本文關(guān)鍵詞：VEGF-C表達及基因多態(tài)性與胃癌的相關(guān)性研究

  更多相關(guān)文章： 胃癌 血管內(nèi)皮生長因子C 微血管密度 淋巴管密度 胃癌 血管內(nèi)皮生長因子C 單核苷酸多態(tài)性

【摘要】：第一部分胃癌組織及血清VEGF-C表達與胃癌的相關(guān)性背景胃癌(Gastric cancer,GC)是一種常見的消化道惡性腫瘤。病死率在所有惡性腫瘤中居第4位。近年來,隨著人們生活方式的和飲食習(xí)慣的改變,胃癌在我國的發(fā)病率迅速升高,并且患者具有年輕化的趨勢。因此,胃癌的防治仍是當下重要的公共衛(wèi)生問題。胃癌是來源于腺體上皮的惡性腫瘤,即胃腺癌,占所有胃癌類型的95%以上。其主要轉(zhuǎn)移方式為淋巴系統(tǒng)轉(zhuǎn)移。有研究表明:與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陰性的早期胃癌相比,伴有周圍淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的早期胃癌5年生存率明顯下降,二者具有顯著統(tǒng)計學(xué)差異。目前認為,多種因素和復(fù)雜的步驟參與了胃癌的發(fā)生和發(fā)展。其中,新生的淋巴管和血管發(fā)揮重要作用。腫瘤的生長依賴于血液供應(yīng),營養(yǎng)物質(zhì)通過血管參與了胃癌的生長、滲透和遠處血行轉(zhuǎn)移。淋巴轉(zhuǎn)移是胃癌更常見的轉(zhuǎn)移方式。淋巴管散在地分布在腫瘤組織內(nèi),其邊緣區(qū)域密度較高,是腫瘤細胞發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的解剖學(xué)基礎(chǔ)。新生的淋巴管結(jié)構(gòu)不完整,缺乏基底膜及平滑基層,腫瘤細胞易進入淋巴管,產(chǎn)生淋巴轉(zhuǎn)移。因此,有效抑制淋巴管的新生可能是防止胃癌早期淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、改善預(yù)后的關(guān)鍵因素。血管及淋巴管的新生與血管內(nèi)皮生長因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)家族高度相關(guān)。當胃癌發(fā)生時,VEGF的表達升高,直接參與了血管新生。而在胃癌組織中,VEGF-C的表達與淋巴管密度及周圍淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移間的關(guān)系尚不完全明確。除外腫瘤組織,血液循環(huán)中也有少量VEGF-C的存在,其濃度大致反應(yīng)了腫瘤的生長及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的情況,血液中大部分VEGF-C是由腫瘤細胞產(chǎn)生并釋放入血液。在胃癌患者中,血液中VEGF-C濃度的改變與胃癌的關(guān)聯(lián)性尚不明確。目的本部分研究將通過檢測胃癌患者腫瘤組織中VEGF-C的表達情況,探究其與胃癌臨床病理學(xué)方面的關(guān)系;并通過檢測胃癌患者血清中VEGF-C的水平,比較胃癌手術(shù)前后血清VEGF-C濃度的改變,探究其濃度與臨床各項指標的相關(guān)性,以期對臨床胃癌患者指導(dǎo)術(shù)前分期提供參考依據(jù)。方法收集144例胃癌患者、46例胃潰瘍患者(對照組)及120例健康人群清晨空腹外周血(胃癌和胃潰瘍患者在術(shù)前一天抽取),提取收集上層血清,放置于-80℃凍存留待檢測。手術(shù)中收取胃癌患者和胃潰瘍患者的胃組織標本,保存于-80℃冰箱及RNAlater液中,分別用于蛋白質(zhì)水平和mRNA水平的檢測。結(jié)果1.胃組織中VEGF-C的mRNA表達水平在對照組、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陰性的胃癌組織及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽性的胃癌組織中,三者VEGF-C的mRNA表達水平依次升高。無論是否伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移,VEGF-C的mRNA表達水平在胃癌組均顯著高于對照組(P0.05)。