本文關(guān)鍵詞：舒巴坦通過(guò)p38 MAPK通路介導(dǎo)GLT-1上調(diào)參與誘導(dǎo)大鼠腦缺血耐受

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【摘要】：缺血性腦疾病以其致死率高、致殘率高的特點(diǎn)嚴(yán)重威脅著人類健康。隨著當(dāng)前中國(guó)社會(huì)老齡化程度日益加重,以及社會(huì)生活、工作節(jié)奏的日益加快,缺血性腦疾病在臨床呈現(xiàn)多發(fā)勢(shì)態(tài),且呈現(xiàn)越來(lái)越年輕化的趨勢(shì)。此外,一些可以預(yù)知的臨床缺血性改變,如神經(jīng)外科手術(shù)、心臟外科手術(shù)、合并心腦血管疾病患者的大手術(shù)時(shí)血流的停滯帶來(lái)的心、腦缺血性損傷也是亟待解決的問(wèn)題。在疾病發(fā)生前后,充分調(diào)動(dòng)機(jī)體內(nèi)源性保護(hù)機(jī)制,使神經(jīng)細(xì)胞在遭受缺血打擊時(shí)減輕損傷,是此類疾病的預(yù)防和治療過(guò)程中的關(guān)鍵因素之一。谷氨酸是中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)重要的興奮性神經(jīng)遞質(zhì),與生理情況下大腦功能的維持密切相關(guān)。然而,在缺血性腦疾病發(fā)生時(shí),缺血、缺氧狀態(tài)的出現(xiàn)造成谷氨酸大量釋放到突觸間隙內(nèi),同時(shí)腦內(nèi)的谷氨酸轉(zhuǎn)運(yùn)異常,使神經(jīng)細(xì)胞外的谷氨酸濃度明顯升高。微透析實(shí)驗(yàn)顯示,在腦缺血發(fā)生時(shí),腦組織細(xì)胞外的谷氨酸濃度可以由正常的1-5μM升高到16-30μM。過(guò)量的谷氨酸引起神經(jīng)細(xì)胞的過(guò)度興奮是導(dǎo)致神經(jīng)元損傷的重要機(jī)制。因此,改善腦內(nèi)谷氨酸轉(zhuǎn)運(yùn)過(guò)程,以維持突觸間隙內(nèi)谷氨酸濃度的正常是腦缺血性疾病時(shí)保護(hù)神經(jīng)細(xì)胞的重要手段。突觸間隙內(nèi)谷氨酸濃度的穩(wěn)定主要依賴高親和性興奮性氨基酸轉(zhuǎn)運(yùn)體(excitatory amino acid transporters,EAATs)系統(tǒng)維持。至今已發(fā)現(xiàn)了5種高親和性谷氨酸轉(zhuǎn)運(yùn)體,即EAAT 1-5,其中EAAT2主要分布在星形膠質(zhì)細(xì)胞的細(xì)胞膜上,又被稱為膠質(zhì)細(xì)胞谷氨酸轉(zhuǎn)運(yùn)體-1(glial glutamate transporter-1,GLT-1)。GLT-1在谷氨酸穩(wěn)態(tài)維持中發(fā)揮著重要作用,突觸間隙中超過(guò)90%的谷氨酸依靠GLT-1的轉(zhuǎn)運(yùn)而清除。在腦內(nèi)谷氨酸濃度升高時(shí),通過(guò)GLT-1的跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)能高效的清除突觸間隙內(nèi)的谷氨酸,使其維持正常的濃度,防止谷氨酸濃度過(guò)度增高引起神經(jīng)細(xì)胞的過(guò)度興奮而造成損傷。因此,GLT-1在缺血性腦損傷的發(fā)生以及腦缺血耐受的誘導(dǎo)過(guò)程中發(fā)揮著重要的作用。研究顯示,全腦缺血造成大鼠海馬CA1區(qū)GLT-1的m RNA和蛋白合成均降低,同時(shí)海馬CA1區(qū)神經(jīng)元發(fā)生遲發(fā)性死亡(delayed neuronal death,DND)。我室既往研究顯示,通過(guò)腦缺血預(yù)處理可以增加大鼠海馬CA1區(qū)GLT-1的表達(dá),同時(shí)神經(jīng)細(xì)胞對(duì)缺血的耐受性增強(qiáng);而應(yīng)用反義寡核苷酸技術(shù)阻斷GLT-1的表達(dá)或應(yīng)用特異性抑制劑阻斷GLT-1的功能后,腦缺血預(yù)處理介導(dǎo)的神經(jīng)保護(hù)作用也被阻斷。綜上,對(duì)GLT-1蛋白表達(dá)和功能進(jìn)行調(diào)制,有可能成為缺血性腦疾病的預(yù)防和治療的一個(gè)新靶點(diǎn)。既往研究表明,β-內(nèi)酰胺類抗生素可以促進(jìn)腦內(nèi)GLT-1蛋白表達(dá),增強(qiáng)星形膠質(zhì)細(xì)胞對(duì)突觸間隙內(nèi)谷氨酸的清除能力,改善腦內(nèi)谷氨酸循環(huán)過(guò)程,從而發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用。