本文關鍵詞：Th17和Treg細胞在肝硬化大鼠腸道細菌移位的作用研究

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【摘要】：細菌移位(bacterial translocation,BT)是指細菌或者其產物從腸腔移位到腸系膜淋巴結(mesenteric lymph nodes,MLNs)或者其他的腸外器官。越來越多的證據表明,BT與肝硬化及其并發(fā)癥的發(fā)展密切相關,如肝性腦病,肝肺綜合征,肝腎綜合征和肝衰竭。事實上,BT相關感染和自發(fā)性腹膜炎是肝硬化患者死亡的主要原因。雖然在肝硬化患者中,主要是有感染的肝硬化患者中,已觀察到小腸細菌過度生長和腸道通透性增加與BT有關,但是對與BT密切相關的腸道免疫變化的了解很少。幾種類型的腸道CD4+T細胞是防治BT的關鍵。Th17細胞主要存在于腸道固有層,尤其是小腸的固有層,是腸道粘膜免疫系統(tǒng)的重要組成部分,維持腸道粘膜免疫屏障的完整性密切相關,因此對于預防BT是非常關鍵的。Treg細胞在腸道固有層中聚集,維持腸道免疫系統(tǒng)穩(wěn)態(tài),因此影響B(tài)T的發(fā)生發(fā)展。因此,Th17和Treg細胞對維持腸道粘膜免疫系統(tǒng)的完整性起關鍵作用,與腸道細菌移位密切相關。本研究通過四氯化碳(carbontetrachloride,CC14)和苯巴比妥制造肝硬化腹水大鼠模型,研究腸道固有層、肝臟和血液淋巴細胞中Treg(CD3 + CD4 +CD25 + Foxp3 +),Th17(CD3 + CD4 + IL-17 +),和 Th1(CD3 + CD4 + IFN-γ +)細胞的變化,分析他們與BT的關系和相互作用機制。方法我們使用四氯化碳和苯巴比妥建立大鼠肝硬化腹水模型,使用臨床自動分析儀測定大鼠血清中的肝功能水平,采用流式細胞儀技術檢測腸道固有層、肝臟和血液淋巴細胞中Th17、Th1和Treg細胞比例,并運用酶聯免疫吸附測定(Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)方法測定了血清中脂多糖結合蛋白(lipopolysaccharide binding protein,LBP)的水平。同時為了進一步研究BT與肝硬化大鼠中Th17、Th1和Treg細胞變化之間的因果關系,我們仍然采用CC14建立大鼠肝硬化腹水模型,并使用諾氟沙星和萬古霉素對大鼠進行腸道去污,分離大鼠外周血單核細胞、肝臟和腸道固有層淋巴細胞,流式細胞儀技術檢測外周血單核細胞、肝臟和腸道固有層淋巴細胞中Th17、Th1和Treg細胞比例,并運用ELISA方法測定了血清中LBP的水平。結果為了確定是否肝硬化影響了 BT的發(fā)生,我們把分離到的MLNs進行培養(yǎng),結果發(fā)現,正常對照組沒有BT發(fā)生,CCl4誘導的肝硬化腹水大鼠BT的發(fā)生率是47.8%。與沒有BT的肝硬化大鼠及正常大鼠相比,有BT的肝硬化大鼠血漿LBP的濃度更高,并且與MLNs分離培養(yǎng)到的菌落數成正相關(ρ = 0.918,P0.001);與沒有BT的肝硬化大鼠相比,有BT的肝硬化大鼠具有更差的肝功能,更低的體重,更大的脾臟及更多的腹水量。并且,有BT的肝硬化大鼠血漿LBP的濃度與白蛋白濃度(ρ=-0.745;P0.01)及白蛋白/球蛋白成負相關(ρ=-0.769,P0.01),但是與 AST(ρ = 0.655,P0.05),TBil(ρ = 0.688,P0.05),和 DBil(ρ = 0.692,P0.05)成正相關;與體重成負相關(ρ=-0.893,P0.001),與脾臟的重量成正相關(ρ= 0.665,P0.05),及腹水量也成正相關(ρ = 0.878,P0.001)。有BT的肝硬化大鼠與沒有BT的肝硬化大鼠相比,近端小腸中Treg細胞百分比明顯增加(28.4±10.0vs.13.2±2.9,P0.001),Th17細胞及Th1細胞百分比均明顯減少(14.9±2.8 vs.31.9 ± 9.0,P0.001;9.7 ±3.2 vs.21.8 ±3.7,P0.001);遠端小腸中 Treg細胞百分比也明顯增加(29.5±9.2vs.15.3±3.1,P0.001),Th17細胞及Th1細胞百分比也均明顯減少(11.7 ±4.3 vs.24.1 ±6.2,P0.001;7.3 ±2.8 vs.19.7 ±4.7,P0.001);盲腸中只有Th17細胞百分比明顯減少(10.7±2.9 vs.27.4 ±9.0,P0.001);結腸中 Treg 細胞百分比明顯增加(21.2 ±4.7 vs.14.5 ± 1.9,P0.01),Th17細胞及Th1細胞百分比也均明顯減少(3.6 ± 2.2 vs.8.3 ± 2.8,P0.001;5.0 ± 2.8 vs.18.1 ±6.1,P0.001);肝臟中Treg細胞及Th17細胞百分比明顯增加(32.5 ±4.0 vs.19.2 ± 4.0,P0.001;14.4 ±3.3 vs.9.4 ±0.8,P0.01),Th1 細胞百分比明顯減少(8.4±4.1 vs.13.3±3.0,P0.05);外周血單核細胞中Th17細胞及Th1細胞百分比也均明顯減少(1.7±0.5 vs.3.2±0.4,P0.01;2.0±0.2 vs.4.0± 0.6,P0.001)。并且,我們研究了在有BT的肝硬化大鼠血漿中LBP的濃度與這些細胞變化之間的關系,與Tregs細胞在近端小腸(ρ = 0.691,P0.05)、遠端小腸(ρ = 0.636,P0.01)和肝臟中的比例成正相關(ρ = 0.760,P0.05);與Th17細胞在近端小腸(ρ=-0.836,P0.01),遠端小腸(ρ =-0.861,P0.01)及盲腸中(ρ =-0.675,P0.05)的比例成負相關;與Th1細胞在近端小腸(ρ =-0.809,P0.01),遠端小腸(ρ =-0.802,P0.01)及肝臟中(ρ =-0.836,P0.05)的比例成負相關�？傊�,,Th17、Th1和Treg細胞在近端小腸和遠端小腸中的百分比均與血漿中LBP的濃度具有明顯相關性,說明這些細胞在肝硬化大鼠近端小腸和遠端小腸固有層中的免疫變化與BT密切相關。為了進一步研究BT與肝硬化大鼠中Th17、Th1和Treg細胞變化之間的因果關系,我們使用諾氟沙星和萬古霉素對大鼠進行腸道去污。結果發(fā)現,使用抗生素處理的肝硬化大鼠沒有BT發(fā)生。與使用安慰劑處理的肝硬化大鼠相比,使用抗生素處理的肝硬化大鼠血清中LBP的濃度更低,血清中ALT,AST,TBi1和DBi1水平更低,大鼠的終體重更重,脾臟及腹水的量更小,Tregs細胞在近端小腸中的比例更低,Th17細胞在整個小腸、盲腸、結腸、肝臟和血液中的比例更高。而且這些細胞在使用抗生素處理的肝硬化大鼠組比例的變化與正常大鼠用及沒用抗生素相比沒有統(tǒng)計學意義,進一步說明了 BT引起了這些細胞在肝硬化中的變化。結論總之,BT可能增加了肝硬化大鼠近端小腸中的Tregs細胞,減少了肝硬化大鼠整個腸道固有層和血液中的Th17細胞;CC14誘導的肝硬化大鼠增加了 Tregs細胞在肝臟中的百分比,減少了 Th1細胞在盲腸和血液中的百分比;BT可能加劇了肝硬化大鼠整個小腸固有層和肝臟中Th1細胞的減少,Th17細胞在肝臟中的增加,及Tregs細胞在遠端小腸和結腸中的升高。我們的數據暗示了肝硬化大鼠腸道固有層中Th17細胞的減少和Treg細胞的增加有助于BT的發(fā)生發(fā)展。免疫學的變化是器官特異性的,并且與BT相關。肝硬化導致了 BT,BT可能反過來加重的肝硬化的發(fā)展肝硬化和BT之間形成一個惡性循環(huán)。因此,了解肝-腸軸和其潛在的機制可以為肝硬化的治療找到新的途徑。
【學位授予單位】：浙江大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R575.2