其中,相比于淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陰性的胃癌組織,VEGF-C的mRNA水平在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽性的胃癌組織中升高更加顯著(P0.05)。2.胃組織中VEGF-C的蛋白質(zhì)表達水平對照組標本中VEGF-C的蛋白質(zhì)相對表達水平最低,在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陰性的胃癌組織和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽性的胃癌組織中,其蛋白質(zhì)相對表達水平依次升高,與對照組相比均有顯著統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)。其中,淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽性胃癌組織中的VEGF-C蛋白質(zhì)表達水平顯著高于淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陰性的胃癌組織(P0.05)。該部分蛋白質(zhì)表達的結(jié)果與mRNA的結(jié)果具有高度一致性。3.胃癌淋巴管密度(LVD)與臨床病理學(xué)特征的相關(guān)性我們進一步對胃癌組織中淋巴管密度和胃癌患者的臨床病理學(xué)特征進行了相關(guān)性分析。TNM分期在Ⅰ、Ⅱ期的患者,其淋巴管的密度顯著低于Ⅲ、Ⅳ期的患者(5.02±2.71vs.13.55±3.11,P0.05);合并周圍淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者,其淋巴管密度顯著高于周圍淋巴結(jié)陰性的患者(13.21±3.05vs.5.17±2.96,P0.05);對于腫瘤的分化等級,在中高分化和低分化患者中,淋巴管密度未見顯著差別(6.22±3.13 vs.7.84±3.18,P0.05)。該結(jié)果說明胃癌組織局部淋巴管密度可能與周圍淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)。4.胃癌微血管密度(MVD)與臨床病理學(xué)特征的相關(guān)性與淋巴管密度和胃癌相關(guān)性分析類似,我們使用同樣的方法統(tǒng)計了微血管密度和胃癌患者臨床病理學(xué)特征的相關(guān)性,結(jié)果發(fā)現(xiàn):TNM分期在Ⅰ、Ⅱ期的患者,其微血管密度顯著低于Ⅲ、Ⅳ期的患者(5.27±2.65 vs.12.41±1.98,P0.05);合并周圍淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者,其微血管密度顯著高于周圍淋巴結(jié)陰性的患者(12.42±4.76vs.7.62±3.12,P0.05);對于腫瘤的分化等級,在中高分化和低分化患者中,微血管密度未見顯著差別(6.59± 1.98 vs.6.92±2.56,P0.05)。該結(jié)果與淋巴管密度的結(jié)果具有一致性。5.VEGF-C與胃癌臨床特征的相關(guān)性無論是VEGF-C的mRNA還是蛋白表達水平,均與病人的性別、年齡和組織學(xué)分化程度無關(guān)(P0.05),而與患者的TNM分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)(P0.05)。本部分結(jié)果顯示,在VEGF-CmRNA及蛋白質(zhì)表達水平較高的患者,其組織學(xué)分化水平更差,周圍淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的可能性更高。6.VEGF-C與微血管密度及淋巴管密度的相關(guān)性我們進一步分析了 VEGF-C在mRNA和蛋白質(zhì)兩個水平表達量與胃癌組織微血管密度及淋巴管密度的相關(guān)性。結(jié)果顯示在胃癌組織中微血管密度及淋巴管密度與VEGF-C的mRNA及蛋白質(zhì)表達水平均具有正相關(guān)性(P0.05)。7.健康人群、胃潰瘍對照組和胃癌患者術(shù)前組血清VEGF-C水平比較為了進一步明確VEGF-C與胃癌臨床病理學(xué)的關(guān)系,我們針對血清中的VEGF-C進行了分析。結(jié)果發(fā)現(xiàn)在健康人群、胃潰瘍患者及胃癌患者術(shù)前血清中VEGF-C 濃度分別為(116.80±26.92)pg/ml、(130.64±20.16)pg/ml 和(389.68±160.70)pg/ml。