本文關(guān)鍵詞：圓錐繡球提取物總香豆素苷治療急慢性腎損傷的藥效和作用機(jī)制研究

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【摘要】：隨著老齡化的到來(lái),腎臟疾病的發(fā)病率在逐年上升,無(wú)論是感染或腎毒性藥物導(dǎo)致的急性腎損傷(acute kidney injury,AKI),還是慢性免疫性腎病,都嚴(yán)重威脅著我國(guó)人民的健康,然而當(dāng)前并沒(méi)有太多有效的藥物來(lái)治療此類疾病�；谖覈�(guó)民間用藥經(jīng)驗(yàn)和我們實(shí)驗(yàn)室前期的工作基礎(chǔ),初步發(fā)現(xiàn)廣泛分布于我國(guó)南方的植物圓錐繡球(Hydangea paniculata)莖提取物(簡(jiǎn)稱HP)有保護(hù)腎臟的藥理活性。因此,本實(shí)驗(yàn)中,通過(guò)LPS誘發(fā)的膿毒性免疫腎損傷、順鉑誘發(fā)的急性腎損傷和cationozed-BSA(c-BSA,陽(yáng)離子白蛋白)誘發(fā)的免疫性腎病模型,系統(tǒng)性的評(píng)價(jià)HP對(duì)腎臟保護(hù)作用的藥效。同時(shí)通過(guò)體內(nèi)和體外的方法,深入研究HP腎臟保護(hù)作用的分子機(jī)制。研究發(fā)現(xiàn)HP對(duì)三種腎病模型均展現(xiàn)出良好的治療效果,分述如下:1.HP顯著降低了 LPS誘發(fā)的AKI小鼠血中尿素氮(blood urine nitrogen,BUN)和中性粒細(xì)胞明膠酶相關(guān)載脂蛋白(neutrophil gelatinase-associated lipocalin,NGAL)的表達(dá),減輕腎臟病理?yè)p傷。研究發(fā)現(xiàn)HP可以顯著減輕LPS誘導(dǎo)的腎臟組織中氧化應(yīng)激和炎癥因子的表達(dá),減少炎性細(xì)胞對(duì)腎臟組織的侵潤(rùn),以及減輕腎小管細(xì)胞凋亡。Western blot表明HP對(duì)凋亡相關(guān)caspase家族中caspase 3和caspase 7的剪切激活也有顯著抑制作用。體外和體內(nèi)分子生物學(xué)研究表明HP可以顯著抑制LPS刺激下巨噬細(xì)胞Ana1中NFκB的表達(dá)和核轉(zhuǎn)位,抑制Ana1細(xì)胞中STAT3的磷酸化;HP對(duì)LPS刺激的人腎小管上皮細(xì)胞HK2中STAT1和ERK1/2的磷酸化有顯著抑制作用,提示這可能是HP發(fā)揮抗炎免疫所依賴的信號(hào)通路。2.HP顯著降低了腹腔注射順鉑導(dǎo)致的小鼠血中尿素氮和血肌酐(serum creatinine,SCr)的上升,降低了腎臟指數(shù),病理觀察表明HP減輕了小鼠腎臟組織中腎小管的凋亡和壞死,以及管型的形成。機(jī)制研究發(fā)現(xiàn),HP顯著降低了順鉑導(dǎo)致的腎臟組織氧化應(yīng)激,抑制了炎癥因子TNFα和IL-1β的表達(dá),對(duì)觸發(fā)凋亡的關(guān)鍵因子FasL也有顯著降低作用。HP顯著抑制了 caspase 3和caspase 7的剪接激活,增強(qiáng)了BCL2的表達(dá)。免疫熒光證明HP顯著降低了巨噬細(xì)胞和中性粒細(xì)胞對(duì)腎臟組織的侵潤(rùn);分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)表明其作用機(jī)制同HP抑制順鉑誘導(dǎo)的STAT3和ERK1/2的磷酸化相關(guān)。3.HP顯著改善了 c-BSA誘導(dǎo)的免疫性腎病大鼠的腎功能,在給藥的不同時(shí)間點(diǎn),均顯著降低了腎病大鼠的BUN和SCr,增加肌酐清除率,同時(shí)降低了免疫性腎病引起的血中甘油三酯(triglyceride,TG)和低密度脂蛋白膽固醇(low density lipid protein-cholesterol,LDL-C)的升高。病理檢測(cè)證實(shí)HP顯著改善了腎小球硬化、系膜增生、腎間質(zhì)炎性細(xì)胞侵潤(rùn)、空泡變性和蛋白管型等病理特征。在對(duì)HP進(jìn)行詳細(xì)的藥效學(xué)和機(jī)制研究外,還對(duì)HP進(jìn)行了初步的藥代動(dòng)力學(xué)研究。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)HP中主要成分茵芋苷(skimmin)口服生物利用度為14.2%,同時(shí)HP中的香豆素類化合物可以在體內(nèi)代謝成血藥濃度相對(duì)較高的7-羥基香豆素和6,7-二羥基香豆素,它們被報(bào)道也具有比較強(qiáng)的抗炎和抗氧化活性,為理解HP的體內(nèi)藥效提供了一定的物質(zhì)基礎(chǔ)。初步的單次給藥急性毒性試驗(yàn)證明HP具有一定的安全性。綜上,圓錐繡球作為一個(gè)新的藥用資源,對(duì)其進(jìn)行較為系統(tǒng)的腎保護(hù)作用研究,具有一定的創(chuàng)新性。HP作為一個(gè)中藥5類藥物,處于臨床前開(kāi)發(fā)階段,通過(guò)兩種急性腎病模型和一種免疫性腎病模型,充分證實(shí)了 HP有明顯的腎臟保護(hù)作用,尤其對(duì)于免疫介導(dǎo)的腎臟損傷效果突出。初步的作用機(jī)制證明同抗炎免疫相關(guān),尤其對(duì)單核巨噬細(xì)胞有明顯的抑制作用,其詳細(xì)的作用靶點(diǎn)和機(jī)制有待進(jìn)一步深入研究。
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R285.5
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本文編號(hào)：1267590