本文關(guān)鍵詞：肺纖維化中醫(yī)治療數(shù)據(jù)挖掘及養(yǎng)肺活血方干預(yù)機(jī)制研究

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【摘要】：肺纖維化是一種多個病因引起的發(fā)病機(jī)制尚未明確的肺系疾病,其主要病理變化是初期的彌漫性肺泡炎和中后期大量成纖維細(xì)胞增殖、轉(zhuǎn)化及細(xì)胞外基質(zhì)、膠原過度積聚,最終發(fā)生肺纖維化。肺纖維化的臨床特征常見進(jìn)行性呼吸困難、干咳、氣短等。該疾病可由多種肺系疾病發(fā)展而來。由于環(huán)境污染嚴(yán)重、肺部感染性疾病高發(fā)等原因,PF患者有逐年快速增加之勢。該病預(yù)后較差,被世界衛(wèi)生組織(WHO)列為難治性疾病�，F(xiàn)代西醫(yī)目前缺乏有效藥物治療肺纖維化,而中醫(yī)在治療肺纖維化方面保存了多年治療的方藥和經(jīng)驗(yàn),臨床上已顯示一定的治療優(yōu)勢,但仍需要進(jìn)一步的理論研究、臨床文獻(xiàn)數(shù)據(jù)挖掘等循證醫(yī)學(xué)及實(shí)驗(yàn)研究等數(shù)據(jù)的支撐。養(yǎng)肺活血方是臨床治療肺纖維化的驗(yàn)方,近年來已通過大量實(shí)驗(yàn)研究初步闡述了其作用機(jī)制。本課題在梳理、分析古今中西醫(yī)文獻(xiàn),明確本病中醫(yī)病因病機(jī)特點(diǎn)的基礎(chǔ)上,對近10年中醫(yī)臨床治療肺纖維化的文獻(xiàn)進(jìn)行了數(shù)據(jù)挖掘,探討了臨床治療立法組方的基本規(guī)律。并依托國家自然基金項(xiàng)目,采用動物實(shí)驗(yàn)和細(xì)胞實(shí)驗(yàn)的方法,進(jìn)一步觀察了養(yǎng)肺活血方對肺纖維化動物模型及體外肺成纖維細(xì)胞(MRC-5)激活效應(yīng)的影響,在分子層面對該方防治肺纖維化的作用機(jī)制進(jìn)行了探討,其研究結(jié)果具有理論指導(dǎo)意義和臨床實(shí)用價(jià)值。研究目的1、對肺纖維化相關(guān)古今中西醫(yī)文獻(xiàn)進(jìn)行較深入的系統(tǒng)分析,明確其中醫(yī)病名、主要病因病機(jī)及治法。2、對近10年中醫(yī)臨床治療肺纖維化的文獻(xiàn)進(jìn)行數(shù)據(jù)挖掘,分析研究其臨床有效治法、用藥基本規(guī)律和組方原則,為臨床中醫(yī)認(rèn)識和治療PF提供有效的線索和客觀的循證醫(yī)學(xué)參考依據(jù)。3、通過體內(nèi)動物實(shí)驗(yàn)和體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn),圍繞TLR4/NF-κB信號通路,從膠原蛋白COL I、COL Ⅲ及α-SMA表達(dá)、炎癥因子等角度,進(jìn)一步探討臨床驗(yàn)方養(yǎng)肺活血方干預(yù)肺纖維化的作用機(jī)制。研究方法1、理論研究在回顧肺纖維化相關(guān)古今文獻(xiàn)的基礎(chǔ)上,對本病的中醫(yī)病名、病因病機(jī)、治療方法等進(jìn)行深入、系統(tǒng)的探討,并從現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的角度整理及分析肺纖維化的發(fā)病機(jī)制。