與健康人群和胃潰瘍患者相比,胃癌患者血清中VEGF-C濃度明顯增高(P0.05),具有顯著統(tǒng)計學(xué)差異;而健康人群和胃潰瘍患者間相比無顯著統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)。8.胃癌患者術(shù)前血清VEGF-C水平與胃癌臨床特征間的關(guān)聯(lián)(1)性別比較男性胃癌患者和女性胃癌患者的血清VEGF-C水平,二者分別為(382.61 ± 144.83)pg/ml 和(428.65± 158.36)pg/ml,統(tǒng)計分析發(fā)現(xiàn)兩者無顯著統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)。(2)年齡以60歲為界,比較不同年齡段胃癌患者血清內(nèi)VEGF-C水平的差異。結(jié)果發(fā)現(xiàn):小于60歲胃癌患者血清VEGF-C的濃度為(390.63±152.17)pg/ml;大于等于60歲胃癌患者為(406.12±150.24)pg/ml,兩者相比無顯著統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)。(3)TNM分期檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn),隨著TNM分期的進展,血清內(nèi)VEGF-C水平顯著升高,Ⅰ期、Ⅱ期患者與Ⅲ期、Ⅳ期患者血清VEGF-C濃度分別為(257.73±72.14)pg/ml和(532.42±121.86)pg/ml,兩者相比具有顯著統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)。(4)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有周圍淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者血清VEGF-C濃度為(513.86±182.06)pg/ml,顯著高于無周圍淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者(360.14±136.56)pg/ml,具有顯著統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)。(5)分化等級結(jié)果顯示:血清VEGF-C水平在中高分化胃癌組為(337.26±130.06)pg/ml,在低分化胃癌組為(429.68± 178.80)pg/ml,二者間具有顯著統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)。9.血清VEGF-C濃度在胃癌手術(shù)前后的變化在所有亞組中,胃癌術(shù)后患者血清中VEGF-C濃度均顯著下降,與術(shù)前相比均有顯著統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)。該結(jié)果說明,胃癌患者術(shù)前血清中高濃度的VEGF-C可能主要來源于腫瘤組織。結(jié)論胃癌組織中VEGF-C的表達與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。VEGF-C可能通過腫瘤血管生成和淋巴管新生參與了胃癌的進展過程,抑制VEGF-C的活性或可減緩腫瘤的生長及轉(zhuǎn)移,起到抗腫瘤的治療效果。血清中VEGF-C的水平可以作為反映腫瘤進展和手術(shù)預(yù)后的有效指標,或可被用于術(shù)前評估胃癌患者病情及術(shù)后監(jiān)測腫瘤復(fù)發(fā),在指導(dǎo)優(yōu)化臨床治療方案方面具有潛在利用價值。第二部分VEGF-C基因多態(tài)性與胃癌的相關(guān)性背景基因變異是導(dǎo)致腫瘤發(fā)生的因素之一。其中,單核苷酸多態(tài)性(single-nucleotide polymorphism,SNP)是人類可遺傳變異中最常見的一種,并且與某些類型腫瘤的發(fā)病風險有關(guān)。SNP指的是在基因組水平上由單個核苷酸的變異所引起的DNA序列多態(tài)性。SNP在人類基因組中廣泛存在,并且在腫瘤研究領(lǐng)域有著廣闊的應(yīng)用前景。SNP根據(jù)其是否在蛋白編碼區(qū)域分為編碼區(qū)SNP和非編碼區(qū)SNP,部分位于編碼區(qū)的SNP可以引起編碼蛋白中氨基酸的改變,從而起到致癌作用。