本文關鍵詞：基于Reelin蛋白研究先天腎虛影響大腦皮質(zhì)發(fā)育的分子機制

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【摘要】：目的本實驗采用“恐傷孕鼠”的方法復制腎精虧虛的模型,研究Reelin蛋白對先天腎虛仔鼠腦發(fā)育的影響機制。方法①本實驗采用3月齡SD(Sprague-Dawley)大鼠雌性40只,雄性20只,將其按2:1的比例合籠配對。受孕后的雌鼠用隨機取數(shù)法分為正常組、模型組和補腎組,每組各10只。自懷孕第一天起,模型組和補腎組每日以恐嚇為主的復合應激刺激孕鼠。補腎組自造模第一天起,每日予中藥左歸丸濃縮劑2ml/100g體重灌胃,正常組及模型組亦根據(jù)雌鼠體重予以生理鹽水灌胃,造模時間為整個妊娠至分娩期間。雌鼠分娩后,分別計算各組雌鼠每胎生產(chǎn)數(shù)(仔鼠總數(shù)/妊娠并分娩的雌鼠只數(shù))以評估雌鼠的生育力。分別稱量各組雌鼠所產(chǎn)仔鼠體重以及測量初生仔鼠身長。②仔鼠出生當天每窩隨機取1--2只仔鼠斷頭取全腦,稱取全腦濕重,計算各組仔鼠全腦濕重的平均值及腦重指數(shù)(腦重指數(shù)=全腦濕重mg/鼠體重g),然后將全腦固定,切取包含皮質(zhì)的腦片,行光鏡和電鏡觀察。③雌鼠分娩后,在仔鼠出生當天斷頭取血,用化學發(fā)光法檢測血清FT3、FT4、TSH的含量。④用免疫組化法檢測恐傷孕鼠對其仔鼠大腦Reelin、VLDLR及P-DAB1表達影響。⑤用RT-PCR法檢測恐傷孕鼠對仔鼠大腦皮質(zhì)Reelin、VLDLR及ApoER2的mRNA表達影響。結(jié)果①模型組孕鼠每胎生產(chǎn)數(shù)比正常組和補腎組明顯低(P0.01)。模型組仔鼠出生當天體重及身長與正常組和補腎組比較,有顯著性差異(P0.05)。②模型組仔鼠全腦濕重低于正常組和補腎組,模型組與正常組比較有顯著性差異(P0.05),正常組與補腎組仔鼠全腦濕重相比無明顯改變;仔鼠大腦組織包括皮質(zhì)區(qū)的形態(tài)學改變:模型組仔鼠大腦皮質(zhì)區(qū)光鏡下可見細胞較松散,組織結(jié)構較模糊,存在散在片狀水腫,水腫區(qū)域神經(jīng)細胞數(shù)目減少。電鏡下模型組仔鼠大腦皮質(zhì)區(qū)可見到多數(shù)神經(jīng)細胞出現(xiàn)細胞器結(jié)構異常,部分伴有細胞核固縮。正常組與補腎組仔鼠形態(tài)學相比無明顯改變。③正常組、模型組和補腎組三組血清FT3、TSH的含量比較,其結(jié)果無顯著性差異;模型組與正常組和補腎組比較,血清FT4的含量顯著降低(P0.05)。④正常組仔鼠大腦皮質(zhì)細胞中Reelin、VLDLR及P-DAB1蛋白表達最強;補腎組仔鼠大腦皮質(zhì)細胞Reelin、VLDLR及P-DAB1蛋白表達有所減弱;模型組仔鼠大腦皮質(zhì)細胞中Reelin、VLDLR及P-DAB1蛋白表達最弱;與正常對照組比較,補腎組和模型組仔鼠大腦皮質(zhì)Reelin、VLDLR及P-DAB1平均灰度值明顯降低(P0.01);與模型組比較,補腎組仔鼠大腦皮質(zhì)Reelin、VLDLR及P-DAB1的平均灰度值明顯升高(P0.01)。⑤補腎組和模型組仔鼠大腦皮質(zhì)Reelin、VLDLR及ApoER2mRNA表達均低于正常組(P0.01),模型組仔鼠大腦皮質(zhì)Reelin、VLDLR及ApoER2mRNA表達低于補腎組(P0.01)。結(jié)論本課題首次提出了“Reelin蛋白影響先天腎虛仔鼠大腦皮質(zhì)發(fā)育”的觀點,并從中醫(yī)學角度深入闡述探討腎對腦的結(jié)構和功能影響,以及Reelin蛋白與腦發(fā)育的關系。本實驗運用運用恐嚇為主的復合應激法刺激方法成功復制出腎精虧虛模型,通過一般情況觀察,我們發(fā)現(xiàn)模型組仔鼠具有先天腎虛的表現(xiàn);通過顯微鏡下觀察我們發(fā)現(xiàn)模型組仔鼠大腦皮質(zhì)發(fā)育存在明顯的障礙,出現(xiàn)一系列諸如大腦皮質(zhì)腦細胞的高爾基復合體肥大,細胞核核周水腫、固縮、染色質(zhì)凝集、線粒體腫脹等病理改變。補腎組仔鼠大腦皮質(zhì)在光學顯微鏡及電子顯微鏡下的變化與正常組仔鼠基本一致。表明中藥左歸丸方可有效阻斷先天腎虛對腦皮質(zhì)發(fā)育的影響。模型組仔鼠出現(xiàn)大腦皮質(zhì)細胞中Reelin、VLDLR及P-DAB1蛋白表達下調(diào),Reelin、VLDLR及ApoER2mRNA表達下調(diào),血清TH含量顯著下降。據(jù)此,我們推測Reelin信號通路和TH含量顯著下降是先天腎虛仔鼠大腦發(fā)育障礙的重要環(huán)節(jié)。左歸丸可以通過調(diào)節(jié)Reelin信號通路和TH含量而阻斷仔鼠大腦皮質(zhì)發(fā)育障礙。
【學位授予單位】：湖北中醫(yī)藥大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R285.5
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本文編號：1295333