2、數(shù)據(jù)挖掘按照2003年中華醫(yī)學(xué)會呼吸病學(xué)分會頒布的肺纖維化診斷標(biāo)準(zhǔn),收集年限為2005年1月—2014年12月的中國科技期刊全文數(shù)據(jù)庫(CNKI)、中國生物醫(yī)學(xué)文獻(xiàn)數(shù)據(jù)庫(CBM)和中國中醫(yī)文獻(xiàn)檢索系統(tǒng)數(shù)據(jù)庫(TCM)中醫(yī)治療肺纖維相關(guān)文獻(xiàn)。對符合納入標(biāo)準(zhǔn)的文獻(xiàn)及所涉及的方劑進(jìn)行研究,利用SPSS統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行頻數(shù)分析、聚類分析、關(guān)聯(lián)規(guī)則分析,探討肺纖維化中醫(yī)臨床有效治法、用藥基本規(guī)律和組方原則。3、實(shí)驗(yàn)研究3.1動物實(shí)驗(yàn):本課題研究養(yǎng)肺活血方對博萊霉素(BLM)所致PF大鼠模型的影響。設(shè)置空白、模型、陽性三個對照組和養(yǎng)肺活血方高、中、低三個劑量組及活血組、養(yǎng)肺組二個拆方組,以Western blot蛋白免疫印跡法檢測肺纖維化大鼠COL Ⅰ、COLⅢ及α-SMA蛋白表達(dá),ELISA法檢測肺纖維化大鼠血清IL-13、TGF-β1及IFN-γ含量,Western blot蛋白免疫印跡法檢測TLR4及NF-κB蛋白的表達(dá)及TLR4/NF-κB信號通路的的活化等。3.2細(xì)胞實(shí)驗(yàn):觀察養(yǎng)肺活血方對TGF-β1誘導(dǎo)的MRC-5細(xì)胞纖維化模型的影響。如上設(shè)制各實(shí)驗(yàn)組,選擇DAPT為陽性藥物對照組。以Western blot蛋白免疫印跡法檢測養(yǎng)肺活血方對TGF-β1誘導(dǎo)MRC-5細(xì)胞增殖、α-SMA蛋白表達(dá)及TLR4/NF-κB信號通路的影響。研究結(jié)果1、理論研究結(jié)果:肺纖維化臨床以慢性咳嗽、咯痰、胸悶、喘憋等為特點(diǎn),古代中醫(yī)文獻(xiàn)中沒有肺纖維化病名,通過對相關(guān)古代文獻(xiàn)分析,得出肺纖維化病名應(yīng)屬中醫(yī)"肺痿"或"肺痹"范疇,早期為肺痹,中期為肺痹、肺痿兼見,后期為肺痿。溫邪等諸多原因?qū)е路沃刑摕崛站谩怅巸商?久則肺絡(luò)瘀阻,這是肺纖維化的主要病機(jī)。臨床上,常用中醫(yī)治法有活血化瘀法、補(bǔ)肺益氣法、滋養(yǎng)陰液法、復(fù)合治療法等。同時,對現(xiàn)代醫(yī)學(xué)相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行了綜述,分析了本病的主要發(fā)病機(jī)制等。現(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)為肺組織損傷、成纖維細(xì)胞增生及其表型轉(zhuǎn)化而成肌成纖維細(xì)胞、炎癥反應(yīng)和細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)積聚,導(dǎo)致了肺纖維化的發(fā)生,而轉(zhuǎn)化生長因子-β1(TGF-β1)等一系列細(xì)胞因子以及TLR4/NF-KB信號通路等各種信號傳導(dǎo)通路,通過組成某種細(xì)胞網(wǎng)絡(luò)參與了 PF的發(fā)生發(fā)展。2、數(shù)據(jù)挖掘研究結(jié)果:2.1常用中藥的種類:肺纖維化治療使用頻數(shù)高的中藥多為益氣、活血中藥。頻次最高的是益氣藥黃芪(59次),其次是活血化瘀藥丹參(42次)。益氣藥黃芪、甘草、黨參共出現(xiàn)117次,活血化瘀藥丹參、當(dāng)歸、川芎,共出現(xiàn)107次。