發(fā)布時(shí)間：2017-12-17 12:17

  本文關(guān)鍵詞：MicroRNA-200c逆轉(zhuǎn)胃癌細(xì)胞順鉑耐藥機(jī)制及與胃癌患者含鉑方案化療療效、預(yù)后相關(guān)性研究

  更多相關(guān)文章： miR-200c 胃癌 鉑 ERCC3 ERCC4

【摘要】：胃癌是全世界男性死亡的第三大原因,也是女性死亡的第五大原因。雖然根治性手術(shù)切除是目前最有效的治療,但40-70%的患者一經(jīng)診斷即為晚期。此外,手術(shù)后40-60%的患者出現(xiàn)復(fù)發(fā)。進(jìn)展期胃癌患者五年生存率僅為5-20%,中位生存期小于1年。含鉑方案化療是晚期胃癌的一線治療方案,但由于原發(fā)性和繼發(fā)性耐藥,有效率僅有29-48%。因此,迫切需要尋找更好的治療策略。研究表明,microRNAs(miRNAs)與腫瘤的形成、生長(zhǎng)、轉(zhuǎn)移,可作為腫瘤抑制基因或癌基因。miRNAs在不同腫瘤的耐藥中扮演著重要的角色。作為生物標(biāo)志物,可用于癌癥的診斷和預(yù)測(cè)治療效果和預(yù)后。Mi RNA-200c(miR-200c)是miR-200家族的成員,其基因定位于人類12號(hào)染色體(12p13.31)。此前,發(fā)現(xiàn)miR-200c對(duì)胃癌細(xì)胞SGC7901/DDP逆轉(zhuǎn)耐藥及抑制增殖作用與誘導(dǎo)鈣粘附蛋白E、磷酸酶基因蛋白和Bax蛋白的表達(dá)、抑制Akt信號(hào)通路的激活和抑制B淋巴細(xì)胞瘤-2基因蛋白的表達(dá)有關(guān)。此外,miRNAs還與DNA修復(fù)相關(guān)機(jī)制相關(guān)。最近的一項(xiàng)研究表明,miR-192的可以靶向抑制肝癌HepG2.2.15細(xì)胞核苷酸切除修復(fù)(Nucleotide excision repair,NER)途徑中核苷酸切除修復(fù)交叉互補(bǔ)基因(excision repaircross-complementing gene,ERCC)3蛋白和ERCC4蛋白。故mi R-200c在胃癌耐藥細(xì)胞株的異常表達(dá),其是否通過(guò)NER途徑的ERCC3和ERCC4發(fā)揮作用尚未可知。本研究擬在前期研究和文獻(xiàn)報(bào)告的基礎(chǔ)上,進(jìn)一步觀察mi R-200c是否通過(guò)NER途徑的ERCC3和ERCC4發(fā)揮作用,并進(jìn)一步研究miR-200c的表達(dá)和治療Ⅳ期胃癌患者接受一線含鉑化療方案治療療效和預(yù)后的相關(guān)性,從而指導(dǎo)臨床治療晚期胃癌患者。本研究包含三個(gè)部分。第一部分MicroRNA-200c逆轉(zhuǎn)胃癌細(xì)胞順鉑耐藥機(jī)制目的:探討MicroRNA-200c(miR-200c)在胃癌細(xì)胞株SGC7901/DDP耐藥逆轉(zhuǎn)的分子機(jī)制,特別是與NER途徑中兩個(gè)重要蛋白ERCC3和ERCC4調(diào)控關(guān)系。方法:通過(guò)慢病毒載體轉(zhuǎn)染來(lái)研究對(duì)SGC7901/DDP、SGC7901細(xì)胞株miR-200c和ERCC3、ERCC4表達(dá)水平的影響。分別用qRT-PCR和Western blot方法檢測(cè)細(xì)胞株轉(zhuǎn)染前后miR-200c和ERCC3、ERCC4的表達(dá)變化;MTT法對(duì)各細(xì)胞株進(jìn)行順鉑耐藥的評(píng)估。結(jié)果:與親本SGC7901細(xì)胞相比,順鉑耐藥細(xì)胞株SGC7901/DDP的miR-200c在轉(zhuǎn)染前的表達(dá)水平較低,而ERCC3和ERCC4蛋白表達(dá)均升高,且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均0.05)。慢病毒載體可調(diào)節(jié)細(xì)胞株miR-200c的表達(dá)水平。在慢病毒上調(diào)miR-200c的SGC7901/DDP細(xì)胞株,對(duì)比親本SGC7901/DDP細(xì)胞株和慢病毒空載SGC7901/DDP細(xì)胞株,ERCC3、ERCC4蛋白表達(dá)下降,順鉑耐藥性降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均0.001)。