本文關鍵詞：血清CCL17水平及CCL17基因單核苷酸多態(tài)性與冠心病的相關性研究

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【摘要】：背景與目的冠狀動脈性心臟病(coronaryarterydisease,CAD)簡稱冠心病,其主要病理基礎是動脈粥樣硬化(atherosclerosis,AS)。AS的發(fā)病機制尚不完全清楚,炎性反應的作用逐漸受到重視。CC趨化因子配體17(CCchemokine ligand 17,CCL17)屬于CC趨化因子亞家族,AS斑塊內(nèi)的CCL17可以募集炎性細胞,同時抑制具有抗炎作用的調(diào)節(jié)性T細胞(regulatory T cells,Tregs)的功能,使促炎抗炎反應失衡,斑塊擴大且變得不穩(wěn)定,可能具有促進CAD的作用。但是人群中CCL17與CAD的關系尚不明確,本研究擬探索人血清CCL17水平及CCL17單核苷酸多態(tài)性(single nucleotide polymorphism,SNP)與CAD發(fā)病的關系,并對關聯(lián)分析陽性的SNP位點進行功能分析,以期為今后篩查CAD高危人群及發(fā)現(xiàn)新的治療靶點提供線索。材料與方法1.連續(xù)入選2013年1月至2013年12月于北京協(xié)和醫(yī)院行冠狀動脈造影檢查者作為研究人群,應用酶聯(lián)免疫吸附測定(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)檢測血清CCL17水平并分析其與CAD的相關性。2.應用HapMap數(shù)據(jù)庫和Haploview4.2軟件對CCL17基因的SNPs進行連鎖不平衡(linkagedisequilibrium,LD)分析,篩選出標簽SNP以覆蓋整個CCL17基因的多態(tài)性信息。3.應用Taqman探針方法對研究人群的標簽SNPs進行基因分型,分析其與CAD及血清CCL17水平的相關性。4.通過生物信息學軟件TRANSFAC和Jaspar對關聯(lián)分析陽性的SNP位點rs223828進行功能預測。5.rs223828位點被預測可能與轉(zhuǎn)錄因子激活蛋白1(activator protein,AP-1)結(jié)合,具有潛在轉(zhuǎn)錄調(diào)控功能,克隆rs223828位點所在區(qū)域序列,構建pGL3-Basic重組質(zhì)粒,轉(zhuǎn)染THP-1細胞,通過雙熒光素酶報告基因系統(tǒng)分析轉(zhuǎn)錄活性。6.應用凝膠遷移(electrophoretic mobility shift assay,EMSA)及超遷移(Super-shift)實驗在體外水平分析rs223828位點C等位基因及T等位基因與AP-1結(jié)合能力的差異。7應用染色質(zhì)免疫共沉淀(chromatinimmunoprecipitation,ChIP)及實時定量PCR技術在體內(nèi)水平分析rs223828位點C等位基因及T等位基因與AP-1結(jié)合能力的差異。結(jié)果1.共813例CAD及158例非CAD個體入選本研究,CAD患者血清CCL17水平顯著高于非CAD患者,且血清CCL17水平隨病情由輕到重具有線性升高的趨勢,與代表冠狀動脈狹窄程度的Gensini評分(Gensiniscore,GSS)呈正相關關系。2.選取了 CCL17 基因的 5 個標簽 SNP:rs223895、rs4784805、rs9302690、rs223899及 rs223828。3.共檢測了 794例CAD及153例非CAD個體標簽SNP的基因型,發(fā)現(xiàn)rs223899位點的次要等位基因T以及rs223828位點的次要等位基因T是CAD的危險因素,其中rs223828位點的T等位基因與外周血CCL17水平升高相關。4.TRANSFAC和Jaspar軟件分析提示rs223828位點是AP-1的潛在結(jié)合位點,其中T等位基因更易與AP-1結(jié)合,從而促進CCL17基因的轉(zhuǎn)錄表達。5.雙熒光素酶報告基因?qū)嶒灡砻靼琓等位基因的重組質(zhì)粒表達的熒光素酶顯著高于包含C等位基因的重組質(zhì)粒,T等位基因可能具有增強轉(zhuǎn)錄的特性。6.EMSA實驗表明包含T等位基因的生物素探針與核蛋白中的某一成分的結(jié)合能力高于包含C等位基因的探針,Super-shift實驗與ChIP實驗實驗分別在體外和體內(nèi)水平證明rs223828位點多態(tài)性影響了轉(zhuǎn)錄因子AP-1的結(jié)合。結(jié)論本研究首次發(fā)現(xiàn)人血清CCL17水平與CAD發(fā)病及嚴重程度相關,該基因的SNP位點rs223828可能通過影響轉(zhuǎn)錄因子AP-1的結(jié)合進而影響CCL17的表達,從而影響CAD的易感性。本研究尚存在一些不足之處,首先血清CCL17水平與CAD發(fā)病的因果關系需通過前瞻性隊列研究進一步證實,另外rs223828位點的功能尚未在細胞及動物實驗中證實。在之后的工作中,準備開展前瞻性隊列研究以及細胞和動物實驗,為篩查CAD高危人群及尋找新的治療靶點提供線索。
【學位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學院
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R541.4

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1 楊杏林;血清CCL17水平及CCL17基因單核苷酸多態(tài)性與冠心病的相關性研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學院;2017年

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1 李燕麗;豬CCL17基因的克隆與原核和真核表達[D];西北農(nóng)林科技大學;2010年

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本文編號：1276799