本文關(guān)鍵詞：海藻糖對角質(zhì)形成細(xì)胞的非MTOR依賴性自噬調(diào)控機(jī)制及其抗紫外線損傷效應(yīng)研究

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【摘要】：[目的]紫外線是皮膚常見的應(yīng)激源。目前紫外線照射如何對角質(zhì)形成細(xì)胞進(jìn)行自噬調(diào)節(jié)并不清楚。MTOR蛋白是哺乳動物細(xì)胞中的重要信號調(diào)節(jié)因子。MTOR信號在角質(zhì)形成細(xì)胞中的作用仍不清楚。研究表明海藻糖通過誘導(dǎo)哺乳動物細(xì)胞自噬發(fā)揮有益作用。然而,無論是海藻糖或其他糖類是否可以誘導(dǎo)角質(zhì)形成細(xì)胞自噬仍未知。自噬誘導(dǎo)劑海藻糖是否具有紫外線保護(hù)效應(yīng)仍未知。[方法]對原代角質(zhì)形成細(xì)胞給予不同劑量UVB照射,在不同的時間點分析自噬流和自噬體形成。UVB照射后,使用雷帕霉素孵育分析自噬抑制是否可以恢復(fù)。人角質(zhì)形成細(xì)胞系HaCaT細(xì)胞和原代角質(zhì)形成細(xì)胞給予MTOR抑制劑后,分析自噬調(diào)控和MTOR信號。分析MTOR抑制劑處理對UVB和UVA暴露后的DNA損傷信號、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激、JNK和凋亡。對HaCaT細(xì)胞給予不同濃度的海藻糖處理,孵育至不同的時間點,觀測自噬標(biāo)志性分子事件的變化。進(jìn)而,分析自噬關(guān)鍵調(diào)控信號。給予葡萄糖、蔗糖、麥芽糖、棉子糖和山梨醇處理分析自噬調(diào)控變化。分析海藻糖處理對UVB損傷的HaCaT細(xì)胞的LDH釋放、克隆形成以及凋亡活性。[結(jié)果]UVB照射抑制人角質(zhì)形成細(xì)胞自噬流,但MTOR信號下調(diào),且雷帕霉素不能恢復(fù)自噬抑制。角質(zhì)形成細(xì)胞MTOR信號對MTOR抑制劑雷帕霉素、依維莫司、Torin1和pp242敏感,但MTOR下游信號的調(diào)控狀態(tài)不同。僅有雷帕霉素可以誘導(dǎo)自噬。MTOR信號對UVB不敏感,但對UVA敏感。雷帕霉素、依維莫司或pp242處理不影響UVB所誘導(dǎo)產(chǎn)生的系列細(xì)胞事件,包括BIP和PERK下調(diào),組蛋白H2A和JNK激活以及caspase 3和PARP剪切。海藻糖處理增加HaCaT細(xì)胞LC3-I向LC3-Ⅱ轉(zhuǎn)換,AO染色陽性囊泡和GFP-LC3點狀聚集。說明具有可以誘導(dǎo)自噬。海藻糖處理并沒有影響MTOR信號,這表明海藻糖誘導(dǎo)的自噬通過非MTOR依賴性途徑。在蔗糖或棉子糖處理的HaCaT細(xì)胞中也可以觀察到非MTOR依賴性自噬誘導(dǎo),但在葡萄糖、麥芽糖和山梨醇處理的HaCaT細(xì)胞中則不能觀測到這種誘導(dǎo),表明自噬誘導(dǎo)能力不是糖類的共性。雖然海藻糖處理對細(xì)胞增殖具有抑制作用,但它對暴露于UVB的細(xì)胞具有提高細(xì)胞活力和抑制異�？寺⌒纬傻淖饔�,并且對UVB誘導(dǎo)的凋亡沒有抑制作用。[結(jié)論]UVB以非MTOR依賴性方式抑制角質(zhì)形成細(xì)胞自噬。抑制角質(zhì)形成細(xì)胞MTOR信號可以不伴隨自噬誘導(dǎo),在UVB觸發(fā)的細(xì)胞反應(yīng)中MTOR通路不發(fā)揮核心作用。海藻糖、蔗糖和麥芽糖是角質(zhì)形成細(xì)胞的非MTOR依賴性自噬誘導(dǎo)劑。海藻糖在UVB損傷的角質(zhì)形成細(xì)胞中展現(xiàn)了良好的細(xì)胞保護(hù)效應(yīng)。
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R751

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