本文關(guān)鍵詞：乳腺癌相關(guān)的新型人雌激受體hERα剪接變體ERα30的克隆及其功能和作用機(jī)制的研究

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【摘要】：選擇性剪接從相同的基因產(chǎn)生許多不同的mRNA(剪接變體),使得有限數(shù)量的基因可以編碼多種不同的蛋白質(zhì)。越來(lái)越多的證據(jù)表明,剪接變體在癌癥的發(fā)展,臨床診斷和治療中均具有重要作用。從20世紀(jì)90年代初到現(xiàn)在,研究者們已經(jīng)發(fā)現(xiàn)許多人雌激素受體α(hERα)剪接變體,大多數(shù)具有一個(gè)或多個(gè)外顯子的缺失并且可以表達(dá)為蛋白質(zhì)。有的剪接變體可調(diào)控全長(zhǎng)型hERα(ERα66)的功能。它們?cè)谌橄侔┑男纬珊瓦M(jìn)展期間可能變得異常,從而通過(guò)某些未知的機(jī)制對(duì)乳腺癌細(xì)胞的行為產(chǎn)生影響,并且可以促進(jìn)乳腺癌的進(jìn)展,例如失去對(duì)抗雌激素治療反應(yīng)性。本研究首先從一例三陰性乳腺癌組織中發(fā)現(xiàn)并克隆了一種新的hERα剪接變體,命名為ERα30。該剪接變體的剪接方式較為特殊,將hERα基因外顯子4的前24bp直接剪接至外顯子6的最后44bp。由于外顯子5和外顯子7的完全缺失,ERα30的開(kāi)放閱讀框預(yù)測(cè)了具有30kDa分子量的截短型蛋白質(zhì)。與傳統(tǒng)的全長(zhǎng)型ERα66不同的是,ERα30缺乏配體結(jié)合域以及配體依賴(lài)的轉(zhuǎn)錄激活域(LBD/AF2),保留N端轉(zhuǎn)錄激活域(AF1),DNA結(jié)合域(DBD)和部分絞鏈區(qū)(Hinge),在其C端具有一段特殊的10個(gè)氨基酸序列的區(qū)域。我們運(yùn)用RT-PCR的方法檢測(cè)了33例原發(fā)性乳腺癌組織標(biāo)本中ERα30 mRNA的表達(dá),發(fā)現(xiàn)11個(gè)標(biāo)本(33.3%)在mRNA水平上表達(dá)ERα30。ERa30表達(dá)與臨床特征的相關(guān)性分析顯示ERα30在ERa66、孕激素受體(PR)陰性乳腺癌中的表達(dá)高于ERα66、PR陽(yáng)性乳腺癌,與年齡、絕經(jīng)狀態(tài)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤大小、臨床分期、HER-2表達(dá)狀態(tài)之間的關(guān)系不大。隨后,我們構(gòu)建了含ERα30的真核表達(dá)載體pEGFP-N1/ERα30,轉(zhuǎn)染ERα30陰性的人乳腺癌細(xì)胞系MDA-MB-231,通過(guò)G418篩選獲得ERα30過(guò)表達(dá)的人乳腺癌細(xì)胞系MDA-MB-231/ERα30。Western Blot檢出截短型的30k Da蛋白質(zhì)在穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系的表達(dá),同時(shí)我們采用MTT檢測(cè)細(xì)胞增殖能力、平板克隆形成試驗(yàn)測(cè)定細(xì)胞的克隆形成率、Transwell小室實(shí)驗(yàn)檢測(cè)轉(zhuǎn)移侵襲能力。研究結(jié)果表明,穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系MDA-MB-231/ERα30的相對(duì)增殖率、克隆形成率及轉(zhuǎn)移侵襲能力均高于對(duì)照組。最后,我們構(gòu)建ERα30-EGFP融合表達(dá)載體,發(fā)現(xiàn)ERα30-EGFP融合蛋白在MDA-MB-231細(xì)胞中的表達(dá)定位于細(xì)胞核中,實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR檢測(cè)結(jié)果表明,ERα30上調(diào)EGFR和c-jun的表達(dá),提示ERα30可能介導(dǎo)“非經(jīng)典”的信號(hào)途徑,例如配體非依賴(lài)性ERα30信號(hào)途徑,即通過(guò)上調(diào)EGFR的表達(dá)激活生長(zhǎng)因子信號(hào)傳導(dǎo)途徑和ERE非依賴(lài)性信號(hào)途徑,即通過(guò)蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用穩(wěn)定c-jun與DNA的結(jié)合而調(diào)節(jié)下游基因的轉(zhuǎn)錄,從而促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞的增殖、侵襲和遷移�？傊�,我們發(fā)現(xiàn)并克隆了一種新的人雌激素受體α(hERα)剪接變體,ERα30;并對(duì)其功能和作用機(jī)制進(jìn)行了初步研究。然而,仍有許多科學(xué)問(wèn)題尚未解決,需要進(jìn)一步的深入研究來(lái)明確ERα30在人類(lèi)乳腺癌發(fā)生發(fā)展中的意義,為乳腺癌相關(guān)的復(fù)雜生物學(xué)問(wèn)題提供更多新的解釋。
【學(xué)位授予單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類(lèi)號(hào)】：R737.9

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 陳鵬;馬忠森;王秀麗;李博;任錦;胡娛新;郟博;劉鋒;石瑩;;人HMGN5基因shRNA慢病毒載體構(gòu)建與RNAi效率的鑒定[J];中國(guó)實(shí)驗(yàn)診斷學(xué);2011年01期

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本文編號(hào)：1297756