本文關(guān)鍵詞：活血養(yǎng)血湯對兔脊髓缺血再灌注損傷Cytc—Caspase-3介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡通路的影響

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【摘要】：目的本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用兔SCⅡ模型研究活血養(yǎng)血湯對兔SCⅡ脊髓組織水腫情況和Ca~(2+)濃度的影響,以及對脊髓組織Cytc、Hsp70、Bcl-2、Bax、Caspase-3的調(diào)節(jié)作用,探討活血養(yǎng)血湯防治SCⅡ模型Cytc—Caspase-3介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡通路的作用機(jī)制,為活血養(yǎng)血湯的臨床應(yīng)用奠定實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。方法1.SCⅡ動物模型的研究參照Kwun的造模方法,以阻斷兔第3-6腰動脈30min后再灌注1h的方法建立SCⅡ模型,并通過數(shù)字減影技術(shù)觀察血供情況,以明確缺血前、動脈阻斷后缺血情況及再灌注后血流恢復(fù)情況,病理切片觀察脊髓組織神經(jīng)元損傷情況,以鑒定此種造模方法的可行性。2.活血養(yǎng)血湯對兔SCⅡ水腫、Ca~(2+)含量的影響活血養(yǎng)血湯干預(yù)兔SCⅡ模型,對比桃紅四物湯,通過計算脊髓組織含水量的方法觀察活血養(yǎng)血湯對兔SCⅡ模型水腫的影響,通過采用組織鈣離子濃度熒光定量檢測的方法測定脊髓組織Ca~(2+)濃度探討活血養(yǎng)血湯對兔SCⅡ模型Ca~(2+)濃度的影響。3.活血養(yǎng)血湯對兔SCⅡ模型Cytc—Caspase-3介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡通路的影響活血養(yǎng)血湯干預(yù)兔SCⅡ模型,對比桃紅四物湯,通過免疫組化、酶聯(lián)免疫、原位凋亡檢測技術(shù)及RT-PCR等方法檢測Cytc、HSP70、Bcl-2、Bax、Caspase-3含量的變化和神經(jīng)元凋亡情況,觀察活血養(yǎng)血湯對兔SCⅡ模型Cytc—Caspase-3介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡通路的影響。結(jié)果1.數(shù)字減影技術(shù)觀察結(jié)果見阻斷腰動脈時,造影劑到達(dá)阻斷部位以后不能通過夾閉部位,當(dāng)去除血管夾時,造影劑能再次進(jìn)入被阻斷后的血管。HE染色見,空白組脊髓神經(jīng)元細(xì)胞基本無異常,單純?nèi)毖M見神經(jīng)元周圍空泡形成,細(xì)胞核位置偏離中心,核仁不清。缺血再灌注組脊髓神經(jīng)元細(xì)胞多呈梭形改變,細(xì)胞核固縮,核仁消失。尼氏染色見,空白組可見較多尼氏小體,形態(tài)完整,染色呈藍(lán)色,細(xì)胞核圓形,核仁清晰;單純?nèi)毖M尼氏小體明顯減少,神經(jīng)元細(xì)胞腫脹,輪廓不清,細(xì)胞核固縮,缺血再灌注組見尼氏小體減少,大量溶解,周圍出現(xiàn)水腫,細(xì)胞核固縮,核仁不清。神經(jīng)元計數(shù)結(jié)果見,單純?nèi)毖M、缺血再灌注與空白組相比,神經(jīng)元數(shù)目均減少,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01),缺血再灌注組與單純?nèi)毖M比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。2.含水量檢測見活血養(yǎng)血湯組及桃紅四物湯組脊髓含水量有所下降,與生理鹽水組相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),活血養(yǎng)血湯組與桃紅四物湯組比較,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。Ca~(2+)含量檢測見桃紅四物湯組及活血養(yǎng)血湯組與生理鹽水組相比細(xì)胞內(nèi)Ca~(2+)有所下降(P0.05),活血養(yǎng)血湯組與桃紅四物湯組相比有所下降,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。3.檢測藥物干預(yù)后Cytc、HSP70、Bcl-2、Bax3、Caspase-3的變化,免疫組化結(jié)果見,桃紅四物湯組、活血養(yǎng)血湯組與生理鹽水組相比,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01),活血養(yǎng)血湯組和桃紅四物湯組比較,Cytc無明顯差異(P0.05),余差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。酶聯(lián)免疫結(jié)果見,桃紅四物湯組、活血養(yǎng)血湯組和生理鹽水組相比,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01,P0.05)),活血養(yǎng)血湯組與桃紅四物湯組比較,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。原位凋亡檢測結(jié)果見,桃紅四物湯組、活血養(yǎng)血湯組和生理鹽水組相比,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01),活血養(yǎng)血湯組與桃紅四物湯組比較,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。RT-PCR檢測Caspase-3的變化,桃紅四物湯組、活血養(yǎng)血湯組與生理鹽水組相比,活血養(yǎng)血湯組與桃紅四物湯組比較,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論1.采用夾閉兔第3-6腰動脈30min后再灌注1h的方法可以造成腰段脊髓的損傷,模型制備成功。2.活血養(yǎng)血湯可減輕兔SCⅡ模型水腫,改善兔SCⅡ模型Ca~(2+)超載,從而達(dá)到對SCⅡ的防治作用,且作用優(yōu)于桃紅四物湯。3.活血養(yǎng)血湯可降低SCⅡ模型Cytc、Bax、Caspase-3的表達(dá),升高HSP70、Bcl-2的表達(dá),減少細(xì)胞凋亡,從而從整體上抑制Cytc—Caspase-3介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡,達(dá)到防治SCⅡ的作用,且作用優(yōu)于桃紅四物湯。
【學(xué)位授予單位】：福建中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R285.5

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本文編號：1295194