本文關(guān)鍵詞：含反藥組合的海藻玉壺湯中海藻不同品種與甘草加減對甲狀腺腫大大鼠生物效應(yīng)影響及機(jī)制探討

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【摘要】：背景:海藻與甘草相反,屬于"十八反"反藥組合之一。"十八反"歷來爭議頗多,有遵從古訓(xùn)者,亦有勇越雷池者,其能否同用,一直是中醫(yī)藥學(xué)界的難題之一。"十八反"多為有毒中藥與無毒中藥的配伍,只有海藻甘草這一反藥組合,均屬于無毒中藥,兩個無毒中藥配伍產(chǎn)生了"相反",是配伍使用后產(chǎn)生還是與復(fù)方中其他藥物共同作用而引起了增毒或減效的作用,目前沒有明確結(jié)論。2015版《中華人民共和國藥典》記載海藻為馬尾藻科植物海蒿子Sargassum pallidum(Turn.)C.Ag.或羊棲菜Sargassum fusiforme(Harv.)Setch.的干燥藻體。前者習(xí)稱"大葉海藻",后者習(xí)稱"小葉海藻"。關(guān)于不同品種海藻與甘草配伍后比較的研究不多,且主要集中在關(guān)于海蒿子和羊棲菜與甘草單獨(dú)配伍的研究,關(guān)于兩種不同品種的海藻與甘草配伍后對于反藥組合藥效或毒性的影響,目前沒有結(jié)論。因此,本實(shí)驗(yàn)在課題組已完成的實(shí)驗(yàn)研究基礎(chǔ)上,選擇有臨床應(yīng)用基礎(chǔ)的經(jīng)典名方海藻玉壺湯,針對病理?xiàng)l件下,不同品種海藻與甘草加減配伍進(jìn)行研究,從而挖掘基于臨床應(yīng)用的不同品種海藻與甘草配伍對甲狀腺腫大模型大鼠的毒效作用及其內(nèi)在機(jī)制,以期為完善中藥配伍禁忌理論和指導(dǎo)臨床"相反"藥物配伍應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。目的:基于甲狀腺腫大模型,探討含不同品種海藻的海藻玉壺湯在海藻甘草加減配伍條件下的毒效作用,驗(yàn)證是否與方中的反藥組合相關(guān)。通過下丘腦-垂體-甲狀腺軸及甲狀腺相關(guān)基因表達(dá),探討不同品種海藻與甘草加減配伍應(yīng)用治療甲狀腺腫大的機(jī)制;通過CYP450相關(guān)基因及蛋白表達(dá)以及腎臟凋亡等相關(guān)指標(biāo)探討不同品種海藻對甲狀腫大大鼠肝腎功能影響的機(jī)制。方法:1.急性毒性實(shí)驗(yàn):比較海蒿子、羊棲菜,二者與生甘草配伍使用,及其在海藻玉壺湯中加減配伍對小鼠急性毒性的影響,以評價單味藥、二者分別與甘草配伍以及含不同品種海藻的海藻玉壺湯的急性毒性。2.生物效應(yīng):在前期實(shí)驗(yàn)研究中,我們已經(jīng)探討了含不同品種海藻的海藻玉壺湯在海藻甘草接近臨床劑量的條件下的毒-效關(guān)系。海藻甘草劑量為《藥典》高限劑量的兩倍時對甲狀腺腫大的治療效果明顯,因此選擇該劑量進(jìn)行本實(shí)驗(yàn)研究,去掉海藻玉壺湯反藥組合中的一味或兩味,觀察其對模型大鼠的藥效影響及毒理作用。將大鼠隨機(jī)分為空白組、模型組、陽性藥(左甲狀腺素鈉片)組、海藻玉壺湯海蒿子配生甘草組(以下簡稱全方海組)、海藻玉壺湯羊棲菜配生甘草組(以下簡稱全方羊組)、海藻玉壺湯海蒿子去甘草組(以下簡稱海去草組)、海藻玉壺湯羊棲菜去甘草組(以下簡稱羊去草組)、海藻玉壺湯去海藻組(以下簡稱去海藻組)、海藻玉壺湯去海藻甘草組(以下簡稱去藻草組)。檢測甲狀腺功能相關(guān)指標(biāo)、血液生化相關(guān)指標(biāo)及心肝腎病理組織形態(tài)方面的變化,觀察其毒效作用,驗(yàn)證其生物效應(yīng)是否與方中的反藥組合相關(guān)。3.