本文關鍵詞：益氣活血解毒方干預急性心肌梗死大鼠心室重構的研究

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【摘要】：近年來心肌梗死后心衰的發(fā)病率和死亡率持續(xù)升高,嚴重危害著人類的健康。心肌梗死后心室重塑是導致心功能惡化的重要原因,該病理過程主要表現(xiàn)為梗死區(qū)心肌細胞壞死、非梗死區(qū)心肌細胞凋亡、肥大及心肌間質纖維化。嚴重損害了心臟的收縮和舒張功能,導致心力衰竭的發(fā)生。如何改善急性心肌梗死后心室重構、預防心力衰竭發(fā)生,是心肌梗死二級預防面臨的重大問題。心肌梗死后心室重構屬于中醫(yī)"胸痹、心痛、真心痛"等范疇。傳統(tǒng)中醫(yī)觀點認為,本病病機為本虛標實,本虛指氣血陰陽虧虛,標實為氣滯、血瘀、痰阻。臨床多采用溫陽益氣、活血化瘀、益氣活血、活血化痰等方法。但結合臨床觀察發(fā)現(xiàn),很多胸痹、心痛患者除胸悶、胸痛等癥狀外,還兼口干口苦、大便干、舌苔黃膩,脈滑數(shù)等熱象,單純用活血化瘀效果不理想。隨著生活水平的提高、飲食習慣的改變(嗜食肥甘辛辣等物),生活壓力大等諸多原因,結合現(xiàn)代醫(yī)學研究的觀點,認為熱毒在該類疾病中的作用很大,臨床應引起重視�；谛募」Ｋ篮笮氖抑貥嫷闹嗅t(yī)病因病機,結合多年臨床經(jīng)驗,導師創(chuàng)制出益氣活血解毒方,功在益氣活血,清熱解毒。其主要組成為人參、丹參、赤芍、三七、黃連等。本論文圍繞"保護心功能抑制心室重構"和"防治細胞凋亡"這兩大目標,進行益氣活血解毒方對心肌梗死大鼠心室重構的保護作用及機制的研究,擬為益氣活血解毒方防治心肌梗死后心室重構的特色和優(yōu)勢提供實驗依據(jù)。目的:觀察益氣活血解毒方對心肌梗死大鼠心功能、心肌梗死面積及心室重構的影響,從細胞凋亡角度作為切入點,探討其對miRNA-21水平及靶蛋白PTEN的調控,以及對p38MAPK信號通路的影響。方法:128只健康雄性Wistar大鼠,體質量(230±10)g,隨機分為4組:假手術組、模型組、益氣活血解毒方組和卡托普利組。采用結扎大鼠左冠狀動脈前降支的方法建立心肌梗死模型,術后24小時,假手術組和模型組給予0.5%羧甲基纖維素鈉,益氣活血解毒方組給予益氣活血解毒方(1.19g/kg/d),卡托普利組給予卡托普利(30mg/kg/d)。術后三周,超聲心動圖檢測左室結構及功能變化,H-E染色觀察心肌病理組織改變,Masson染色測心梗面積及膠原容積分數(shù),生化分析儀測血清BNP和CRP含量,TUNEL染色檢測梗死周邊區(qū)域心肌細胞凋亡指數(shù),Western blot檢測非梗死區(qū)心肌組織 Bc1-2、Bax、caspase-3、p38MAPK、p-p38MAPK 和 PTEN 的蛋白表達,qRT-PCR檢測大鼠非梗死區(qū)大鼠心肌組織TGF-β 1、MMP-2、MMP-9和miRNA-21表達。結果:(1)心率:術后三周,各組間大鼠HR比較無顯著性差異(P0.05)。(2)心臟EF值和FS值:①EF值:與假手術組比較,模型組EF值明顯降低,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.01);其余各組與假手術組無明顯差異。與模型組比較,益氣活血解毒方組能顯著提高EF值,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.01)益氣活血解毒方組和卡托普利組比較,二者無顯著差異(P0.05)。②FS值:與假手術組比較,模型組FS值明顯降低,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.01);與模型組比較,益氣活血解毒方組能顯著提高FS值,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.01);益氣活血解毒方組和卡托普利組比較,二者無顯著差異(P0.05)。(3)LVIDd和LVIDs:①LVIDd:與假手術組比較,模型組LVIDd明顯增大,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05);與模型組比較,益氣活血解毒方組LVIDd顯著降低,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05);益氣活血解毒方組和卡托普利組比較,二者無顯著差異(P0.05)。②LVIDs:與假手術組比較,模型組LVIDs明顯增大,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05);其余各組與假手術組無明顯差異。與模型組比較,益氣活血解毒方組LVIDs顯著降低,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05);益氣活血解毒方組和卡托普利組比較,二者無顯著差異(P0.05)。