本文關(guān)鍵詞：化合物GA對肺腺癌的實驗性治療作用及相關(guān)機制研究

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【摘要】：目的:肺癌是發(fā)病率、死亡率上升最快的惡性腫瘤之一,目前多種治療效果不理想。化合物GA是從一系列赤霉素衍生物中篩選得到、具有抗腫瘤活性的新四環(huán)二萜類化合物,前期研究發(fā)現(xiàn)對肺癌細胞有生長抑制作用,本課題將在前期研究的基礎(chǔ)上,重點針對人非小細胞肺腺癌,以人非小細胞肺腺癌細胞株A549、SPCA1和宣威肺癌細胞株XWLC-05為體外實驗?zāi)Ｐ�、以A549和XWLC-05裸小鼠異種移植瘤為體內(nèi)實驗?zāi)Ｐ?重點評價化合物GA的體內(nèi)外抗腫瘤作用和體內(nèi)荷瘤動物重要器官毒性評估,探討GA潛在的臨床應(yīng)用價值及可能的應(yīng)用模式,為推動其臨床轉(zhuǎn)化奠定基礎(chǔ)。方法:第一部分:1.以人非小細胞肺腺癌細胞株A549、SPCA1和宣威肺癌細胞株XWLC-05為體外實驗?zāi)Ｐ?應(yīng)用MTT法檢測化合物GA對肺癌細胞增殖的抑制作用;2.以小鼠移植性肉瘤S180、人非小細胞肺腺癌A549和XWLC-05裸小鼠異種移植瘤為體內(nèi)實驗?zāi)Ｐ?以抑瘤率、腫瘤相對生長率(T/C)為指標,評估化合物GA灌胃給藥體內(nèi)對腫瘤生長的抑制作用,并同步評估GA對荷瘤小鼠體重、重要免疫器管-胸腺、脾臟的影響。第二部分:裸小鼠體內(nèi)抑瘤實驗結(jié)束后,留取骨髓、腸道及腎臟組織檢測化合物GA的毒性。骨髓涂片采用瑞氏-姬姆薩染色法觀察荷瘤裸小鼠骨髓增殖情況;腸道、腎臟組織制成病理切片,采用HE染色、鏡下觀察形態(tài)學(xué)變化,研究化合物GA的相關(guān)毒性。第三部分:1.以人非小細胞肺腺癌細胞株A549、SPCA1和XWLC-05為實驗?zāi)Ｐ?采用TUNEL染色、流式細胞術(shù)(FCM)檢測肺癌細胞經(jīng)過GA作用后的凋亡情況及形態(tài)學(xué)變化。Western Blot技術(shù)檢測化合物GA作用肺癌細胞后,凋亡線粒體途徑相關(guān)標志性蛋白表達的變化、細胞色素C釋放及線粒體膜電位的變化。同樣通過Western Blot技術(shù)檢測死亡受體途徑、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)途徑誘導(dǎo)凋亡的標志性蛋白變化。2.體內(nèi)A549裸小鼠移植瘤實驗結(jié)束后,通過電鏡觀察化合物GA作用后,A549移植瘤組織細胞形態(tài)、細胞質(zhì)及細胞核的變化。應(yīng)用免疫組織化學(xué)法,觀察腫瘤組織Caspase3、Caspase8、Caspase9表達的變化,并采用TUNEL法檢測腫瘤組織細胞凋亡發(fā)生。第四部分:1.以人非小細胞肺腺癌細胞株A549、SPCA1和宣威肺癌細胞株XWLC-05為體外實驗?zāi)Ｐ?MTT法初步評估化合物GA聯(lián)合低濃度DDP對肺癌細胞是否具有增效/等效作用。以小鼠移植性肉瘤S180及人非小細胞肺腺癌A549和XWLC-05裸小鼠移植瘤為體內(nèi)實驗?zāi)Ｐ?以抑瘤率、腫瘤相對生長率(T/C)及聯(lián)合指數(shù)為指標,評估化合物GA與低劑量DDP聯(lián)用的體內(nèi)抑瘤作用,同時通過骨髓、腸道、腎臟的相關(guān)病理學(xué)檢測,初步評估對DDP毒性的影響。結(jié)果:1.化合物GA的體內(nèi)外抑瘤作用及毒性評估1.1化合物GA抑制A549、SPCA1和XWLC-05細胞增殖,其中對A549和SPC-A-1的抑制作用較強,對XWLC-05細胞的抑制作用較弱。高濃度GA的作用強度與陽性對照DDP相近。1.2化合物GA對小鼠移植性肉瘤S180的生長有抑制作用,中、高劑量抑瘤作用較為明顯。GA對人肺腺癌A549和XWLC-05裸小鼠移植瘤的生長有抑制作用,以中、高劑量作用明顯。1.3化合物GA對荷S180小鼠重要免疫器官-胸腺/脾臟、荷人肺癌裸小鼠脾臟、荷瘤動物體重未觀察到明顯影響,對荷瘤裸小鼠骨髓、腸道、腎臟組織無明顯損傷。而DDP導(dǎo)致小鼠和裸小鼠明顯的體重下降、免疫器官重量減輕,腎臟組織損傷明顯。2.化合物GA與化療藥順鉑(DDP)聯(lián)用的體內(nèi)外抑瘤作用及毒性評估2.1化合物GA聯(lián)合低濃度DDP對多種肺腺癌細胞增殖有明顯抑制作用,DDP較低濃度與GA聯(lián)用,可達到較高濃度DDP單用的抑制強度,二者在一定濃度范圍內(nèi)呈現(xiàn)協(xié)同作用。2.2體內(nèi)實驗結(jié)果顯示,化合物GA聯(lián)合低劑量DDP對小鼠S180、A549及XWLC-05裸鼠移植瘤的生長有抑制作用,兩藥聯(lián)合在體內(nèi)表現(xiàn)為相加或協(xié)同作用。2.3化合物GA聯(lián)合低劑量DDP對荷瘤小鼠及裸小鼠的脾臟指數(shù)、胸腺指數(shù)、體重?zé)o額外影響,對骨髓、腸道、腎臟也未增加毒性。3.化合物GA體內(nèi)外誘導(dǎo)腫瘤細胞凋亡及相關(guān)機制3.1化合物GA體外誘導(dǎo)多種肺腺癌細胞凋亡,同時檢測到細胞中caspase9被剪切激活、線粒體胞色素C釋放、Bax/Bc12出現(xiàn)變化;caspase4被剪切激活,GRP78、GADD153和ATF4的mRNA及蛋白水平顯著升高;caspase8未被剪切激活。3.2體內(nèi)實驗結(jié)果提示,化合物GA促進腫瘤組織細胞凋亡、其Caspase3、8、9均呈明顯的陽性表達。結(jié)論:1.化合物GA體內(nèi)外實驗均證實可抑制多個肺腺癌的增殖;2.化合物GA體內(nèi)對骨髓、腸道、腎臟組織均無明顯影響,呈現(xiàn)低毒的特點。3.化合物GA促進肺腺癌細胞凋亡,其機制涉及線粒體和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)途徑,可能未涉及死亡受體途徑。GA體內(nèi)誘導(dǎo)肺癌組織細胞凋亡。4.化合物GA與低劑量DDP聯(lián)合應(yīng)用,可提高抗腫瘤效果,未增加毒性,有可能以聯(lián)合肺腺癌一線化療藥的方式在臨床發(fā)揮增效減毒作用,為DDP毒性明顯的患者提供更多選擇。
【學(xué)位授予單位】：昆明醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R734.2

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本文編號：1274345