在慢病毒下調(diào)mi R-200c的SGC7901細(xì)胞株,與親本SGC7901細(xì)胞株和慢病毒空載的SGC7901細(xì)胞相比,ERCC3、ERCC4蛋白表達(dá)與順鉑耐藥性均升高,且差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均0.001)。結(jié)論:過(guò)表達(dá)miR-200c能通過(guò)下調(diào)ERCC3和ERCC4逆轉(zhuǎn)SGC7901/DDP細(xì)胞株的順鉑耐藥,提示機(jī)制涉及到核苷酸切除修復(fù)途徑。第二部分Ⅳ期胃癌患者腫瘤組織中MicroRNA-200c表達(dá)水平與含鉑方案化療療效、預(yù)后相關(guān)性研究目的:觀察Ⅳ期胃癌患者腫瘤組織中的miR-200c表達(dá)水平與含鉑方案化療療效及預(yù)后的相關(guān)性。方法:腫瘤組織標(biāo)本及癌旁組織取自51例接受含鉑方案化療的Ⅳ期胃癌患者。用qRT-PCR方法對(duì)這些標(biāo)本進(jìn)行miR-200c的表達(dá)的測(cè)定。同時(shí)對(duì)miR-200c表達(dá)水平與患者療效和預(yù)后進(jìn)行相關(guān)性分析。結(jié)果:miR-200c在胃癌組織中的表達(dá)明顯低于癌旁組織(P0.05)。發(fā)現(xiàn)miR-200c的表達(dá)與患者的臨床特征無(wú)顯著相關(guān)性。miR-200c高表達(dá)的患者有較好的化療療效和更長(zhǎng)的無(wú)進(jìn)展生存期、總生存期。受試者工作曲線的分析表明,胃癌組織中的miR-200c表達(dá)水平可以預(yù)測(cè)患者含鉑方案化療療效。多因素分析顯示,胃癌組織中miR-200c的高表達(dá)的患者有更長(zhǎng)的無(wú)進(jìn)展生存期、總生存期。結(jié)論:Ⅳ期胃癌患者癌組織中miR-200c的高表達(dá)與更好的含鉑方案化療效果和預(yù)后相關(guān),提示胃癌組織中miR-200c的水平可能對(duì)預(yù)測(cè)Ⅳ期胃癌患者含鉑化療療效及預(yù)后有意義。第三部分Ⅳ期胃癌患者血漿中MicroRNA-200c表達(dá)水平與含鉑方案化療療效、預(yù)后相關(guān)性研究目的:觀察Ⅳ期胃癌患者血漿中的miR-200c表達(dá)水平與含鉑方案化療療效及預(yù)后的相關(guān)性。探討Ⅳ期胃癌患者腫瘤組織與血漿中miR-200c的表達(dá)之間有無(wú)關(guān)聯(lián)性。方法:血漿取自51例接受含鉑方案化療的Ⅳ期胃癌患者及胃鏡證實(shí)慢性淺表性胃炎患者。用qRT-PCR方法對(duì)這些標(biāo)本進(jìn)行miR-200c的表達(dá)的測(cè)定。同時(shí)對(duì)miR-200c表達(dá)水平與患者療效和預(yù)后進(jìn)行相關(guān)性分析。采用Pearson相關(guān)分析51例胃癌患者腫瘤組織與血漿中miR-200c表達(dá)相關(guān)性。結(jié)果:血漿mi R-200c在胃癌患者的表達(dá)明顯低于慢性淺表性胃炎患者(P0.05)。發(fā)現(xiàn)miR-200c的表達(dá)與患者的臨床特征無(wú)顯著相關(guān)性。miR-200c高表達(dá)的患者有較好的治療效果和更長(zhǎng)的無(wú)進(jìn)展生存期、總生存期。受試者工作曲線的分析表明,血漿中的miR-200c表達(dá)水平可以預(yù)測(cè)患者治療效果。多因素分析顯示,血漿中miR-200c的高表達(dá)的患者有更長(zhǎng)的無(wú)進(jìn)展生存期、總生存期。胃癌患者腫瘤組織與血漿中miR-200c的表達(dá)具有正相關(guān)性,(r==0.873,P0.05)。結(jié)論:Ⅳ期胃癌患者血漿中miR-200c的高表達(dá)與更好的含鉑方案化療效果及預(yù)后相關(guān),提示血漿miR-200c的水平可能預(yù)測(cè)Ⅳ期胃癌患者化療療效及預(yù)后。Ⅳ期胃癌患者腫瘤組織與血漿中miR-200c的表達(dá)具有正相關(guān)性,通過(guò)檢測(cè)血漿中miR-200c的表達(dá)在一定程度上可間接反映腫瘤組織中的表達(dá)情況。
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R735.2

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本文編號(hào)：1300080