本文關(guān)鍵詞：去泛素化酶RPN11促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞增殖和遷移

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【摘要】：乳腺癌的發(fā)病機(jī)制尚不明確。泛素化可以在許多方面影響癌癥的發(fā)生和發(fā)展。泛素化是一個(gè)動(dòng)態(tài)的、可逆的過程;而泛素化的反向反應(yīng)和調(diào)節(jié)是由去泛素化酶控制的。RPN11是一種重要的去泛素化酶,影響細(xì)胞活性及腫瘤轉(zhuǎn)化。有研究顯示RPN11在癌細(xì)胞中表達(dá)上調(diào),主要見于黑色素瘤、卵巢癌及白血病細(xì)胞,在這些癌中RPN11可作為惡性腫瘤的標(biāo)志。并可作為癌癥治療的一個(gè)靶點(diǎn)。為探討RPN11在乳腺癌發(fā)病機(jī)制中所起的作用,我們首先檢測對比RPN11在乳腺癌及其癌旁組織的表達(dá)情況。采用行業(yè)內(nèi)通用方法qRT-PCR對研究患者體內(nèi)癌組織中RPN11的表達(dá),結(jié)果顯示較癌旁組織,乳腺癌組織高表達(dá)RPN11。此外,我們檢索并分析GSE3744數(shù)據(jù)集,該數(shù)據(jù)集包含47例乳腺癌數(shù)據(jù),也同樣發(fā)現(xiàn)乳腺癌組織中高表達(dá)RPN11。我們應(yīng)用western blot的方法檢測6例乳腺癌新鮮組織及其癌旁組織中RPN11的表達(dá),也發(fā)現(xiàn)RPN11在乳腺癌組織中高表達(dá)。我們通過免疫組化的方法檢測RPN11在142例乳腺癌病例的組織芯片中的表達(dá)情況。結(jié)果顯示,RPN11在正常組織中表達(dá)微弱,在乳腺癌組織中高表達(dá)。同時(shí),RPN11高表達(dá)與高臨床分期密切相關(guān)(P0.05)。在乳腺癌細(xì)胞系MDA-MB-231及T47D中,我們應(yīng)用siRNA的方法研究降低RPN11表達(dá)后對細(xì)胞增殖的影響。通過應(yīng)用MTT法檢測,結(jié)果表明降低RPN11的表達(dá)顯著抑制乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231及T47D的增殖。此外,我們應(yīng)用流式細(xì)胞技術(shù)檢測了 RPN11對細(xì)胞凋亡及細(xì)胞周期的影響。同樣,數(shù)據(jù)表明敲低RPN11的表達(dá)可引起細(xì)胞凋亡率的提高以及細(xì)胞周期抑制。其中我們還觀察到,RPN11表達(dá)的降低誘導(dǎo)細(xì)胞周期在G0/G1停滯。另外,我們通過western blot的方法檢測了細(xì)胞周期蛋白D1及c-PARP的表達(dá),結(jié)果表明,敲低RPN11的表達(dá)可上調(diào)c-PARP的表達(dá),抑制細(xì)胞周期蛋白D1的表達(dá)。相反,我們在人乳腺癌細(xì)胞系MCF7及Hs578T中通過高表達(dá)載體過表達(dá)RPN11,結(jié)果表明過表達(dá)RPN11促進(jìn)細(xì)胞增殖,使細(xì)胞周期進(jìn)展,抑制凋亡。Transwell實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,敲低RPN11的表達(dá)后乳腺癌細(xì)胞的遷移能力下降。上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)是腫瘤細(xì)胞具有遷移能力的重要一步。我們通過qRT-PCR的方法檢測敲低RPN11后EMT相關(guān)基因的表達(dá)。我們發(fā)現(xiàn)E-cadherin表達(dá)上調(diào),N-cadherin、FN1及vimentin表達(dá)下降。EMT相關(guān)的調(diào)節(jié)因子如Snail(SNAI1)和Slug(SNAI2)也同樣受抑制。Western blot檢測也顯示了類似的結(jié)果�？偟膩碚f,我們的數(shù)據(jù)表明,在乳腺癌中Rpn11的高表達(dá)可能參與促進(jìn)癌細(xì)胞遷移。本次研究在乳腺癌組織中證實(shí)了 RPN11的表達(dá)情況并確認(rèn)其對乳腺癌預(yù)后的影響。通過一系列的細(xì)胞學(xué)實(shí)驗(yàn)證實(shí)其對細(xì)胞增殖、細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡及細(xì)胞遷移的影響。RPN11可作為靶點(diǎn)之一,為靶向治療乳腺癌提供理論依據(jù)。
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R737.9

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