本文關(guān)鍵詞：益氣活血解毒方干預(yù)急性心肌梗死大鼠心室重構(gòu)的研究

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【摘要】：近年來(lái)心肌梗死后心衰的發(fā)病率和死亡率持續(xù)升高,嚴(yán)重危害著人類(lèi)的健康。心肌梗死后心室重塑是導(dǎo)致心功能惡化的重要原因,該病理過(guò)程主要表現(xiàn)為梗死區(qū)心肌細(xì)胞壞死、非梗死區(qū)心肌細(xì)胞凋亡、肥大及心肌間質(zhì)纖維化。嚴(yán)重?fù)p害了心臟的收縮和舒張功能,導(dǎo)致心力衰竭的發(fā)生。如何改善急性心肌梗死后心室重構(gòu)、預(yù)防心力衰竭發(fā)生,是心肌梗死二級(jí)預(yù)防面臨的重大問(wèn)題。心肌梗死后心室重構(gòu)屬于中醫(yī)"胸痹、心痛、真心痛"等范疇。傳統(tǒng)中醫(yī)觀點(diǎn)認(rèn)為,本病病機(jī)為本虛標(biāo)實(shí),本虛指氣血陰陽(yáng)虧虛,標(biāo)實(shí)為氣滯、血瘀、痰阻。臨床多采用溫陽(yáng)益氣、活血化瘀、益氣活血、活血化痰等方法。但結(jié)合臨床觀察發(fā)現(xiàn),很多胸痹、心痛患者除胸悶、胸痛等癥狀外,還兼口干口苦、大便干、舌苔黃膩,脈滑數(shù)等熱象,單純用活血化瘀效果不理想。隨著生活水平的提高、飲食習(xí)慣的改變(嗜食肥甘辛辣等物),生活壓力大等諸多原因,結(jié)合現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究的觀點(diǎn),認(rèn)為熱毒在該類(lèi)疾病中的作用很大,臨床應(yīng)引起重視。基于心肌梗死后心室重構(gòu)的中醫(yī)病因病機(jī),結(jié)合多年臨床經(jīng)驗(yàn),導(dǎo)師創(chuàng)制出益氣活血解毒方,功在益氣活血,清熱解毒。其主要組成為人參、丹參、赤芍、三七、黃連等。本論文圍繞"保護(hù)心功能抑制心室重構(gòu)"和"防治細(xì)胞凋亡"這兩大目標(biāo),進(jìn)行益氣活血解毒方對(duì)心肌梗死大鼠心室重構(gòu)的保護(hù)作用及機(jī)制的研究,擬為益氣活血解毒方防治心肌梗死后心室重構(gòu)的特色和優(yōu)勢(shì)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。目的:觀察益氣活血解毒方對(duì)心肌梗死大鼠心功能、心肌梗死面積及心室重構(gòu)的影響,從細(xì)胞凋亡角度作為切入點(diǎn),探討其對(duì)miRNA-21水平及靶蛋白PTEN的調(diào)控,以及對(duì)p38MAPK信號(hào)通路的影響。方法:128只健康雄性Wistar大鼠,體質(zhì)量(230±10)g,隨機(jī)分為4組:假手術(shù)組、模型組、益氣活血解毒方組和卡托普利組。采用結(jié)扎大鼠左冠狀動(dòng)脈前降支的方法建立心肌梗死模型,術(shù)后24小時(shí),假手術(shù)組和模型組給予0.5%羧甲基纖維素鈉,益氣活血解毒方組給予益氣活血解毒方(1.19g/kg/d),卡托普利組給予卡托普利(30mg/kg/d)。術(shù)后三周,超聲心動(dòng)圖檢測(cè)左室結(jié)構(gòu)及功能變化,H-E染色觀察心肌病理組織改變,Masson染色測(cè)心梗面積及膠原容積分?jǐn)?shù),生化分析儀測(cè)血清BNP和CRP含量,TUNEL染色檢測(cè)梗死周邊區(qū)域心肌細(xì)胞凋亡指數(shù),Western blot檢測(cè)非梗死區(qū)心肌組織 Bc1-2、Bax、caspase-3、p38MAPK、p-p38MAPK 和 PTEN 的蛋白表達(dá),qRT-PCR檢測(cè)大鼠非梗死區(qū)大鼠心肌組織TGF-β 1、MMP-2、MMP-9和miRNA-21表達(dá)。結(jié)果:(1)心率:術(shù)后三周,各組間大鼠HR比較無(wú)顯著性差異(P0.05)。(2)心臟EF值和FS值:①EF值:與假手術(shù)組比較,模型組EF值明顯降低,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01);其余各組與假手術(shù)組無(wú)明顯差異。與模型組比較,益氣活血解毒方組能顯著提高EF值,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)益氣活血解毒方組和卡托普利組比較,二者無(wú)顯著差異(P0.05)。