這一發(fā)現(xiàn)在神經(jīng)細(xì)胞缺血耐受的研究中備受關(guān)注。研究發(fā)現(xiàn),氨芐青霉素預(yù)處理可以上調(diào)GLT-1蛋白表達(dá),抑制基質(zhì)金屬蛋白酶活性,從而對(duì)前腦缺血小鼠的海馬神經(jīng)元發(fā)揮保護(hù)作用。在大腦中動(dòng)脈阻塞的局灶性缺血模型中,預(yù)先應(yīng)用頭孢曲松鈉可以上調(diào)GLT-1表達(dá),增強(qiáng)谷氨酰胺合成酶活性,使腦梗死體積明顯縮小。大鼠大腦中動(dòng)脈阻塞后應(yīng)用頭孢曲松鈉,可以增強(qiáng)GLT-1的活性,同時(shí)使梗死區(qū)內(nèi)神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子增多,有效降低腦缺血造成的神經(jīng)損傷。我室既往研究發(fā)現(xiàn),應(yīng)用頭孢曲松鈉預(yù)處理可以上調(diào)大鼠海馬CA1區(qū)GLT-1的表達(dá),增強(qiáng)膠質(zhì)細(xì)胞對(duì)突觸間隙內(nèi)谷氨酸的攝取能力,使神經(jīng)細(xì)胞在隨后發(fā)生的致死性缺血打擊中得以存活。這些發(fā)現(xiàn)在缺血性腦損傷類疾病的防治中具有積極的意義,但是鑒于頭孢曲松鈉為一線抗生素,抗菌作用強(qiáng)大,臨床大量使用會(huì)帶來(lái)諸如菌群失調(diào)、耐藥菌株出現(xiàn)等多種不良后果。這些不良后果大大限制了頭孢曲松鈉應(yīng)用于臨床缺血性腦損傷的防治研究。因此,積極尋找副作用小的替代品,對(duì)上述研究成果的臨床轉(zhuǎn)化具有重要意義。舒巴坦(sulbactam)的化學(xué)結(jié)構(gòu)中也具有β-內(nèi)酰胺環(huán),與頭孢曲松鈉相似,但是其抗菌作用遠(yuǎn)遠(yuǎn)弱于頭孢曲松鈉,臨床上一般與β-內(nèi)酰胺類抗生素聯(lián)合用藥,以增強(qiáng)其抗菌效應(yīng)。我室在近期的研究中發(fā)現(xiàn),對(duì)大鼠應(yīng)用舒巴坦預(yù)處理可以通過(guò)調(diào)制海馬CA1區(qū)GLT-1蛋白的表達(dá),增強(qiáng)神經(jīng)元的抗缺血耐受能力。鑒于舒巴坦的抗菌活性較弱,副作用較小,深入研究舒巴坦上調(diào)GLT-1的表達(dá)和功能、進(jìn)而發(fā)揮神經(jīng)元保護(hù)作用的機(jī)制,可為舒巴坦在抗缺血性腦損傷方面的應(yīng)用和研究提供理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù),具有重要的意義。絲裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinases,MAPKs)屬于絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶家族,廣泛分布于機(jī)體各種細(xì)胞內(nèi)。MAPKs信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路主要包括ERK(extracellular signal-Regulated kinase,ERK)、JNK(c-Jun N-terminal kinase,JNK)、p38 MAPK和BMK(big MAPKinase,BMK),是細(xì)胞內(nèi)的重要信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制,通過(guò)調(diào)節(jié)目的蛋白合成,參與細(xì)胞增殖、轉(zhuǎn)化、分化及凋亡等過(guò)程。p38 MAPK屬于應(yīng)激性蛋白激酶,其在缺血性疾病的發(fā)病過(guò)程中發(fā)揮重要作用。在大鼠大腦中動(dòng)脈栓塞局灶性腦缺血模型的研究中,通過(guò)缺氧預(yù)處理可以使梗死區(qū)周?chē)鷓38 MAPK的表達(dá)增加,同時(shí)這一區(qū)域的神經(jīng)細(xì)胞對(duì)缺血性打擊的耐受性增強(qiáng),這種保護(hù)作用隨著p38 MAPK的表達(dá)被抑制而減弱。我室系列研究發(fā)現(xiàn),腦缺血預(yù)處理可以適度上調(diào)p38 MAPK的表達(dá),進(jìn)而增加GLT-1的表達(dá)而誘導(dǎo)腦缺血耐受,應(yīng)用p38 MAPK通路的特異性抑制劑或AS-ODNs阻斷p38MAPK通路的活動(dòng),腦缺血預(yù)處理誘導(dǎo)的腦缺血耐受效應(yīng)也被阻斷。