機(jī)制研究:檢測"效"的機(jī)制相關(guān)指標(biāo):檢測血清中甲狀腺激素代謝相關(guān)指標(biāo)水平,包括:促甲狀腺激素釋放激素、甲狀腺過氧化物酶、甲狀腺球蛋白、蛋白水解酶、促甲狀腺激素;甲狀腺激素受體水平:促甲狀腺激素受體、促甲狀腺激素受體抗體;RT-PCR法檢測甲狀腺中Tg及TPO基因表達(dá)。肝腎影響的機(jī)制相關(guān)研究:肝臟代謝:肝組織CYP450基因及蛋白表達(dá)。腎臟相關(guān)機(jī)制:尿乳酸脫氫酶、尿表皮生長因子、尿β2-微球蛋白;TUNEL法檢測腎組織凋亡細(xì)胞。結(jié)果:1.急性毒性實(shí)驗(yàn)結(jié)果:各組別藥物對小鼠急性毒性依次表現(xiàn)為:海蒿子組海蒿子生甘草組海去草組全方海組去藻草組羊去草組;其余各組未表現(xiàn)出毒性。海蒿子與羊棲菜在單用、與生甘草配伍應(yīng)用以及在海藻玉壺湯復(fù)方中加減配伍應(yīng)用的急性毒性實(shí)驗(yàn)中,均表現(xiàn)出明顯的差異,單用及各配伍組合中,海蒿子毒性高于羊棲菜。2.含反藥組合的海藻玉壺湯中海藻不同品種與甘草加減應(yīng)用對甲狀腺腫大大鼠生物效應(yīng)的影響(1)藥效作用:與空白組相比,模型組大鼠體重明顯減輕,體溫下降,甲狀腺系數(shù)升高,血清T4、FT4水平降低和TSH、TRH升高,病理切片顯示甲狀腺組織小葉排列紊亂,甲狀腺濾泡內(nèi)分泌物明顯減少,濾泡上皮細(xì)胞彌漫性增生和肥大,提示甲狀腺腫大模型建立成功。陽性藥明顯改善甲腫大鼠的體重減輕、回調(diào)血清甲狀腺激素水平,但在調(diào)節(jié)升高的血清TRH、TSI水平方面,即對下丘腦-垂體-甲狀腺軸的影響未見明顯作用。全方海組、全方羊組在回調(diào)甲腫大鼠體溫、甲狀腺系數(shù)及組織形態(tài)學(xué)改善方面,效果明顯優(yōu)于陽性藥及拆方各組,且對回調(diào)升高的TSH、TSHR有明顯效果,與下丘腦-垂體-甲狀腺軸的作用有關(guān)。(2)毒性表征1)肝臟:根據(jù)肝臟系數(shù)、肝臟內(nèi)酶水平、肝臟合成功能以及肝臟組織形態(tài)學(xué)的變化,評價不同品種海藻與生甘草反藥組合加減配伍應(yīng)用對甲狀腺腫大模型大鼠肝功能的影響。結(jié)果顯示,丙硫氧嘧啶所致甲狀腺腫大大鼠顯示出了一定程度的肝損傷,在這一病理狀態(tài)下,海藻玉壺湯中不同品種海藻與甘草配伍加減各組,對相應(yīng)的指標(biāo)有回調(diào)作用;海藻甘草反藥組合在海藻玉壺湯中應(yīng)用,對甲狀腺腫大模型大鼠的肝損傷有恢復(fù)作用,優(yōu)于相應(yīng)的去海藻或甘草組;其中,全方海組、海去草組表現(xiàn)出明顯的恢復(fù)作用。而全方羊組表現(xiàn)出了影響肝臟中白蛋白的合成的結(jié)果。海蒿子與羊棲菜分別于復(fù)方海藻玉壺湯中配伍,二者顯示出了對肝功能影響的差異。2)腎臟:根據(jù)腎臟系數(shù)、腎功能相關(guān)指標(biāo)、血尿電解質(zhì)以及腎臟組織形態(tài)學(xué)的變化,評價不同品種海藻與生甘草反藥組合加減配伍應(yīng)用對甲狀腺腫大模型大鼠腎功能的影響。結(jié)果顯示,丙硫氧嘧啶所致甲狀腺腫大大鼠表現(xiàn)出了一定程度的腎損傷,血清電解質(zhì)水平受到影響,在這一病理狀態(tài)下,全方海組、海去草組對相應(yīng)的指標(biāo)有明顯的恢復(fù)作用。而全方羊組對腎功能表現(xiàn)出一定的影響。3)心臟:根據(jù)心臟系數(shù)、肌酸激酶、乳酸脫氫酶水平以及心臟組織形態(tài)學(xué)的變化,評價不同品種海藻與生甘草反藥組合加減配伍應(yīng)用對甲狀腺腫大模型大鼠心功能的影響。結(jié)果顯示,模型組大鼠未見明顯心功能損傷。海藻甘草反藥組合于復(fù)方中應(yīng)用,與去藻草組相比,對于心肌酶的調(diào)節(jié)顯示出了一定的作用。