②FS值:與假手術(shù)組比較,模型組FS值明顯降低,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01);與模型組比較,益氣活血解毒方組能顯著提高FS值,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01);益氣活血解毒方組和卡托普利組比較,二者無(wú)顯著差異(P0.05)。(3)LVIDd和LVIDs:①LVIDd:與假手術(shù)組比較,模型組LVIDd明顯增大,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);與模型組比較,益氣活血解毒方組LVIDd顯著降低,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);益氣活血解毒方組和卡托普利組比較,二者無(wú)顯著差異(P0.05)。②LVIDs:與假手術(shù)組比較,模型組LVIDs明顯增大,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);其余各組與假手術(shù)組無(wú)明顯差異。與模型組比較,益氣活血解毒方組LVIDs顯著降低,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);益氣活血解毒方組和卡托普利組比較,二者無(wú)顯著差異(P0.05)。(4)H-E染色:假手術(shù)組心肌組織形態(tài)學(xué)無(wú)明顯改變,心肌細(xì)胞排列整齊,肌纖維完整,肌節(jié)長(zhǎng)度大體一致,肌絲比較清晰,肌漿內(nèi)無(wú)空泡變性,細(xì)胞核染清晰,無(wú)中性粒細(xì)胞浸潤(rùn);與假手術(shù)組心肌組織比較,模型組心肌組織分布大量炎性細(xì)胞,未見(jiàn)完整的心肌細(xì)胞形態(tài),心肌橫紋嚴(yán)重破壞,肌纖維斷裂、溶解、壞死,心肌細(xì)胞間質(zhì)充血水腫,間隙增大,局部有炎細(xì)胞浸潤(rùn);與模型組相比,益氣活血解毒組和卡托普利組組織形態(tài)學(xué)改變程度有所好轉(zhuǎn),中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)明顯減少,心肌細(xì)胞形態(tài)尚完整,肌纖維排列有序,心肌組織充血、腫脹減輕。(5)心肌梗死面積:與模型組相比,益氣活血解毒方組和卡托普利組能顯著減小心肌梗死面積,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。益氣活血解毒方組和卡托普利組之間無(wú)顯著差異(P0.05)。(6)Masson染色:光鏡下顯示,正常心肌細(xì)胞呈紅色,膠原纖維為藍(lán)色。假手術(shù)組無(wú)膠原增生,心肌細(xì)胞排列整齊;與假手術(shù)組相比,模型組大鼠梗死邊緣區(qū)心肌細(xì)胞排列紊亂,間質(zhì)內(nèi)藍(lán)色膠原纖維增多,分割心肌束,部分膠原纖維融合,心肌纖維化程度增加。與模型組相比,益氣活血解毒方組和卡托普利組藍(lán)色膠原纖維減少,心肌纖維化程度減輕。(7)血清BNP和CRP含量:①BNP:與假手術(shù)組比較,模型組血清BNP含量顯著升高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01);與模型組比較,益氣活血解毒方組和卡托普利組血清BNP含量顯著降低,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),益氣活血解毒方組和卡托普利組之間無(wú)顯著差異(PO.05)。②CRP:與假手術(shù)組比較,模型組、益氣活血解毒方組及卡托普利組血清CRP含量顯著升高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01);與模型組比較,益氣活血解毒方組和卡托普利組血清CRP含量顯著降低,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),益氣活血解毒方組和卡托普利組之間無(wú)顯著差異(P0.05)。