001,CBP+L vs L P=0.0001)。結(jié)論:綜上所述,HECTD3的表達(dá)與鉑類耐藥呈現(xiàn)正相關(guān),是影響卵巢漿液性腺癌預(yù)后的獨(dú)立因素。降低HECTD3表達(dá)可提高卵巢癌對鉑類藥物的敏感性。此外,HECTD3可通過STAT3接受Her2的正向調(diào)控,且在組織水平HECTD3與Her2表達(dá)呈正相關(guān)。Her2抑制劑可通過這一通路為鉑類治療增敏。因此,HECTD3具有作為卵巢漿液性腺癌分子標(biāo)志物及治療靶點的潛質(zhì)。目的:評價Q-M分型體系中保留盆腔自主神經(jīng)的宮頸癌根治術(shù)(Nerve sparing radical hysterectomy,NSRH)在局部晚期宮頸癌治療中的安全性及對預(yù)后的影響。方法:采用回顧性隊列研究方法收集2008年1月至2014年12月于中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院腫瘤醫(yī)院接受開腹NSRH(69例)和開腹傳統(tǒng)宮頸癌根治術(shù)(RH,320例)的局部晚期(Ib2和IIa2期)宮頸癌患者的臨床病理資料及手術(shù)參數(shù),中位隨訪67個月,評價預(yù)后及術(shù)后膀胱功能恢復(fù)情況。結(jié)果:兩組病例基本參數(shù)匹配,(1)多因素預(yù)后分析結(jié)果顯示盆腔淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是影響局部晚期宮頸癌患者 DFS(HR=1.31,95%CI 為 1.01～1.68,P=0.040)和 OS(HR=1.30,95%CI為1.01～1.67,P=0.046)的獨(dú)立預(yù)后危險因素。(2)手術(shù)保留盆腔自主神經(jīng)與否對局部晚期宮頸癌的無疾病進(jìn)展生存(P=0.746)和總生存(P=0.910)均沒有影響;(3)對比 RH 組,NSRH 組手術(shù)時間雖明顯延長(262±51min vs.245±52min,P0.01),但出血量少(366±302mlvs.457±301ml,P0.05),術(shù)后導(dǎo)尿時間短(11.0±8.9 天 vs.15.5±6.6天,P0.01),以及遠(yuǎn)期膀胱功能異常比例低(6.1%vs.16.0%,P0.05)。結(jié)論:保留盆腔自主神經(jīng)的宮頸癌根治術(shù)可用于局部晚期宮頸癌的治療,預(yù)后同傳統(tǒng)宮頸癌根治術(shù)相仿,且NSRH可提高手術(shù)質(zhì)量并顯著改善患者近期及遠(yuǎn)期膀胱功能。
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R737.31

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本文編號：1302941