本文關(guān)鍵詞：綠原酸在非酒精性脂肪性肝病中的作用及其分子機(jī)制研究

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【摘要】：第一部分綠原酸減輕脂肪酸誘導(dǎo)的HepG2細(xì)胞脂質(zhì)沉積實(shí)驗(yàn)?zāi)康?既往研究表明,綠原酸可調(diào)節(jié)機(jī)體糖脂代謝,提高胰島素敏感性。非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)被認(rèn)為是代謝綜合征在肝臟的表現(xiàn),綠原酸對(duì)其作用尚不明確。本研究旨在利用體外實(shí)驗(yàn)來(lái)初步探討綠原酸對(duì)NAFLD的作用及其分子機(jī)制。材料和方法:體外實(shí)驗(yàn)選取人肝癌細(xì)胞株HepG2細(xì)胞,采用游離脂肪酸(FFA)刺激48h誘導(dǎo)NAFLD體外細(xì)胞模型,采用不同濃度的綠原酸刺激HepG2細(xì)胞來(lái)觀察綠原酸體外刺激對(duì)肝細(xì)胞脂質(zhì)沉積的影響。利用Western Blot及熒光定量PCR(qRT-PCR)等手段檢測(cè)相關(guān)通路蛋白表達(dá)及其mRNA水平。采用小干擾RNA(siRNA)技術(shù)或藥物抑制劑來(lái)對(duì)通路各靶點(diǎn)進(jìn)行基因敲減或藥物抑制。利用肝細(xì)胞甘油三酯含量測(cè)定和油紅0染色評(píng)價(jià)肝細(xì)胞脂質(zhì)沉積的情況。結(jié)果:本研究通過體外實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn):給予50μM綠原酸刺激HepG2細(xì)胞24小時(shí),可減輕FFA誘導(dǎo)的肝細(xì)胞脂質(zhì)沉積。通過分別對(duì)SIRT1、AMPK和LKB1進(jìn)行藥物抑制或siRNA基因敲減預(yù)處理,可阻斷綠原酸對(duì)肝細(xì)胞脂質(zhì)沉積的保護(hù)作用。綠原酸減輕脂質(zhì)沉積的作用首先是通過上調(diào)SIRT1蛋白表達(dá),增加其去乙�；钚�;再通過磷酸化激活LKB1,由其介導(dǎo)并向下磷酸化激活A(yù)MPK;繼而上調(diào)脂質(zhì)氧化蛋白MLYCD和CPT1α的表達(dá)促進(jìn)脂肪酸β氧化,同時(shí)降低脂質(zhì)合成蛋白SREBP1c和FAS的表達(dá)抑制脂質(zhì)合成。結(jié)論:本實(shí)驗(yàn)證實(shí)綠原酸可能通過SIRT1-LKB1-AMPK通路減輕FFA誘導(dǎo)的HepG2細(xì)胞脂質(zhì)沉積。第二部分綠原酸減輕高脂飲食誘導(dǎo)的小鼠肝臟脂質(zhì)沉積實(shí)驗(yàn)?zāi)康?結(jié)合第一部分體外實(shí)驗(yàn)中初步確立的綠原酸保護(hù)肝細(xì)胞脂質(zhì)沉積作用及其機(jī)制,我們利用小鼠在體試驗(yàn)來(lái)驗(yàn)證綠原酸的作用及分子通路。材料和方法:體內(nèi)實(shí)驗(yàn)選取5-6周齡的C57BL/6小鼠,分別采用正常飲食、正常飲食添加綠原酸、高脂飲食、高脂飲食添加綠原酸喂養(yǎng)8周觀察綠原酸對(duì)高脂飲食誘導(dǎo)的小鼠肝臟脂質(zhì)沉積的影響。利用肝臟組織甘油三酯含量測(cè)定、HE或油紅O染色來(lái)評(píng)價(jià)肝臟脂質(zhì)沉積的情況。利用Western Blot及qRT-PCR等手段檢測(cè)相關(guān)通路蛋白表達(dá)及其mRNA水平。結(jié)果:在高脂飲食的同時(shí),飲水中添加綠原酸喂養(yǎng)8周可減輕由高脂飲食造成的肝臟脂質(zhì)沉積。結(jié)合第一部分結(jié)果,對(duì)SIRT1-LKB1-AMPK信號(hào)通路進(jìn)行驗(yàn)證:綠原酸可增加SIRT1蛋白表達(dá),上調(diào)LKB1、AMPK及ACC的磷酸化水平,在下游功能蛋白中,脂質(zhì)氧化蛋白MLYCD和CPT1α的mRNA水平和蛋白表達(dá)皆增加,而脂質(zhì)合成蛋白SREBP1c和FAS的mRNA水平和蛋白表達(dá)都呈下降趨勢(shì)。結(jié)論:綠原酸可能通過SIRT1-AMPK信號(hào)通路,減輕高脂飲食誘導(dǎo)的小鼠肝臟脂質(zhì)沉積。本研究支持綠原酸可能作為未來(lái)NAFLD臨床預(yù)防和治療的潛在靶點(diǎn)。
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R575.5

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本文編號(hào)：1272417