(8)膠原容積分?jǐn)?shù):與假手術(shù)組相比,模型組、益氣活血解毒方組和卡托普利組膠原容積分?jǐn)?shù)顯著升高,差異具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01);與模型組相比,益氣活血解毒方組和卡托普利組膠原容積分?jǐn)?shù)顯著降低,差異具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01);提示益氣活血解毒方和卡托普利有減少膠原沉積的作用;益氣活血解毒方組和卡托普利組之間膠原容積分?jǐn)?shù)無(wú)顯著差異(P0.05)。(9)對(duì)TGF-P1、MMP-2及MMP-9表達(dá)的影響:①在TGF-β1表達(dá)方面:與假手術(shù)組比較,模型組心肌TGF-β1表達(dá)水平顯著升高,差異具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01);與模型組相比,益氣活血解毒方組和卡托普利組TGF-β1顯著降低,差異具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01);益氣活血解毒方組和卡托普利組之間TGF-β1無(wú)顯著差異(P0.05)。②在MMP-2表達(dá)方面:與假手術(shù)組比較,模型組心肌MMP-2表達(dá)水平顯著升高,差異具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01);與模型組相比,益氣活血解毒方組和卡托普利組MMP-2顯著降低,差異具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01);益氣活血解毒方組和卡托普利組之間MMP-2無(wú)顯著差異(P0.05)。③在MMP-9表達(dá)方面:與假手術(shù)組比較,模型組及卡托普利組心肌MMP-9表達(dá)水平顯著升高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);與模型組相比,益氣活血解毒方組和卡托普利組MMP-9顯著降低,差異具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01);益氣活血解毒方組和卡托普利組之間MMP-9無(wú)顯著差異(PO.05)。(10)細(xì)胞凋亡指數(shù):與假手術(shù)組比較,模型組、益氣活血解毒方組和卡托普利組大鼠心肌梗死周邊區(qū)域心肌細(xì)胞凋亡陽(yáng)性率顯著升高,差異具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。與模型組比較,益氣活血解毒方組和卡托普利組心肌梗死周邊區(qū)域心肌細(xì)胞凋亡陽(yáng)性率顯著下降,差異具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。益氣活血解毒組和卡托普利組之間無(wú)顯著差異(P0.05)。(11)對(duì)Bax、caspase-3及Bcl-2表達(dá)表達(dá)的影響:①在Bax表達(dá)方面:與假手術(shù)組比較,模型組、益氣活血解毒方組和卡托普利組大鼠心肌梗死周邊區(qū)域心肌組織中促細(xì)胞凋亡蛋白Bax表達(dá)升高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);與模型組比較,益氣活血解毒方組大鼠心肌梗死周邊區(qū)域心肌組織中促凋亡蛋白Bax表達(dá)降低,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);而卡托普利組大鼠心肌組織中促凋亡蛋白Bax表達(dá)降低,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。益氣活血解毒方組和卡托普利組之間無(wú)顯著差異(P0.05)。②在caspase-3表達(dá)方面:與假手術(shù)組比較,模型組、益氣活血解毒方組大鼠心肌梗死周邊區(qū)域心肌組織中促細(xì)胞凋亡蛋白caspase-3表達(dá)升高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);與模型組比較,益氣活血解毒方組和卡托普利組大鼠心肌梗死周邊區(qū)域心肌組織中促凋亡蛋白caspase-3表達(dá)降低,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);益氣活血解毒方組和卡托普利組之間無(wú)顯著差異(P0.05)。