2.2用藥基本規(guī)律:中醫(yī)臨床治療PF的方劑主要由補(bǔ)益藥(占30.68%)、化痰止咳平喘藥(占20.26%)、活血化瘀藥(占13.47%)、清熱藥(占12.98%)、利水滲濕藥(占3.83%)、平肝熄風(fēng)藥(占3.74%)、理氣藥(占3.64%)、解表藥(占3.44%)、收澀藥(占3.15%)9類藥物組成。從用藥基本規(guī)律來看,又以補(bǔ)益藥、化痰止咳平喘藥、活血化瘀藥和清熱藥為主,累積頻率達(dá)77.38%。2.3病機(jī)及治法:肺纖維化以氣(陰)虛血瘀病機(jī)最多,頻數(shù)28次,占40.58%;其次為氣陰兩虛、痰瘀互阻(22次),占31.88%。故本病病機(jī)為氣(陰)虛夾瘀或夾痰,以養(yǎng)肺(補(bǔ)益氣陰)活血法為主要治則,結(jié)合化痰止咳等方法治療肺纖維化。2.4組方配伍規(guī)律2.4.1組方配伍多用扶正活血之品藥對關(guān)聯(lián)規(guī)則分析中發(fā)現(xiàn),益氣藥黃芪常與當(dāng)歸、川芎、桃仁、三七、紅花、丹參等補(bǔ)血活血藥配伍,或與破血通絡(luò)藥莪術(shù)、水蛭等配伍,體現(xiàn)了補(bǔ)氣行血、化瘀通絡(luò)的治療思想。其次,益氣藥黃芪還常與白術(shù)、南沙參等健脾補(bǔ)氣、滋養(yǎng)肺胃陰液的藥物配伍,體現(xiàn)了補(bǔ)氣養(yǎng)陰的治療觀點(diǎn)。藥組關(guān)聯(lián)規(guī)則分析中發(fā)現(xiàn),益氣藥黃芪在配伍丹參、川芎等活血通絡(luò)藥的同時,往往又配伍黨參、當(dāng)歸等補(bǔ)氣補(bǔ)血藥。表明治療PF的組方配伍的藥物大多選擇扶正活血之品。2.4.2以補(bǔ)益、清熱、活血功效藥為主PF用藥的功效歸類中使用頻次最高的為補(bǔ)益功效藥(13頻次),頻率為16%,其中使用最多的補(bǔ)益功效藥包括黃芪、當(dāng)歸、白術(shù)、南沙參、人參、黨參等,顯示了治療PF多用補(bǔ)益功效的中藥。其次是較多用清熱功效(12頻次)和活血(10頻次)功效藥物,頻率在12%以上,如有清熱功效的生地、甘草等,活血功效的有三七、丹參、川芎等。提示治療PF以補(bǔ)益、清熱、活血功效藥為主。2.4.3四氣多以微溫之品配伍寒性和平性藥從用藥的四氣分析看,大多使用微溫之品(12頻次),約占用藥頻率的52%;寒性藥(6頻次)和平性藥(5頻次),頻率為22%。既有黃芪、川芎、半夏、陳皮之溫,又常用丹參、地龍、黃芩、桑白皮之寒。表明以微溫之品補(bǔ)氣、活血、理氣為基本,配合寒性和平性藥以兼顧養(yǎng)陰、清熱、化痰,能夠切中本病的主要病機(jī)。2.4.4五味多以甘味藥配伍苦味藥和辛味藥以藥物的五味而論,甘味藥頻次最高(14頻次),頻率為41%;其次是苦味藥和辛味藥,酸味藥、咸味藥及淡味藥頻次較低。甘味藥多偏潤,補(bǔ)益的同時兼配苦味、辛味藥不易燥烈傷陰,如黃芩、桑白皮、半夏、陳皮、桔梗等。提示甘味藥常配伍苦味藥和辛味藥以利治肺。2.4.5歸經(jīng)多以肺經(jīng)藥為主,兼配肝脾腎經(jīng)藥治療PF歸肺經(jīng)和肝經(jīng)中藥的用藥頻數(shù)(11頻次)最多,頻率都為18%。提示治療藥物首選治肺之品,肺經(jīng)藥有黃芪、南沙參、人參、百合、百部、杏仁等補(bǔ)肺潤肺藥,亦有貝母、黃芩、桑白皮、生甘草等清肺之品。其次,歸肝經(jīng)之藥有當(dāng)歸、川芎、丹參、白芍、桃仁、三七、紅花、莪術(shù)、水蛭等,目的在于調(diào)理氣血、通絡(luò)化瘀,這是用肝經(jīng)藥"治肝"的核心思想。此外,歸脾經(jīng)及腎經(jīng)藥有茯苓、白術(shù)、地黃等,提示臨床常有肺脾氣虛或肺腎氣虛、陰虛等情況,臨床治療常在補(bǔ)氣活血通絡(luò)的基礎(chǔ)上與補(bǔ)腎健脾藥等同用。