在第一部分研究中我們發(fā)現(xiàn),胃癌組織及血清中VEGF-C的濃度明顯上升,并且與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、微血管密度(MVD)及淋巴管密度(LVD)相關(guān)。然而,VEGF-C表達上升的具體機制尚不明確,推測可能與VEGF-C的基因多態(tài)性有關(guān)。目前,超過60個SNP位點在VEGF-C基因中被發(fā)現(xiàn),部分位點與疾病的發(fā)生相關(guān)。例如,VEGF-C多態(tài)性位點rs1485766 A/A型的人群患肝細胞肝癌的風險增高,說明該多態(tài)性位點可以在一定程度上預(yù)測腫瘤的發(fā)生。目前,尚沒有VEGF-C基因單核苷酸多態(tài)性與胃癌相關(guān)性的報道。目的本部分研究以胃癌患者(病例組)及健康人群(對照組)為研究對象,通過對VEGF-C基因的編碼區(qū)和非編碼區(qū)進行測序,探索VEGF-C基因SNP與胃癌間的關(guān)聯(lián)性。為胃癌病因?qū)W研究及臨床指導(dǎo)提供理論依據(jù)。方法采集胃癌患者(病例組,144例)及健康人群(對照組,120例)外周血樣本,提取外周血液DNA,設(shè)計VEGF-C基因引物,進行預(yù)實驗驗證后使用。對VEGF-C基因外顯子區(qū)域和已知的3個內(nèi)含子區(qū)域的SNP位點進行基因測序。將兩組數(shù)據(jù)進行序列對比,使用SPSS16.0軟件對比分析兩組測序發(fā)現(xiàn)的SNP位點基因型和基因頻率。結(jié)果通過對胃癌患者和健康人群VEGF-C基因測序,我們在外顯子區(qū)域發(fā)現(xiàn)了 3個已知的SNP位點,分別為位于1號外顯子的rs535702112,位于4號外顯子的rs772765057和位于6號外顯子的rs766890973,均屬于同義單核苷酸堿基改變。3個位于內(nèi)含子區(qū)域的SNP分別是rs1485766、rs11947611和rs7664413。病例組和對照組之間基因多態(tài)性的基因型和相關(guān)性見表1。我們分別分析了這6個SNP位點的基因型頻率和等位基因頻率,結(jié)果發(fā)現(xiàn)病例組與對照組相比均無顯著統(tǒng)計學(xué)差異。rs535702112、rs772765057、rs766890973、rs1485766、rs11947611 和rs7664413位點在病例組和對照組等位基因頻率最高的堿基對分別為:純合子GG,純合子GG,雜合子TC,純合子AA,純合子CC,純合子CC。通過綜合變量分析,相比于對照組,胃癌患者病例組中帶有以上各個SNP位點并無明顯意義。在本部分研究中,我們根據(jù)不同的臨床指標將胃癌患者分為3個亞組,包括TNM臨床分期、是否伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及分化程度,然后通過分別對比各個亞組與正常人群SNP等位基因的頻率,研究VEGF-C基因多態(tài)性對胃癌病理學(xué)特征的影響。結(jié)果顯示,對照組與病例組相比,多態(tài)性位點rs535702112,rs772765057,rs766890973,rs1485766,rs11947611,rs7664413 與胃癌臨床病理改變并無相關(guān)性。結(jié)論VEGF-C基因的單核苷酸多態(tài)性位點與胃癌的易感性及臨床病理學(xué)特征均無顯著相關(guān)性。提示胃癌患者VEGF-C蛋白質(zhì)及mRNA表達水平的升高與VEGF-C的單核苷酸多態(tài)性無關(guān)。
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R735.2

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前4條

1 孫嘉琦;姜雷;袁文臻;趙達;關(guān)泉林;;貝伐珠單抗聯(lián)合化療治療晚期胃癌的Meta分析[J];腫瘤;2016年01期

2 季加孚;;我國胃癌防治研究三十年回顧[J];中國腫瘤臨床;2013年22期

3 邵永勝;張應(yīng)天;;胃癌外科治療的現(xiàn)狀與變革[J];醫(yī)學(xué)新知雜志;2008年02期

4 何裕隆,張常華,詹文華,蔡世榮,黃美近,陳創(chuàng)奇,吳暉,彭建軍;胃癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移規(guī)律的探討[J];中華普通外科雜志;2004年11期

，

本文編號：1255444