③在Bcl-2表達(dá)方面:與假手術(shù)組比較,模型組和益氣活血解毒方組大鼠心肌梗死周邊區(qū)域心肌組織中抗細(xì)胞凋亡蛋白Bcl-2的表達(dá)降低,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);與模型組比較,益氣活血解毒方組和卡托普利組大鼠心肌梗死周邊區(qū)域心肌組織中抗細(xì)胞凋亡蛋白Bcl-2的表達(dá)升高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。益氣活血解毒方組和卡托普利組之間抗細(xì)胞凋亡蛋白Bcl-2的表達(dá)無(wú)顯著差異(P0.05)。(12)對(duì)p38MAPK及p-p38MAPK表達(dá)的影響:①在p38MAPK方面:各組之間大鼠梗死周邊區(qū)域心肌組織p38MAPK的表達(dá)無(wú)顯著性差異(P0.05);②在p-p38MAPK方面:各組心肌梗死周邊區(qū)域心肌組織內(nèi)p-p38MAPK的表達(dá)具有明顯差異(P0.05)。與假手術(shù)組比較,模型組、益氣活血解毒方組和卡托普利組大鼠心肌梗死周邊區(qū)域p-p38MAPK的表達(dá)顯著升高(P0.05)。與模型組比較,益氣活血解毒方組和卡托普利組大鼠心肌梗死周邊區(qū)域心肌組織p-p38MAPK的表達(dá)分別降低,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。益氣活血解毒方組和卡托普利組心肌組織p-p38MAPK蛋白的表達(dá)水平無(wú)顯著差異(P0.05)。(13)對(duì)PTEN表達(dá)的影響:手術(shù)后三周,各組大鼠心肌梗死周邊區(qū)域心肌組織內(nèi)PTEN蛋白的表達(dá)具有明顯差異(P0.05)。與假手術(shù)組比較,模型組大鼠心肌梗死周邊區(qū)域PTEN蛋白的表達(dá)顯著升高,差異具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。與模型組比較,益氣活血解毒方組和卡托普利組大鼠心肌梗死周邊區(qū)域PTEN蛋白的表達(dá)降低,差異具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。益氣活血解毒方組和卡托普利組心肌梗死周邊區(qū)域心肌組織PTEN蛋白的表達(dá)水平無(wú)顯著差異(P0.05)。(14)對(duì)miRNA-21表達(dá)的影響:術(shù)后三周,各治療組非梗死區(qū)心肌組織內(nèi)miRNA-21的表達(dá)具有明顯差異(P0.05)。與假手術(shù)組比,模型組大鼠心肌梗死周邊區(qū)域心肌組織miRNA-21的表達(dá)有所升高,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。與模型組比較,益氣活血解毒方組和卡托普利組心肌梗死周邊區(qū)域心肌組織miRNA-21的表達(dá)顯著升高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。益氣活血解毒方組和卡托普利組心肌梗死周邊區(qū)域心肌組織miRNA-21表達(dá)水平無(wú)顯著差異(P0.05)。結(jié)論:(1)基于益氣活血解毒理論與病證結(jié)合指導(dǎo)組方的益氣活血解毒方可起到益氣活血,清熱解毒的作用,適用于冠心病瘀熱毒互結(jié)證。(2)益氣活血解毒方和卡托普利均能降低心肌梗死大鼠心肌梗死面積,減少膠原容積分?jǐn)?shù),抑制TGF-β,、MMP-2及MMP-9表達(dá),防治心肌纖維化,提高心肌梗死大鼠EF及FS值降低,抑制LVIDd、LVIDs的增大,改善心肌梗死大鼠心功能,延緩心室重構(gòu),其綜合效應(yīng)明顯優(yōu)于卡托普利。(3)益氣活血解毒方能有效抑制心肌梗死周邊區(qū)域促細(xì)胞凋亡蛋白Bax及caspase-3表達(dá),增加抗凋亡蛋白Bcl-2表達(dá),從而減輕心肌細(xì)胞凋亡;(4)益氣活血解毒方防治心肌梗死后細(xì)胞凋亡的作用機(jī)制可能與上調(diào)miRNA-21水平及下調(diào)靶蛋白PTEN的表達(dá),進(jìn)而抑制p38MAPK信號(hào)通路有關(guān);
【學(xué)位授予單位】：北京中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類(lèi)號(hào)】：R285.5

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