本文關(guān)鍵詞：蟲(chóng)草益腎顆粒對(duì)高糖培養(yǎng)下人腎小球系膜細(xì)胞增殖及氧化應(yīng)激的影響

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【摘要】：目的:觀察蟲(chóng)草益腎顆粒對(duì)高糖培養(yǎng)下人腎小球系膜細(xì)胞(Human mesangial cells,HMCs)增殖和氧化應(yīng)激的影響,探討蟲(chóng)草益腎顆粒對(duì)人腎小球系膜細(xì)胞的作用機(jī)制。方法:依據(jù)血清藥理學(xué),制備蟲(chóng)草益腎顆粒和福辛普利的含藥血清,然后進(jìn)行藥物血清干預(yù)HMCs的研究。體外培養(yǎng)HMCs,隨機(jī)分為正常組、高糖組、福辛普利組及蟲(chóng)草益腎顆粒低、中、高劑量組6組。培養(yǎng)24 h、48 h、72 h后收集細(xì)胞和細(xì)胞上清液。采用CCK-8法檢測(cè)24 h、48 h、72 h時(shí)HMCs增殖情況;采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)48 h、72 h時(shí)細(xì)胞內(nèi)活性氧簇(Reactive oxygen species,ROS)水平;采用比色法檢測(cè) 48 h、72 h 時(shí) HMCs上清液中超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(Glutathione peroxidase,GSH-PX)、過(guò)氧化氫酶(Catalase,CAT)活性和丙二醛(Malondialdehyde,MDA)含量的變化;Real-time PCR 檢測(cè)48 h、72 h時(shí)NADPH氧化酶亞型p22 phox和p47 phox的mRNA表達(dá);Western Blot檢測(cè)48 h、72 h時(shí)p22 phox和p47 phox的蛋白表達(dá)情況。結(jié)果:1.CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞增殖情況:與正常組比較,高糖(30 mmol/L)條件下,HMCs在24 h、48 h、72 h三個(gè)時(shí)間點(diǎn)均有細(xì)胞增殖的效應(yīng),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。48h和72h時(shí),與高糖組比較,福辛普利組與蟲(chóng)草益腎顆粒低、中、高劑量組均出現(xiàn)了對(duì)HMCs增殖的抑制作用,且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05或P0.01)。2.各組HMCs ROS表達(dá)情況比較:流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)結(jié)果顯示,同時(shí)間,與正常組比較,高糖組的HMCs內(nèi)ROS生成量明顯增多(P0.05);與高糖組比較,經(jīng)藥物干預(yù)后的福辛普利組、蟲(chóng)草低、中、高劑量組細(xì)胞內(nèi)ROS生成量明顯減少,且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01),提示各治療組均有療效。3.各組細(xì)胞上清液中的SOD、GSH-PX、CAT活力和MDA含量的變化:同時(shí)間比較,高糖刺激后SOD、GSH-PX、CAT活力顯著下降,MDA含量明顯升高(P0.01或P0.05),經(jīng)福辛普利和蟲(chóng)草益腎顆粒含藥血清干預(yù)后,同時(shí)間,與高糖組比較,SOD、GSH-PX、CAT活力不同程度升高,MDA含量下降(P0.01或P0.05)。4.各組人腎小球系膜細(xì)胞p22 phox和p47 phox mRNA表達(dá)情況比較:同時(shí)間,與正常組比較,高糖組p22 phox和p47 phox mRNA表達(dá)水平明顯升高(P0.01);同時(shí)間,與高糖組比較,各治療組均可不同程度地下調(diào) p22 phox 和 p47 phox mRNA 表達(dá)(P0.01)。5.各組人腎小球系膜細(xì)胞p22 phox和p47 phox蛋白表達(dá)量的比較:正常組HMCs中可低水平地表達(dá)p22 phox和p47 phox蛋白,與同時(shí)間點(diǎn)的正常組比較,高糖組中的p22 phox和p47 phox蛋白表達(dá)量明顯增多(P0.01);同時(shí)間,與高糖組比較,各治療組的p22 phox和p47 phox的蛋白表達(dá)量均下調(diào)(P0.01)。結(jié)論:1.高糖刺激下,可促進(jìn)HMCs的增殖,使活性氧簇ROS生成增多,降低SOD、GSH-PX、CAT活力、提高M(jìn)DA含量,上調(diào)p22phox和p47phox mRNA及蛋白表達(dá)水平,從而加劇氧化應(yīng)激反應(yīng)。2.蟲(chóng)草益腎顆粒對(duì)高糖培養(yǎng)下HMCs的增殖有抑制作用。3.蟲(chóng)草益腎顆�？赡芡ㄟ^(guò)降低活性氧簇ROS的生成、提高酶抗氧化系統(tǒng)中SOD、GSH-PX、CAT活力、降低MDA的含量、下調(diào)p22phox和p47 phox mRNA及蛋白表達(dá)水平等途徑來(lái)干預(yù)腎小球系膜細(xì)胞的氧化應(yīng)激反應(yīng)。4.抑制HMCs的增殖和氧化應(yīng)激反應(yīng)可能是蟲(chóng)草益腎顆粒防治DKD,保護(hù)腎臟,延緩疾病進(jìn)展的作用機(jī)制之一,同時(shí)該中藥復(fù)方的治療作用具有一定時(shí)間和劑量效應(yīng)依賴(lài)性。
【學(xué)位授予單位】：黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類(lèi)號(hào)】：R285

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本文編號(hào)：1298844