本文關(guān)鍵詞：人血型抗原A糖基轉(zhuǎn)移酶表達重組質(zhì)粒體外轉(zhuǎn)染人乳腺癌細胞MDA-MB-231的抗腫瘤效應(yīng)研究

  更多相關(guān)文章： TNBC 血型抗原A糖基轉(zhuǎn)移酶 整合素 ADCC CDC

【摘要】：研究背景:三陰乳腺癌(TNBC)是指ER、PR和HER-2均為陰性的乳腺癌,占所有乳腺癌的15-24%,對常規(guī)治療的反應(yīng)不佳,因缺乏相應(yīng)靶點也無法從靶向治療及內(nèi)分泌治療中獲益,其早期復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移率高,預(yù)后差而成為乳腺癌治療中最為棘手的類型。近年來抗體靶向免疫治療中的單克隆抗體治療如曲妥珠單抗在HER-2過表達的乳腺癌患者中的成功應(yīng)用,也為TNBC的治療提供了新的思路。近年來出現(xiàn)了一些針對TNBC靶向治療如PARP抑制劑、表皮生長因子受體(Epidermal growth factor receptor,EGFR)抑制劑、抗血管內(nèi)皮生長因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)、m TOR抑制劑及TRAIL誘導(dǎo)劑等,但臨床資料顯示僅有少部分TNBC從中獲益,其在臨床應(yīng)用的效價及安全性尚需長期的評估,人們一直致力于尋找更好的靶點。許多研究顯示,腫瘤細胞包括乳腺癌細胞表面高表達BGA前體物質(zhì)H抗原,經(jīng)血型抗原糖基轉(zhuǎn)移酶糖基化作用,H抗原可轉(zhuǎn)變成血型抗原(A或B抗原)。BGA與腫瘤的惡性程度密切相關(guān),可以影響腫瘤細胞的分化、增殖、轉(zhuǎn)移等生物學(xué)特性。同時BGA是一類具有很強的免疫原性和抗原性的同種異型抗原,可被血型抗體識別并激活CDC和ADCC,例如臨床上血型不合輸血時會發(fā)的溶血反應(yīng)。此外,乳腺患者體內(nèi)的微環(huán)境多處于免疫抑制狀態(tài),APC不能有效的將腫瘤抗原遞呈給免疫系統(tǒng),而血型抗原是天然抗原,可直接被血型抗體識別�？煞窭肂GA的這些特點,使之成為TNBC治療的靶點是我們關(guān)注的重點。研究目的:本研究中從構(gòu)建BGA高表達的三陰乳腺癌MDA-MB-231細胞系入手,初步研究血型抗體對轉(zhuǎn)染后MDA-MB-231細胞的抗腫瘤效應(yīng)。同時觀察BGA對MDA-MB-231細胞的生物學(xué)行為的影響,并進一步探討其發(fā)生機制,為BGA在TNBC治療中的應(yīng)用提供理論基礎(chǔ)。研究方法:1.利用慢病毒轉(zhuǎn)染方法,建立BGA穩(wěn)定轉(zhuǎn)染且高表達的MDA-MB-231細胞系。2.應(yīng)用流式細胞術(shù)檢測轉(zhuǎn)染前后MDA-MB-231細胞表面BGA表達、細胞周期的變及同型血漿處理前后MDA-MB-231細胞的凋亡。3.應(yīng)用WST-1增殖抑制實驗檢測同型血漿、不同濃度5-FU及不同效靶比NK細胞對MDA-MB-231細胞增殖的影響。4.應(yīng)用劃痕致傷實驗、成球?qū)嶒灆z測轉(zhuǎn)染前后MDA-MB-231細胞侵襲轉(zhuǎn)移能力及克隆形成能力的變化。5.應(yīng)用ELISA方法檢測轉(zhuǎn)染前后MDA-MB-231細胞ATP及HMGB1的水平,探討細胞是否發(fā)生免疫原性死亡。6.用Western blot方法檢測轉(zhuǎn)染前后MDA-MB-231的細胞周期相關(guān)蛋白及調(diào)控蛋白、整合素相關(guān)信號通路中相關(guān)蛋白水平的改變,進行相關(guān)機制的研究。研究結(jié)果:1.應(yīng)用慢病毒轉(zhuǎn)染方法將血型抗原A糖基轉(zhuǎn)移酶轉(zhuǎn)染入三陰乳腺癌MDA-MB-231細胞系,經(jīng)流式細胞術(shù)檢測證實細胞轉(zhuǎn)染后高表達血型抗原A。2.轉(zhuǎn)染后MDA-MB-231細胞的增殖能力、侵襲轉(zhuǎn)移能力降低,克隆形成能力下降。3.轉(zhuǎn)染后MDA-MB-231細胞周期S期比例明顯增高,與5-FU合用可發(fā)生協(xié)同抗腫瘤作用。4.轉(zhuǎn)染后MDA-MB-231細胞ATP及HMGB1的釋放增多。5.在B型血漿作用下,轉(zhuǎn)染后MDA-MB-231細胞增殖和侵襲轉(zhuǎn)移能力明顯下降,凋亡增加。6.轉(zhuǎn)染后MDA-MB-231細胞整合素下游FAK介導(dǎo)的ERK1/2及PI3K通路被抑制,p-p38MAPK增高。研究結(jié)論:1.B型血漿可以通過介導(dǎo)CDC及ADCC效應(yīng)對血型抗原A高表達MDA-MB-231細胞發(fā)揮抗腫瘤作用。2.血型抗原A糖基轉(zhuǎn)移酶通過抑制“整合素-FAK”信號通路使MDA-MB-231細胞增殖、侵襲、轉(zhuǎn)移、克隆形成能力下降。3.血型抗原A糖基轉(zhuǎn)移酶誘導(dǎo)細胞發(fā)生S期同步化,并顯著增加了5-FU的化療敏感性。4.血型抗原A糖基轉(zhuǎn)移酶通過誘導(dǎo)細胞發(fā)生ICD而提高MDA-MB-231的免疫原性。
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R737.9

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本文編號：1297409