本文關(guān)鍵詞：離斷下牙槽神經(jīng)對(duì)大鼠實(shí)驗(yàn)性牙周炎的影響研究

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【摘要】：牙周炎是有著廣泛罹患人群的口腔疾病,是成人失牙的主要原因。牙周致病菌是牙周炎發(fā)生的始動(dòng)因素,沒(méi)有牙周致病菌不會(huì)發(fā)生牙周炎,然而在牙周致病菌普遍存在、口腔衛(wèi)生狀況相似的情況下,不同個(gè)體牙周病損的發(fā)生和進(jìn)展存在很大差異,這就提示宿主因素在牙周炎的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中同樣發(fā)揮重要作用。致病菌的存在是牙周炎發(fā)生的必要條件,宿主易感性則影響宿主在應(yīng)對(duì)細(xì)菌免疫應(yīng)答過(guò)程中的強(qiáng)度,從而導(dǎo)致不同程度的牙周組織破壞。牙周組織炎癥進(jìn)展及組織破壞的范圍很大程度上取決于宿主對(duì)牙周致病菌及其代謝產(chǎn)物的免疫炎癥反應(yīng)。神經(jīng)因素是宿主因素的重要組成部分,神經(jīng)可以通過(guò)分布在組織器官中的疼痛感受器、刺激感受器來(lái)感受疼痛、壓力,發(fā)揮感知功能。神經(jīng)也可以通過(guò)分泌神經(jīng)遞質(zhì)和神經(jīng)肽來(lái)調(diào)控組織損傷后的局部炎癥反應(yīng),影響損傷組織的修復(fù)愈合。神經(jīng)因素其在牙周炎發(fā)生進(jìn)展中是否發(fā)揮重要調(diào)控作用及相關(guān)機(jī)制值得進(jìn)一步的研究證實(shí)。重度牙周病程中,牙周支持組織大量破壞,其中的神經(jīng)束亦會(huì)受累,導(dǎo)致部分病變組織區(qū)域會(huì)處于失神經(jīng)支配的情況,失神經(jīng)支配后病變區(qū)的炎癥進(jìn)程如何發(fā)展,神經(jīng)及其分泌的功能性神經(jīng)肽在牙周組織炎癥進(jìn)程中發(fā)揮何種作用亟待深入研究和闡釋。失神經(jīng)支配亦是神經(jīng)支配研究的有力補(bǔ)充。絲線誘導(dǎo)的大鼠實(shí)驗(yàn)性牙周炎在牙周炎研究中應(yīng)用廣泛。單純使用絲線或者正畸結(jié)扎絲結(jié)扎誘導(dǎo)的牙周炎一般需要較長(zhǎng)的試驗(yàn)周期才能觀察到明顯牙槽骨吸收。絲線配合牙周致病菌則能夠更快的觀察到牙周炎癥和骨質(zhì)吸收的發(fā)生,但是細(xì)菌的培養(yǎng)或購(gòu)買又會(huì)增加實(shí)驗(yàn)成本和操作的難度,不同批次給藥又會(huì)存在一致性問(wèn)題。我們使用縫合絲線嚴(yán)密纏繞包裹正畸結(jié)扎絲改良結(jié)扎誘導(dǎo)的大鼠牙周炎模型。本研究建立離斷下牙槽神經(jīng)的失神經(jīng)支配和結(jié)扎誘導(dǎo)的大鼠牙周炎的聯(lián)合模型。觀察失下牙槽神經(jīng)支配對(duì)大鼠牙周炎的發(fā)生、進(jìn)展的影響,并探討其可能機(jī)制。方法:將縫合絲線嚴(yán)密纏繞包裹4-0正畸結(jié)扎絲,分離牙齦之后牢固結(jié)扎于下頜第一磨牙牙頸部誘導(dǎo)大鼠實(shí)驗(yàn)性牙周炎同時(shí)離斷同側(cè)下牙槽神經(jīng)。選擇成年雄性Wistar大鼠,隨機(jī)分為4組:絲線加鋼絲結(jié)扎組(L),單純離斷神經(jīng)組(D),絲線加鋼絲結(jié)扎+離斷神經(jīng)組(LD),正常鼠(N)作為對(duì)照(n=8)。