3、實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果:3.1動物實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,養(yǎng)肺活血方對博萊霉素誘導(dǎo)大鼠肺纖維化模型有干預(yù)作用。給藥28天后,肺組織膠原蛋白COL I、COL III及α-SMA的表達(dá)均較模型組明顯下降,其中又以養(yǎng)肺活血高劑量治療組效果最為明顯,與模型組差異顯著(P0.05),提示養(yǎng)肺活血方可以抑制肺纖維化大鼠ECM的沉積、減少肌成纖維細(xì)胞的形成。并且,該方還能調(diào)控炎癥因子,改善肺纖維化大鼠的炎癥反應(yīng)。具體表現(xiàn)在促進(jìn)IFN-γ分泌,抑制IL-13及TGF-β1生成,提示養(yǎng)肺活血方可以糾正Th1/Th2的失衡,抑制肺纖維化的形成。其機(jī)制可能涉及到調(diào)控肺纖維化大鼠TLR4/NF-KB信號通路的活化,通過降低TLR4及NF-κB蛋白的表達(dá),抑制TLR4/NF-κB信號通路的激活,從而減少大量炎性遞質(zhì)的分泌釋放,達(dá)到減輕肺纖維化的目的。3.2細(xì)胞實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,轉(zhuǎn)化生長因子(TGF-β1)促進(jìn)細(xì)胞增殖,模型組OD值明顯增高,而養(yǎng)肺活血方及拆方組OD值均比模型組明顯下降(P0.01),其中養(yǎng)肺活血高、中劑量組對細(xì)胞增殖的增殖抑制率高達(dá)50%以上,說明養(yǎng)肺活血方及拆方對MRC-5細(xì)胞增殖有抑制作用。同時,養(yǎng)肺活血方可顯著降低TLR4及NF-κB蛋白的表達(dá),抑制TLR4/NF-KB信號通路的活化,并能使α-SMA蛋白表達(dá)下調(diào),以養(yǎng)肺活血高劑量組效果最為明顯(P0.05),表明該方能夠抑制細(xì)胞過度增殖、抑制成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)化為肌成纖維細(xì)胞,從而抑制PF的發(fā)生。從細(xì)胞層面上,初步闡明了養(yǎng)肺活血方對肺纖維化的干預(yù)作用機(jī)制。結(jié)論從近10年肺纖維化中醫(yī)臨床用藥的文獻(xiàn)資料分析結(jié)果,認(rèn)為該病病機(jī)與虛、瘀、痰關(guān)系最為密切,治療以益氣養(yǎng)陰、養(yǎng)肺化痰、活血通絡(luò)和養(yǎng)肺清熱為主要治法。組方配伍多選擇扶正活血之品,功效上多用補(bǔ)益、清熱和活血功效的中藥。用藥多寒溫并用,甘味藥常配苦味藥和辛味藥,治療重心在肺經(jīng),兼顧肝脾腎經(jīng)。養(yǎng)肺活血方能夠緩解博萊霉素致肺纖維化大鼠模型的肺部病變,能夠抑制炎癥反應(yīng)、抗膠原合成、調(diào)控TLR4/NF-κB信號通路的活化。并且,該方能夠抑制體外MRC-5的增、殖,可顯著降低TLR4及NF-κB蛋白的表達(dá),并能使α-SMA蛋白表達(dá)水平降低。因而表明,養(yǎng)肺活血方能夠治療PF,其機(jī)制可能與干預(yù)TLR4/NF-κB信號通路,抑制成纖維細(xì)胞增殖,減輕炎癥反應(yīng)、抑制膠原分泌等有關(guān)。
【學(xué)位授予單位】：南京中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R259

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8 楊s，

本文編號：1259668