(4)H-E染色:假手術組心肌組織形態(tài)學無明顯改變,心肌細胞排列整齊,肌纖維完整,肌節(jié)長度大體一致,肌絲比較清晰,肌漿內無空泡變性,細胞核染清晰,無中性粒細胞浸潤;與假手術組心肌組織比較,模型組心肌組織分布大量炎性細胞,未見完整的心肌細胞形態(tài),心肌橫紋嚴重破壞,肌纖維斷裂、溶解、壞死,心肌細胞間質充血水腫,間隙增大,局部有炎細胞浸潤;與模型組相比,益氣活血解毒組和卡托普利組組織形態(tài)學改變程度有所好轉,中性粒細胞浸潤明顯減少,心肌細胞形態(tài)尚完整,肌纖維排列有序,心肌組織充血、腫脹減輕。(5)心肌梗死面積:與模型組相比,益氣活血解毒方組和卡托普利組能顯著減小心肌梗死面積,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05)。益氣活血解毒方組和卡托普利組之間無顯著差異(P0.05)。(6)Masson染色:光鏡下顯示,正常心肌細胞呈紅色,膠原纖維為藍色。假手術組無膠原增生,心肌細胞排列整齊;與假手術組相比,模型組大鼠梗死邊緣區(qū)心肌細胞排列紊亂,間質內藍色膠原纖維增多,分割心肌束,部分膠原纖維融合,心肌纖維化程度增加。與模型組相比,益氣活血解毒方組和卡托普利組藍色膠原纖維減少,心肌纖維化程度減輕。(7)血清BNP和CRP含量:①BNP:與假手術組比較,模型組血清BNP含量顯著升高,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.01);與模型組比較,益氣活血解毒方組和卡托普利組血清BNP含量顯著降低,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05),益氣活血解毒方組和卡托普利組之間無顯著差異(PO.05)。②CRP:與假手術組比較,模型組、益氣活血解毒方組及卡托普利組血清CRP含量顯著升高,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.01);與模型組比較,益氣活血解毒方組和卡托普利組血清CRP含量顯著降低,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05),益氣活血解毒方組和卡托普利組之間無顯著差異(P0.05)。(8)膠原容積分數(shù):與假手術組相比,模型組、益氣活血解毒方組和卡托普利組膠原容積分數(shù)顯著升高,差異具有顯著統(tǒng)計學意義(P0.01);與模型組相比,益氣活血解毒方組和卡托普利組膠原容積分數(shù)顯著降低,差異具有顯著統(tǒng)計學意義(P0.01);提示益氣活血解毒方和卡托普利有減少膠原沉積的作用;益氣活血解毒方組和卡托普利組之間膠原容積分數(shù)無顯著差異(P0.05)。(9)對TGF-P1、MMP-2及MMP-9表達的影響:①在TGF-β1表達方面:與假手術組比較,模型組心肌TGF-β1表達水平顯著升高,差異具有顯著統(tǒng)計學意義(P0.01);與模型組相比,益氣活血解毒方組和卡托普利組TGF-β1顯著降低,差異具有顯著統(tǒng)計學意義(P0.01);益氣活血解毒方組和卡托普利組之間TGF-β1無顯著差異(P0.05)。②在MMP-2表達方面:與假手術組比較,模型組心肌MMP-2表達水平顯著升高,差異具有顯著統(tǒng)計學意義(P0.01);與模型組相比,益氣活血解毒方組和卡托普利組MMP-2顯著降低,差異具有顯著統(tǒng)計學意義(P0.01);益氣活血解毒方組和卡托普利組之間MMP-2無顯著差異(P0.05)。③在MMP-9表達方面:與假手術組比較,模型組及卡托普利組心肌MMP-9表達水平顯著升高,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05);與模型組相比,益氣活血解毒方組和卡托普利組MMP-9顯著降低,差異具有顯著統(tǒng)計學意義(P0.01);益氣活血解毒方組和卡托普利組之間MMP-9無顯著差異(PO.05)。(10)細胞凋亡指數(shù):與假手術組比較,模型組、益氣活血解毒方組和卡托普利組大鼠心肌梗死周邊區(qū)域心肌細胞凋亡陽性率顯著升高,差異具有顯著統(tǒng)計學意義(P0.01)。與模型組比較,益氣活血解毒方組和卡托普利組心肌梗死周邊區(qū)域心肌細胞凋亡陽性率顯著下降,差異具有顯著統(tǒng)計學意義(P0.01)。益氣活血解毒組和卡托普利組之間無顯著差異(P0.05)。(11)對Bax、caspase-3及Bcl-2表達表達的影響:①在Bax表達方面:與假手術組比較,模型組、益氣活血解毒方組和卡托普利組大鼠心肌梗死周邊區(qū)域心肌組織中促細胞凋亡蛋白Bax表達升高,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05);與模型組比較,益氣活血解毒方組大鼠心肌梗死周邊區(qū)域心肌組織中促凋亡蛋白Bax表達降低,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05);而卡托普利組大鼠心肌組織中促凋亡蛋白Bax表達降低,差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。