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1 孫天燕;王惠吉;;肝硬化大鼠腸道粘膜屏障的改變及微生態(tài)制劑對其的影響[A];第十三次全國中西醫(yī)結合肝病學術會議論文匯編[C];2004年

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4 費中明;;肝硬化與小腸細菌過度生長[A];2008年浙江省感染病、肝病學術年會論文匯編[C];2008年

5 吳云林;萬榮;;肝硬化生長激素-胰島素樣生長因子軸的基礎與臨床研究[A];中華醫(yī)學會消化病學分會——2005年全國胃腸激素學術研討會論文集[C];2005年

6 葛聲;馬可;;腸道菌群與肝硬化[A];營養(yǎng)健康新觀察（第三十九期）：腸道微生態(tài)與健康[C];2007年

7 朱金照;許其增;張志堅;王雯;李達周;;肝硬化大鼠胃竇平滑肌細胞色素氧化酶Ⅱ基因及線粒體膜電位的變化[A];第五屆全國肝臟疾病臨床暨中華肝臟病雜志成立十周年學術會議論文匯編[C];2006年

8 呂賓;俞蕾敏;斯淑英;李善高;包海標;;肝硬化大鼠肝組織中瘦素、TGF-β_1水平的動態(tài)變化[A];中華醫(yī)學會第七次全國消化病學術會議論文匯編（上冊）[C];2007年

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