發(fā)布時間：2017-12-05 17:36

  本文關(guān)鍵詞：錳增強(qiáng)磁共振成像檢測大腸癌轉(zhuǎn)移潛能的實(shí)驗(yàn)研究

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【摘要】：第一部分[目的]研究不同類型CRC細(xì)胞株能否在體外攝取錳離子、不同轉(zhuǎn)移潛能的CRC細(xì)胞株體外攝錳有無差異。[材料與方法]人 CRC 細(xì)胞株 SW620、LoVo、DLD-1、HCT15、HCT116、SW480、Caco-2及正常人結(jié)腸粘膜上皮細(xì)胞株CCD841 CoN傳代培養(yǎng)。以對數(shù)生長期細(xì)胞株行Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)并計算細(xì)胞株侵襲指數(shù),以侵襲指數(shù)為依據(jù)選擇高、低轉(zhuǎn)移潛能細(xì)胞株各兩種待行體外細(xì)胞MEMRI,MEMRI前行MTT檢測并比較0.1 mM錳劑培育60分鐘后細(xì)胞活力情況。每種細(xì)胞株平均分成兩份,一份用含錳離子濃度為0.1 mM的培養(yǎng)基培育60分鐘后離心、清洗、再離心。另一份用不含錳離子的培養(yǎng)基培養(yǎng)行相同操作作為對照。將離心后得到的約10 mm厚細(xì)胞團(tuán)行MR掃描,分別作T1WI和T1 map。將T1 map數(shù)據(jù)導(dǎo)入MatLab平臺內(nèi)的程序計算map圖、手動勾畫興趣區(qū)并記錄平均T1值。將無錳劑培育細(xì)胞株平均T1值減去錳劑培育細(xì)胞株平均T1值得到平均T1縮短值。單因素方差分析比較細(xì)胞株之間的存活率差異及平均T1縮短值的差異。[結(jié)果]侵襲指數(shù)較高的細(xì)胞株為SW620、LoVo、HCT116(22.6±0.7、20.9±0.6、17.0±0.6);較低的為 DLD-1、HCT15、SW480(7.5±0.3、8.3±0.2、9.7±0.4),而Caco-2 居中(12.6±0.5)。錳劑培育后細(xì)胞株 SW620、LoVo、DLD-1、HCT15、CCD841CoN存活率(%)分別為(96.3±0.01、96.3±0.03、96.0±0.01、96.2±0.03、96.1±0.02),差異無統(tǒng)計意義(p0.05)。MR掃描T1WI顯示,所有細(xì)胞株均攝錳強(qiáng)化,以瘤細(xì)胞株明顯。T1 map測值結(jié)果示平均T1縮短值(msec)最明顯的為SW620、LoVo(289.33±0.57、268.45±6.87);DLD-1、HCT15 次之(148.68±3.99、128.60±1.96),CCD841 CoN 最低(65.12±0.12)。高轉(zhuǎn)移潛能、低轉(zhuǎn)移潛能細(xì)胞株與正常細(xì)胞株之間q檢驗(yàn)兩兩比較差異有統(tǒng)計意義(p0.001)。[結(jié)論]人CRC細(xì)胞株SW620、LoVo、DLD-1、HCT15及正常粘膜細(xì)胞株CCD841 CoN體外均可攝錳強(qiáng)化,且在0.1 mM錳培育60分鐘后活力無顯著改變。高轉(zhuǎn)移潛能細(xì)胞株SW620、LoVo比低轉(zhuǎn)移潛能細(xì)胞株DLD-1、HCT15平均T1值縮短更明顯。第二部分[目的]比較SW620、DLD-1細(xì)胞株皮下移植瘤MRI釓、錳增強(qiáng)表現(xiàn);驗(yàn)證體外細(xì)胞株實(shí)驗(yàn)中SW620、LoVo、DLD-1、HCT15細(xì)胞株MEMRI強(qiáng)化程度不同的結(jié)果。[方法與材料]SW620、LoVo、DLD-1、HCT15細(xì)胞株行BALB/c裸小鼠皮下移植造模,分別于腫瘤最大徑約5、10與15 mm時行MRI。所有移植瘤均行平掃T1WI、T1 map及錳增強(qiáng)T1WI、T1 map。其中SW620、DLD-1移植瘤在行錳增強(qiáng)前另行Gd-DTPA增強(qiáng)。所有腫瘤均行常規(guī)HE染色及CD34免疫組化并計數(shù)微血管密度。T1 map數(shù)據(jù)導(dǎo)入MatLab平臺軟件處理。比較釓、錳增強(qiáng)腫瘤的強(qiáng)化方式、程度;兩種對比劑MRI上不同大小組腫瘤明顯強(qiáng)化的個數(shù)以及不同轉(zhuǎn)移潛能移植瘤平均T1值縮短的差異。[結(jié)果]成功移植36個腫瘤。36例移植瘤均行平掃及錳增強(qiáng),釓增強(qiáng)21例(SW620=5,DLD-1=16)。不論何種移植瘤,其釓、錳強(qiáng)化方式均為不均勻增強(qiáng),但明顯強(qiáng)化例數(shù)及程度不一樣。以平均T1值縮短≥500 msec為明顯強(qiáng)化,錳增強(qiáng)上明顯強(qiáng)化腫瘤數(shù)(17/23)明顯多于釓增強(qiáng)明顯強(qiáng)化腫瘤數(shù)(1/21),但例數(shù)少、不能行統(tǒng)計檢驗(yàn)。