本文關(guān)鍵詞：沙門氏菌mcr-1基因傳播機(jī)制與食源性耐藥致病菌檢測(cè)芯片研究

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【摘要】：食源性致病菌是引起食品安全事件的最主要因素,突破食源性致病菌檢測(cè)尤其是快速檢測(cè)技術(shù),是推動(dòng)食源性致病菌監(jiān)測(cè)與控制工作的關(guān)鍵。細(xì)菌耐藥性已成為當(dāng)前全球最為突出的公共衛(wèi)生問題,為了加強(qiáng)耐藥性風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估與控制,國(guó)內(nèi)外均在針對(duì)重要食源性致病菌開展耐藥性的形成機(jī)制與流行特征研究。沙門氏菌是最重要的革蘭氏陰性食源性致病菌,常定植于畜禽體內(nèi),造成肉、蛋、奶污染,引起食物中毒。最近,人們十分關(guān)注由mcr-1(mobile colistin resistance)基因引起的革蘭氏陰性菌多黏菌素耐藥性問題,但目前對(duì)我國(guó)沙門氏菌中mcr-1基因的流行特征與傳播機(jī)制仍缺乏了解。為此,本研究擬在調(diào)查我國(guó)畜禽源和人源沙門氏菌的耐藥特征及mcr-1基因的流行特征基礎(chǔ)上,研究沙門氏菌中mcr-1基因的傳播機(jī)制,建立食源性耐藥致病菌快速、高通量檢測(cè)基因芯片。首先,本研究分析了 2012-2015年1312株畜禽源沙門氏菌和2034株人源沙門氏菌的耐藥特征,調(diào)查了mcr-1基因在畜禽源和人源沙門氏菌中的流行情況。結(jié)果發(fā)現(xiàn):畜禽源沙門氏菌與人源沙門氏菌的耐藥特征有所不同,2012-2015年畜禽源沙門氏菌對(duì)磺胺異VA唑、四環(huán)素和氨芐西林的耐藥最為嚴(yán)重,人源沙門氏菌對(duì)環(huán)丙沙星、頭孢噻肟和慶大霉素的耐藥最為嚴(yán)重。人源沙門氏菌多重耐藥情況比畜禽源沙門多重耐藥情況嚴(yán)重;畜禽源沙門氏菌mcr-1基因檢出率為1.98%(26/1312)(mcr-1基因攜帶株全部為豬源沙門氏菌),人源沙門氏菌mcr-1基因檢出率為1.38%(28/2034);豬源和人源攜帶mcr-1基因的沙門氏菌主要是鼠傷寒沙門氏菌。其次,本研究從不同角度(MLST、PFGE和SNPs),探討了 54株mcr-1陽性沙門氏菌的分子流行特點(diǎn),然后,分析了 mcr-1基因在豬源和人源沙門氏菌中的S1-PFGE定位情況,并調(diào)查了沙門氏菌中攜帶mcr-1基因質(zhì)粒的接合轉(zhuǎn)移屬性,最后,分析了攜帶mcr-1基因質(zhì)粒的分子遺傳環(huán)境。結(jié)果發(fā)現(xiàn):豬源和人源攜帶mcr-1基因沙門氏菌的優(yōu)勢(shì)分子分型為ST34,并且攜帶mcr-1基因的沙門氏菌存在細(xì)菌克隆傳播的可能性;mcr-1基因定位于不同大小的質(zhì)粒,質(zhì)粒骨架類型主要包括IncX4、IncI2和IncHI2三種分型。質(zhì)粒接合轉(zhuǎn)移類型包括接合轉(zhuǎn)移成功和接合轉(zhuǎn)移不成功兩種類型,其中,mcr-1基因可以直接通過細(xì)菌之間結(jié)合轉(zhuǎn)移的途徑進(jìn)行傳播,tra基因的缺失可能是導(dǎo)致mcr-1質(zhì)粒接合轉(zhuǎn)移不成功的關(guān)鍵。最后,本研究針對(duì)沙門氏菌等22種常見食源性致病菌及其耐藥基因,制備了快速、高通量檢測(cè)基因芯片,并探討了基因芯片的DNA處理策略。采用多重PCR和隨機(jī)引物PCR的DNA處理策略進(jìn)行芯片檢測(cè)的特異性分別為95%,94%;靈敏度分別為1ng/μL,800ng/μL。本芯片兼容了多重PCR和隨機(jī)引物PCR的DNA處理策略的各自優(yōu)點(diǎn),即:多重PCR基因芯片靈敏度高,而隨機(jī)引物PCR基因芯片高通量的性能突出。上述研究,為我國(guó)沙門氏菌耐藥性風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估提供了基礎(chǔ)數(shù)據(jù)和理論依據(jù),豐富了食源性耐藥致病菌的快速檢測(cè)方法。
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R155.3;S852.61

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