益氣活血解毒方組和卡托普利組之間無顯著差異(P0.05)。②在caspase-3表達方面:與假手術組比較,模型組、益氣活血解毒方組大鼠心肌梗死周邊區(qū)域心肌組織中促細胞凋亡蛋白caspase-3表達升高,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05);與模型組比較,益氣活血解毒方組和卡托普利組大鼠心肌梗死周邊區(qū)域心肌組織中促凋亡蛋白caspase-3表達降低,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05);益氣活血解毒方組和卡托普利組之間無顯著差異(P0.05)。③在Bcl-2表達方面:與假手術組比較,模型組和益氣活血解毒方組大鼠心肌梗死周邊區(qū)域心肌組織中抗細胞凋亡蛋白Bcl-2的表達降低,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05);與模型組比較,益氣活血解毒方組和卡托普利組大鼠心肌梗死周邊區(qū)域心肌組織中抗細胞凋亡蛋白Bcl-2的表達升高,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05)。益氣活血解毒方組和卡托普利組之間抗細胞凋亡蛋白Bcl-2的表達無顯著差異(P0.05)。(12)對p38MAPK及p-p38MAPK表達的影響:①在p38MAPK方面:各組之間大鼠梗死周邊區(qū)域心肌組織p38MAPK的表達無顯著性差異(P0.05);②在p-p38MAPK方面:各組心肌梗死周邊區(qū)域心肌組織內p-p38MAPK的表達具有明顯差異(P0.05)。與假手術組比較,模型組、益氣活血解毒方組和卡托普利組大鼠心肌梗死周邊區(qū)域p-p38MAPK的表達顯著升高(P0.05)。與模型組比較,益氣活血解毒方組和卡托普利組大鼠心肌梗死周邊區(qū)域心肌組織p-p38MAPK的表達分別降低,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05)。益氣活血解毒方組和卡托普利組心肌組織p-p38MAPK蛋白的表達水平無顯著差異(P0.05)。(13)對PTEN表達的影響:手術后三周,各組大鼠心肌梗死周邊區(qū)域心肌組織內PTEN蛋白的表達具有明顯差異(P0.05)。與假手術組比較,模型組大鼠心肌梗死周邊區(qū)域PTEN蛋白的表達顯著升高,差異具有顯著統(tǒng)計學意義(P0.01)。與模型組比較,益氣活血解毒方組和卡托普利組大鼠心肌梗死周邊區(qū)域PTEN蛋白的表達降低,差異具有顯著統(tǒng)計學意義(P0.01)。益氣活血解毒方組和卡托普利組心肌梗死周邊區(qū)域心肌組織PTEN蛋白的表達水平無顯著差異(P0.05)。(14)對miRNA-21表達的影響:術后三周,各治療組非梗死區(qū)心肌組織內miRNA-21的表達具有明顯差異(P0.05)。與假手術組比,模型組大鼠心肌梗死周邊區(qū)域心肌組織miRNA-21的表達有所升高,差異無統(tǒng)計學意義。與模型組比較,益氣活血解毒方組和卡托普利組心肌梗死周邊區(qū)域心肌組織miRNA-21的表達顯著升高,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05)。益氣活血解毒方組和卡托普利組心肌梗死周邊區(qū)域心肌組織miRNA-21表達水平無顯著差異(P0.05)。結論:(1)基于益氣活血解毒理論與病證結合指導組方的益氣活血解毒方可起到益氣活血,清熱解毒的作用,適用于冠心病瘀熱毒互結證。(2)益氣活血解毒方和卡托普利均能降低心肌梗死大鼠心肌梗死面積,減少膠原容積分數(shù),抑制TGF-β,、MMP-2及MMP-9表達,防治心肌纖維化,提高心肌梗死大鼠EF及FS值降低,抑制LVIDd、LVIDs的增大,改善心肌梗死大鼠心功能,延緩心室重構,其綜合效應明顯優(yōu)于卡托普利。(3)益氣活血解毒方能有效抑制心肌梗死周邊區(qū)域促細胞凋亡蛋白Bax及caspase-3表達,增加抗凋亡蛋白Bcl-2表達,從而減輕心肌細胞凋亡;(4)益氣活血解毒方防治心肌梗死后細胞凋亡的作用機制可能與上調miRNA-21水平及下調靶蛋白PTEN的表達,進而抑制p38MAPK信號通路有關;
【學位授予單位】：北京中醫(yī)藥大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R285.5

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本文編號：1273823