4)血液系統(tǒng):根據(jù)全血細(xì)胞分析,評價不同品種海藻與生甘草反藥組合加減配伍應(yīng)用對甲狀腺腫大模型大鼠血液系統(tǒng)的影響。結(jié)果顯示,丙硫氧嘧啶所致甲狀腺腫大大鼠,紅細(xì)胞系統(tǒng)受到抑制,血小板水平明顯升高,嗜酸性粒細(xì)胞百分比降低。在這一病理狀態(tài)下,全方海組、全方羊組對甲狀腺腫大大鼠的紅細(xì)胞系統(tǒng)有一定的恢復(fù)作用,且能調(diào)節(jié)升高的血小板和降低的嗜酸性粒細(xì)胞百分比,優(yōu)于相應(yīng)的各拆方組合,二者之間未見明顯差異。5)脂質(zhì)過氧化:結(jié)果顯示,丙硫氧嘧啶所致甲狀腺腫大大鼠氧化和抗氧化作用未見失衡。海藻甘草反藥組合于復(fù)方中應(yīng)用,會引起大鼠自由基水平下降,同時自由基清除也減少,因此對于甲狀腺腫大大鼠氧化和抗氧化能力無明顯影響。3.機(jī)制探討(1)藥效機(jī)制探討:模型組大鼠甲狀腺組織TPO、TgmRNA表達(dá)明顯增強(qiáng)。全方海組、全方羊組能抑制TPO基因表達(dá)的增強(qiáng)。(2)肝臟影響機(jī)制探討:模型組大鼠肝臟CYP2E1/3A1/3A2mRNA表達(dá)增強(qiáng),海藻玉壺湯中不同品種海藻與甘草配伍加減各組,對相應(yīng)的指標(biāo)有回調(diào)作用;海藻甘草反藥組合在海藻玉壺湯中加減應(yīng)用,對甲狀腺腫大模型大鼠的肝損傷有恢復(fù)作用;其中,全方海組、海去草組顯示出明顯的恢復(fù)作用。推測可能與海藻玉壺湯(海蒿子/羊棲菜)對增強(qiáng)的基因表達(dá)有回調(diào)作用有關(guān),可以抑制肝臟內(nèi)的前毒物,抑制藥物吸收,發(fā)揮保護(hù)肝功能的作用。而全方羊組表現(xiàn)出了影響肝臟中白蛋白的合成的結(jié)果。海蒿子與羊棲菜分別于復(fù)方海藻玉壺湯中配伍,二者顯示出了對肝功能影響的差異。而海藻玉壺湯(海蒿子/羊棲菜)對CYP2E1蛋白表達(dá)未見明顯影響。(3)腎臟影響機(jī)制探討:模型組大鼠出現(xiàn)腎小管損害及細(xì)胞凋亡,但重吸收功能未見影響。在這一病理狀態(tài)下,全方海組、全方羊組、海去草組對腎小管損害有保護(hù)作用,其效果優(yōu)于各拆方組,但對腎組織細(xì)胞凋亡無明顯影響。結(jié)論:1.海藻甘草反藥組合在海藻玉壺湯中應(yīng)用,對甲狀腺腫大的恢復(fù)作用及回調(diào)甲狀腺激素水平的效果優(yōu)于各拆方組,與下丘腦-垂體-甲狀腺軸的調(diào)節(jié)作用有關(guān)。不同品種的海藻與甘草配伍,未顯示出明顯差異。2.海藻甘草反藥組合在復(fù)方中加減應(yīng)用,對甲狀腺腫大模型大鼠的肝腎損傷有恢復(fù)作用,且能恢復(fù)受抑制的紅細(xì)胞系統(tǒng);其中,全方海組、海去草組顯示出較明顯的恢復(fù)作用。而全方羊組表現(xiàn)出了影響肝臟中白蛋白的合成、影響腎功能相關(guān)指標(biāo)的結(jié)果。不同品種海藻與甘草配伍,分別于海藻玉壺湯中應(yīng)用,二者顯示出了對肝腎功能影響的差異。3.全方海組對CYP2E1/3A1/3A2基因表達(dá)的增強(qiáng)有回調(diào)作用,可以抑制肝臟內(nèi)的前毒物,抑制藥物吸收,發(fā)揮保護(hù)肝功能的作用。全方海組、全方羊組、海去草組對腎小管損害有保護(hù)作用,其效果優(yōu)于各拆方組,但對腎組織細(xì)胞凋亡無明顯影響。
【學(xué)位授予單位】：北京中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R285.5

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本文編號：1259950