本文關(guān)鍵詞：針刺抑制基質(zhì)金屬蛋白酶可延長腦梗死溶栓時間窗的實驗研究

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【摘要】：本學(xué)位論文得到國家自然科學(xué)基金面上項目"基于ERK1/2信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的針刺延長腦梗死溶栓時間窗的實驗研究(項目編號81674067)與江蘇省自然科學(xué)技基金面上項目"針刺抑制基質(zhì)金屬蛋白酶可延長腦梗死溶栓時間窗的實驗研究(項目編號BK20131458)的資助。目的:rt-PA靜脈溶栓療法被公認為是治療急性腦梗死最有效的干預(yù)手段。但由于嚴格溶栓時間窗(4.5h)的限制,限制了其臨床的廣泛運用,如何延長腦梗死時間窗一直是醫(yī)學(xué)界廣泛關(guān)注的熱點和難點。課題組前期研究發(fā)現(xiàn),針刺具有延長腦梗死溶栓時間窗的潛在可行性。有鑒于此,本研究擬首先明確針刺延長腦梗死溶栓時間窗的效應(yīng),其次探究針刺延長溶栓時間窗的作用機理,為臨床延長腦梗死溶栓時間窗提供有效方法和高層次的理論依據(jù),造福于廣大急性腦梗死患者。方法:實驗選用SPF級、雄性SD大鼠,采用大鼠自體血栓栓塞模型為腦梗死研究對象,分為正常組(Normal group)、假手術(shù)組(ShamGroup)、缺血模型組(Model Group)、阿替普酶溶栓組(rt-PA Group)、針刺干預(yù)后溶栓組(Acupuncture Group),其中后3組分別按照各溶栓時間點分為3h、4.5h、6h、9h溶栓亞組,急性腦梗死模型建立成功后2h,針刺干預(yù)采用"醒腦開竅"針刺法作為干預(yù)方法,各組大鼠(除正常組和假手術(shù)組外)予以靜脈注射rt-PA溶栓治療,并于24h后取相應(yīng)組織進行觀察。觀察對比針刺前后各組大鼠神經(jīng)行為學(xué)改變、腦梗死體積百分比、腦出血量、腦含水量、血腦屏障通透性的改變,并通過HE染色觀察、qPCR和western blot方法檢測IL-1β、TNF-α、Claudin-5、Occludin的表達,明膠酶譜法檢測MMP-2、MMP-9的酶活性改變。結(jié)果:(1)大鼠神經(jīng)功能評分:model group與sham group相比較,神經(jīng)功能評分明顯增加,其差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01):rt-PA group與model group相比較,超時間窗外溶栓(6h、9h)的各組大鼠神經(jīng)功能均有不同程度改變,但在時間窗內(nèi)溶栓(3h、4.5h),大鼠神經(jīng)功能損傷癥狀改善程度較為顯著,時間窗內(nèi)rt-PA溶栓治療有效(P0.05);Acupuncture group與rt-PA group比較,針刺能夠有效改善大鼠神經(jīng)功能損傷癥狀,尤其以針刺干預(yù)6h亞組改善最為顯著,其差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。(2)大鼠腦梗死體積百分比:model group與sham group相比較,腦梗死體積明顯增加,其差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01);rt-PA group與model group相比較,超時間窗外溶栓(6h、9h)的各組大鼠腦梗死體積均有不同程度降低,但在時間窗內(nèi)溶栓(3h、4.5h),腦梗死體積改善程度較為顯著,提示時間窗內(nèi)rt-PA溶栓治療有效(P0.05);Acupuncture group與rt-PA group比較,針刺能夠有效改善大鼠腦梗死體積,尤其以針刺干預(yù)6h亞組改善最為顯著,其差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。(3)大鼠腦出血量:rt-PA group與model group相比較,超時間窗外溶栓(6h、9h)的各組大鼠腦出血量呈上升趨勢,但在時間窗內(nèi)溶栓(3h、4.5h),腦出血量明顯下降,提示時間窗內(nèi)rt-PA溶栓治療有效(P0.05);Acupuncture group與rt-PA group比較,針刺能夠有效改善大鼠腦出血癥狀,尤其以針刺干預(yù)6h亞組改善最為顯著,其差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。