絲線加鋼絲結(jié)扎組(L)和絲線加鋼絲結(jié)扎+離斷神經(jīng)組(LD)的大鼠行側(cè)下頜第一磨牙絲線加鋼絲結(jié)扎誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)性牙周炎;單純離斷神經(jīng)組(D)和絲線加鋼絲結(jié)扎+離斷神經(jīng)組(LD)的大鼠同時(shí)行右側(cè)下牙槽神經(jīng)離斷術(shù)。術(shù)后4周取材,分離下頜骨行Micro-CT檢查,定量評(píng)價(jià)牙槽骨吸收情況,分析骨組織面積百分比(percent bone area)、骨小梁厚度(trabecular thickness),骨小梁數(shù)量(trabecular number),骨礦化密度(bone mineral density)等骨生物學(xué)參數(shù)。10%EDTA脫鈣后制備石蠟切片,組織學(xué)觀察牙周組織破壞情況;TRAP染色觀察破骨細(xì)胞并計(jì)數(shù);天狼星紅染色觀察牙齦組織膠原纖維的走向和破壞情況。分離新鮮下頜第一磨牙的牙齦組織,放射免疫法檢測(cè)牙齦組織中IL-1β、TNF-α、OPG和sRANKL表達(dá),計(jì)算OPG/sRANKL比例;提取牙齦組織核蛋白Western bloting檢測(cè)NF-κB p65和I κ B α磷酸化。結(jié)果:使用縫合絲線嚴(yán)密纏繞包裹4-0正畸結(jié)扎絲,實(shí)驗(yàn)周期內(nèi)可以牢固結(jié)扎于下頜第一磨牙牙頸部,在術(shù)后4周即可誘發(fā)牙齦組織的炎癥和牙槽骨的少量吸收。離斷下牙槽神經(jīng)可以顯著加重結(jié)扎誘導(dǎo)的大鼠實(shí)驗(yàn)性牙周炎。絲線加鋼絲結(jié)扎+離斷神經(jīng)組(LD)下頜第一磨牙的牙槽骨吸收顯著高于絲線加鋼絲結(jié)扎組。離斷神經(jīng)組和正常組均未觀察到牙槽骨的吸收。Micro-CT分析骨特異性參數(shù)顯示:絲線加鋼絲結(jié)扎+離斷神經(jīng)組(LD)的骨組織面積百分比(percent bone area)、骨小梁厚度(trabecular thickness),骨礦化密度(bone mineral density),較絲線結(jié)扎組均顯著降低。絲線加鋼絲結(jié)扎+離斷神經(jīng)組(LD)中TRAP染色陽(yáng)性細(xì)胞顯著增加,牙齦組織中IL-1β and TNF-α的表達(dá)顯著增加,膠原纖維破壞更加明顯。機(jī)制研究發(fā)現(xiàn),離斷下牙槽神經(jīng)可以加劇絲線加鋼絲結(jié)扎誘導(dǎo)的NF-κ B p65和I κ B α的磷酸化,并下調(diào)OPG/sRANKL比值。單純離斷下牙槽神經(jīng)組較正常組亦可以觀察到下調(diào)的OPG/sRANKL比值。結(jié)論:離斷下槽神經(jīng)神經(jīng)顯著加劇結(jié)扎誘導(dǎo)的大鼠實(shí)驗(yàn)性牙周炎。NF-κB信號(hào)通路和OPG/RANKL通路均參與這一過(guò)程。大鼠離斷下牙槽神經(jīng)和絲線加鋼絲結(jié)扎誘導(dǎo)牙周炎的聯(lián)合實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?可以提供一個(gè)良好的實(shí)驗(yàn)平臺(tái),進(jìn)一步觀察神經(jīng)支配及其分泌的各類功能肽在牙周炎的發(fā)生、進(jìn)展過(guò)程中表達(dá)變化,從而遴選神經(jīng)相關(guān)因子來(lái)調(diào)控牙周炎癥,促進(jìn)牙周組織再生。
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R781.4

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本文編號(hào)：1300770