5 mm組兩種腫瘤共10例其錳增強(qiáng)平均T1值縮短均≥500 msec、釓增強(qiáng)平均T1值縮短均≤300 msec,配對t檢驗(yàn)顯示兩種造影劑增強(qiáng)程度差異有顯著意義(p0.001)。但10與15 mm組腫瘤釓、錳增強(qiáng)平均T1值縮短差異無統(tǒng)計意義。5 mm組腫瘤T1 map測值顯示高轉(zhuǎn)移潛能細(xì)胞株SW620與LoVo腫瘤平均T1值縮短均≥600 msec;低轉(zhuǎn)移潛能細(xì)胞株DLD-1與HCT15腫瘤平均T1值縮短均≤300 msec。10 mm組高轉(zhuǎn)移潛能細(xì)胞株LoVo腫瘤平均T1值縮短≥600 msec;低轉(zhuǎn)移潛能細(xì)胞株DLD-1與HCT15移植瘤平均T1值縮短均≤350 msec。單因素方差分析顯示不論5 mm、10 mm組不同轉(zhuǎn)移潛能細(xì)胞株移植瘤組間有統(tǒng)計差異(p0.001、p=0.011)。兩兩比較q檢驗(yàn)示不同大小組內(nèi)、相似轉(zhuǎn)移潛能移植瘤之間無統(tǒng)計差異。HE染色示全部36例移植瘤均為中低分化腺癌。CD34免疫組化染色MVD計數(shù)結(jié)果顯示無論腫瘤大小或移植瘤種類其微血管均較稀少,最小值為11.4、最大值為20,平均14.68(單位:個/視野)。[結(jié)論]錳增強(qiáng)能明顯強(qiáng)化多數(shù)常規(guī)釓增強(qiáng)上強(qiáng)化不明顯的CRC移植瘤,并有可能適合檢測小腫瘤。高轉(zhuǎn)移潛能腫瘤平均T1值縮短顯著大于低轉(zhuǎn)移潛能者。在體腫瘤實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步驗(yàn)證了體外細(xì)胞株實(shí)驗(yàn)的結(jié)果。第三部分[目的]定量檢測CRC及大腸正常粘膜細(xì)胞株MnSOD表達(dá)水平、觀察MnSOD表達(dá)與癌細(xì)胞株轉(zhuǎn)移潛能的關(guān)系;探討腫瘤錳增強(qiáng)表現(xiàn)與MnSOD表達(dá)的可能聯(lián)系。[材料與方法]高轉(zhuǎn)移潛能SW620、HCT116、LoVo,低轉(zhuǎn)移潛能DLD-1、SW480、HCT15以及侵襲指數(shù)居中的細(xì)胞株Caco-2行western blot定量分析MnSOD表達(dá)水平,以正常細(xì)胞株CCD841CoN作對照。單因素方差分析比較MnSOD表達(dá)的差異。Pearson直線相關(guān)分析檢驗(yàn)各細(xì)胞株MnSOD表達(dá)與第一部分中細(xì)胞株侵襲指數(shù)的相關(guān)性;觀察SW620、LoVo、DLD-1、HCT15細(xì)胞株MnSOD表達(dá)與第一部分中細(xì)胞株體外MEMRI平均T1值縮短程度的關(guān)系。[結(jié)果]所有CRC細(xì)胞株及正常細(xì)胞株CCD841CoN(0.185±0.038)均不同程度表達(dá)MnSOD。除Caco-2表達(dá)(0.163±0.035)低于正常細(xì)胞外,其余瘤細(xì)胞株表達(dá)均高于CCD841 CoN(0.185±0.038)。雖然MnSOD表達(dá)水平最高的均為低轉(zhuǎn)移潛能瘤細(xì)胞株DLD-1與HCT15(0.777±0.031、1.045±0.038),但MnSOD表達(dá)水平較低者即包括中等侵襲性細(xì)胞株Caco-2(0.163±0.035)和低轉(zhuǎn)移潛能細(xì)胞株SW480(0.337±0.025),還包括高轉(zhuǎn)移潛能細(xì)胞株 LoVo、SW620(0.438±0.028、0.255±0.018)與 HCT116(0.289±0.028)。與正常細(xì)胞比DLD-1、HCT15細(xì)胞株表達(dá)明顯增高(p0.01,p0.001),LoVo與SW480表達(dá)增高(p0.05,p0.05),SW620、HCT116表達(dá)增高但差異無統(tǒng)計意義(p0.05)。相關(guān)分析顯示細(xì)胞株MnSOD表達(dá)水平與侵襲指數(shù)無關(guān)(r=-0.204,p=0.627)。MnSOD表達(dá)低的LoVo、SW620細(xì)胞株MEMRI上平均T1值縮短程度大,MnSOD表達(dá)高的DLD-1、HCT15細(xì)胞株平均T1值縮短程度小。[結(jié)論]CRC細(xì)胞株轉(zhuǎn)移潛能與MnSOD表達(dá)水平不對應(yīng)。就LoVo、SW620、DLD-1、HCT15細(xì)胞株而言,MnSOD表達(dá)水平高的平均T1值縮短程度小、MnSOD表達(dá)水平低的平均T1值縮短程度大。
【學(xué)位授予單位】：昆明醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R735.34;R445.2

【參考文獻(xiàn)】

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1 彭健宏;張彩霞;方m錁，

本文編號：1255651