(4)大鼠腦含水量:model group與sham group相比較,大鼠腦組織含水量明顯增加,其差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01);rt-PA group與model group相比較,超時間窗外溶栓(6h、9h)的各組大鼠腦組織含水量均有不同程度增加,但在時間窗內(nèi)溶栓(3h、4.5h),大鼠腦組織含水量降低較為顯著,提示溶栓治療有效(P0.05);Acupuncture group與rt-PA group比較,針刺能夠有效降低大鼠腦組織含水量,尤其以針刺干預(yù)6h亞組改善最為顯著,其差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。(5)伊文氏藍滲透法:model group與sham group相比較,大鼠血腦屏障損傷程度增加,其差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);rt-PA group與model group相比較,超時間窗外溶栓(6h、9h)的各組大鼠血腦屏障均有不同程度損傷,但在時間窗內(nèi)溶栓(3h、4.5h),大鼠血腦屏障改善程度較為顯著,溶栓治療有效(P0.05);Acupuncture group與rt-PA group比較,針刺能夠有效減輕rt-PA溶栓后大鼠血腦屏障損傷癥狀,尤其以針刺干預(yù)6h亞組改善最為顯著,其差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。(6)各組大鼠腦組織中炎癥因子的表達:model group與sham group相比較,超時間窗外溶栓(6h、9h)的各組大鼠腦組織中IL-1β、TNF-α的mRNA和蛋白表達明顯增高,但在時間窗內(nèi)溶栓(3h、4.5h),IL-1β、TNF-α的mRNA和蛋白表達呈明顯下降趨勢,溶栓治療有效(P0.05);Acupuncture group與rt-PA group比較,針刺能夠下調(diào)大鼠缺血區(qū)組織中IL-1 β、TNF-α的mRNA和蛋白表達,尤其以針刺干預(yù)6h亞組改善最為顯著,其差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。(7)各組大鼠腦組織中MMP-9、MMP-2酶活性的檢測::model group與shamm group相比較,超時間窗外溶栓(6h、9h)的各組大鼠腦組織中MMP-9、MMP-2酶活性的抑制并不明顯,但在3h、4.5h溶栓之后,MMP-9、MMP-2酶活性抑制明顯降低,溶栓干預(yù)有效(P0.05);Acupuncture group與rt-PA group比較,針刺能夠下調(diào)大鼠缺血區(qū)組織中MMP-9、MMP-2的活性,尤其以針刺干預(yù)6h亞組改善最為顯著,其差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。(8)各組大鼠腦組織中 Occludin、Claudin-5 的表達:model group 與 sham group 相比較,超時間窗外溶栓(6h、9h)的各組中大鼠腦組織中Claudin-5、Occludin的表達下調(diào),但在時間窗內(nèi)溶栓(3h、4.5h),Claudin-5、Occludin表達呈明顯上升趨勢,溶栓治療有效(P0.05);Acupuncture group與rt-PA group比較,針刺能有效上調(diào)Occludin、Claudin-5的蛋白表達,尤其以針刺干預(yù)6h亞組改善最為顯著,其差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論:(1)rt-PA溶栓療法在急性腦梗死治療中療效肯定,但由于受到嚴格溶栓時間窗限制,極易引發(fā)血腦屏障損傷,且并發(fā)癥的發(fā)生和發(fā)展程度會因錯過最佳溶栓時間而呈逐漸加重趨勢。(2)針刺及時干預(yù)能夠有效改善腦梗死模型大鼠神經(jīng)功能損傷程度、血腦屏障通透性、腦水腫程度和顱內(nèi)出血性轉(zhuǎn)化等癥狀的發(fā)展,具有延長腦梗死時間窗的效應(yīng),其溶栓時間窗可延長到4.5h外,甚至到6h。(3)針刺能夠下調(diào)腦缺血損傷組織中炎癥因子的mRNA和蛋白表達,減輕炎癥反應(yīng)的程度,繼而抑制基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP-2和MMP-9)的過度生成,并通過上調(diào)緊密連接蛋白從而實現(xiàn)對血腦屏障結(jié)構(gòu)和功能的保護作用。這可能是針刺延長腦梗死溶栓時間窗的核心機制,對臨床有效治療腦梗死提供了行新的思路和方法。
【學(xué)位授予單位】：南京中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R245

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本文編號：1284886