本文關(guān)鍵詞：BAMBI對(duì)ox-LDL誘導(dǎo)的血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷的影響及機(jī)制研究

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【摘要】：目的:探討激活素膜結(jié)合抑制劑(bmp and activin membrane-bound inhibitor,BAMBI)對(duì)氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)誘導(dǎo)的人靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(human umbilical vascular endothelial cell,HUVECs)損傷的影響及其分子調(diào)控機(jī)制。方法:1.BAMBI在ox-LDL誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞損傷中的作用HUVECs 分為以下六組:對(duì)照(control)組;ox-LDL 組;BAMBI+ox-LDL組;pcDNA3.1+ox-LDL 組;si-BAMBI+ox-LDL 組;si-control+ ox-LDL 組。MTT方法檢測細(xì)胞增殖。流式細(xì)胞儀檢測凋亡。RT-PCR檢測mRNA水平。Western blot檢測蛋白含量。流式細(xì)胞儀檢測ROS水平。試劑盒檢測亞硝酸鹽和cGMP水平。2.BAMBI通過調(diào)控TGF-β/Smad通路發(fā)揮生物學(xué)作用HUVECs 分為以下六組:對(duì)照(control)組;ox-LDL 組;BAMBI+ox-LDL組;TGF-β+BAMBI+ox-LDL 組;si-BAMBI+ox-LDL 組;TGF-β+si-BAMBI+ox-LDL組。檢測方法同方法1。3.Ox-LDL/TLR4/NF-κB 信號(hào)通路調(diào)控 BAMBI/TGF-β 通路HUVECs 分為以下八組:對(duì)照(control)組;ox-LDL 組;BAMBI+ox-LDL組;CLI-095+BAMBI+ox-LDL 組;PDTC+BAMBI+ox-LDL 組;si-BAMBI+ox-LDL 組;CLI-095+si-BAMBI+ox-LDL 組;PDTC+si-BAMBI+ox-LDL組。檢測方法同方法1。4.miR-373 調(diào)控 ox-LDL 誘導(dǎo)的 HUVECs 中 BAMBI 表達(dá)HUVECs 分為以下六組:對(duì)照(control)組;ox-LDL 組;mimic+ox-LDL組;mimic+BAMBI+ox-LDL 組;inhibitor+ox-LDL 組;inhibitor+si-BAMBI+ox-LDL組。雙熒光素酶報(bào)告基因檢測試劑盒檢測miR-373與BAMBI的靶向關(guān)系,其他檢測方法同方法1。結(jié)果:1.BAMBI在ox-LDL誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞損傷中的作用研究結(jié)果顯示,BAMBI在ox-LDL誘導(dǎo)的HUVECs中表達(dá)下調(diào)。在ox-LDL誘導(dǎo)的HUVECs中,過表達(dá)BAMBI能夠促進(jìn)細(xì)胞增殖;降低細(xì)胞凋亡;下調(diào)炎性因子 IL-1β、IL-6、TNF-α 和黏附因子 E-selectin、VCAM1、ICAM1 的表達(dá);抑制氧化應(yīng)激反應(yīng),降低ROS和MDA水平,同時(shí)提高SOD的表達(dá);提高NO和eNOS的產(chǎn)生。當(dāng)在ox-LDL誘導(dǎo)的HUVECs中抑制BAMBI表達(dá)時(shí),作用與過表達(dá)BAMBI相反,抑制細(xì)胞增殖;促進(jìn)細(xì)胞凋亡;上調(diào)炎性因子IL-1β、IL-6、TNF-a和黏附因子E-selectin、VCAM1、ICAM1的表達(dá);促進(jìn)氧化應(yīng)激反應(yīng)并降低NO和eNOS的產(chǎn)生。2.BAMBI通過調(diào)控TGF-β/Smad通路發(fā)揮生物學(xué)作用研究結(jié)果顯示,在ox-LDL誘導(dǎo)的HUVECs中,TGF-β、p-Smad2和p-Smad3的表達(dá)水平上調(diào)。過表達(dá)TGF-β能夠部分逆轉(zhuǎn)BAMBI過表達(dá)在ox-LDL誘導(dǎo)的HUVECs中的抗內(nèi)皮細(xì)胞損傷作用,從而抑制細(xì)胞增殖;增加細(xì)胞凋亡;上調(diào)炎性因子和黏附因子的表達(dá);促進(jìn)氧化應(yīng)激反應(yīng)并降低NO和eNOS的產(chǎn)生。相反地,過表達(dá)TGF-β能夠加劇BAMBI抑制在ox-LDL誘導(dǎo)的HUVECs中的促內(nèi)皮細(xì)胞損傷作用。3.Ox-LDL/TLR4/NF-κB 信號(hào)通路調(diào)控 BAMBI/TGF-β 通路研究結(jié)果顯示,在ox-LDL誘導(dǎo)的HUVECs中,TLR4、p-IκB-α和p-p65的蛋白表達(dá)水平上調(diào)。TLR4抑制劑CLI-095或NF-κB抑制劑PDTC預(yù)處理能夠上調(diào)BAMBI的表達(dá),并且能夠加強(qiáng)BAMBI過表達(dá)在ox-LDL誘導(dǎo)的HUVECs中的抗內(nèi)皮細(xì)胞損傷作用,部分逆轉(zhuǎn)BAMBI抑制在ox-LDL誘導(dǎo)的HUVECs中的促內(nèi)皮細(xì)胞損傷作用。4.miR-373 調(diào)控 ox-LDL 誘導(dǎo)的 HUVECs 中 BAMBI 表達(dá)研究結(jié)果顯示,在ox-LDL誘導(dǎo)的HUVECs中,miR-373表達(dá)上調(diào),能夠靶向BAMBI mRNA 3'-UTR來調(diào)控其表達(dá)。miR-373通過調(diào)控BAMBI介導(dǎo)的TGF-β/Smad信號(hào)通路發(fā)揮生物學(xué)作用。抑制miR-373表達(dá),能夠抵抗ox-LDL誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞損傷,包括促進(jìn)細(xì)胞增殖;降低細(xì)胞凋亡;下調(diào)炎性因子和黏附因子的表達(dá);抑制氧化應(yīng)激反應(yīng)并提高NO和eNOS的產(chǎn)生。結(jié)論:綜上所述,本研究結(jié)果表明在ox-LDL誘導(dǎo)的HUVECs中,BAMBI表達(dá)下調(diào),其下游TGF-β/Smad通路激活。過表達(dá)BAMBI能夠抑制TGF-β/Smad通路,促進(jìn)細(xì)胞增殖;降低細(xì)胞凋亡;下調(diào)炎性因子和黏附因子的表達(dá);抑制氧化應(yīng)激反應(yīng)并提高NO和eNOS的產(chǎn)生,從而抵抗內(nèi)皮細(xì)胞損傷。抑制TLR4/NF-κB信號(hào)能夠上調(diào)BAMBI的表達(dá),提示TLR4/NF-κB/BAMBI通路在內(nèi)皮細(xì)胞損傷中發(fā)揮重要的作用。另外,BAMBI是miR-373的一個(gè)靶基因,抑制miR-373通過上調(diào)BAMBI抵抗內(nèi)皮細(xì)胞損傷。我們的研究揭示了TLR4/NF-κB(或miR-373)/BAMBI/TGF-3/Smad信號(hào)通路在內(nèi)皮損傷中的調(diào)控作用,進(jìn)一步闡釋了內(nèi)皮損傷的機(jī)理,為防治與內(nèi)皮損傷相關(guān)的心血管疾病提供了理論依據(jù)。
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R54

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1 尢家，

本文編號(hào)：1287967