據(jù)此,我們?cè)O(shè)想,p38 MAPK信號(hào)通路可能參與介導(dǎo)舒巴坦誘導(dǎo)的GLT-1上調(diào)和神經(jīng)細(xì)胞保護(hù)作用。為證實(shí)此設(shè)想,本研究應(yīng)用大鼠全腦缺血模型,觀察舒巴坦對(duì)海馬CA1區(qū)p38 MAPK磷酸化蛋白(p-p38 MAPK)和GLT-1表達(dá)的影響,同時(shí)應(yīng)用p38 MAPK通路特異性抑制劑SB203580,觀察其對(duì)舒巴坦誘導(dǎo)的GLT-1表達(dá)上調(diào)和腦缺血耐受的影響,探討p38MAPK在舒巴坦誘導(dǎo)的GLT-1上調(diào)和腦缺耐受中的作用,為缺血性腦疾病的防治提供理論基礎(chǔ)。第一部分舒巴坦對(duì)大鼠海馬CA1區(qū)p-p38 MAPK和GLT-1表達(dá)的影響目的:觀察給正常大鼠或四血管閉塞全腦缺血大鼠側(cè)腦室注射舒巴坦后,海馬CA1區(qū)p-p38 MAPK和GLT-1蛋白的表達(dá),對(duì)比p-p38 MAPK和GLT-1蛋白表達(dá)的時(shí)間關(guān)系,為確定舒巴坦通過(guò)p38 MAPK通路上調(diào)大鼠海馬CA1區(qū)GLT-1的表達(dá)提供依據(jù)。方法:健康雄性Wistar大鼠60只,側(cè)腦室埋置給藥套管后隨機(jī)分為以下幾組:1溶劑對(duì)照(NS+sham)組(n=5)首先給大鼠側(cè)腦室一次性注射舒巴坦溶劑生理鹽水(normal saline,NS)10μl,之后即刻進(jìn)行全腦缺血的sham手術(shù)。2舒巴坦+sham組(n=5)首先給大鼠側(cè)腦室一次性注射舒巴坦溶液(360 nmol,10μl),之后即刻進(jìn)行全腦缺血的sham手術(shù)。3全腦缺血(NS+全腦缺血)組(n=5)首先給大鼠側(cè)腦室注射舒巴坦的溶劑NS 10μl,之后即刻進(jìn)行8 min的全腦缺血手術(shù)。4舒巴坦+全腦缺血組(n=5)首先給大鼠側(cè)腦室注射舒巴坦溶液(360 nmol,10μl),之后即刻進(jìn)行8 min的全腦缺血手術(shù)。各組大鼠分別于側(cè)腦室注射后6 h、12 h和48 h取材,應(yīng)用免疫組織化學(xué)和western blot方法,觀察海馬CA1區(qū)p-p38 M APK和GLT-1蛋白的表達(dá)情況,對(duì)比p-p38 MAPK和GLT-1蛋白表達(dá)的時(shí)間關(guān)系。結(jié)果:免疫組化結(jié)果顯示,溶劑對(duì)照(NS+sham)組大鼠海馬CA1區(qū)有一定量的p-p38 MAPK和GLT-1的基礎(chǔ)表達(dá),呈現(xiàn)淺棕黃色顆粒,各時(shí)間點(diǎn)相比較,p-p38 MAPK、GLT-1蛋白免疫陽(yáng)性染色未見(jiàn)明顯的改變。側(cè)腦室給予舒巴坦(舒巴坦+sham組)后,p-p38 MAPK、GLT-1蛋白的免疫陽(yáng)性著色均有不同程度的上調(diào),p-p38 MAPK陽(yáng)性顆粒主要位于細(xì)胞核內(nèi),GLT-1陽(yáng)性染色緊緊包繞著神經(jīng)元,呈現(xiàn)典型的“網(wǎng)格”狀圖像;p-p38MAPK和GLT-1兩者表達(dá)上調(diào)的時(shí)間不同,與溶劑對(duì)照(NS+sham)組比較,給予舒巴坦6 h后大鼠海馬CA1區(qū)p-p38 MAPK的陽(yáng)性染色明顯增強(qiáng),達(dá)到高峰,12 h開(kāi)始回落,48 h已接近溶劑對(duì)照組水平(P0.05);而GLT-1的表達(dá)高峰要遲于p-p38 MAPK,在給予舒巴坦后12 h GLT-1的陽(yáng)性染色開(kāi)始增強(qiáng),48 h達(dá)到高峰(P0.05)。全腦缺血(NS+ischemia組)引起大鼠海馬CA1區(qū)p-p38 MAPK表達(dá)升高,表現(xiàn)為與溶劑對(duì)照(NS+sham)組相比較,免疫陽(yáng)性染色明顯增強(qiáng),缺血后12 h達(dá)高峰(P0.05),約為溶劑對(duì)照組的2倍,48 h逐漸回落;全腦缺血后各時(shí)間點(diǎn)GLT-1的表達(dá)未見(jiàn)明顯改變。舒巴坦+全腦缺血組大鼠海馬CA1區(qū)p-p38MAPK和GLT-1的表達(dá)均有不同程度的增加,與溶劑對(duì)照(NS+sham)組相比較,p-p38 MAPK的表達(dá)在給予舒巴坦后6 h達(dá)到高峰(P0.05),12 h逐漸回落至sham水平;GLT-1的表達(dá)在給舒巴坦后12 h開(kāi)始升高,48 h達(dá)高峰(P0.05);此外,與全腦缺血(NS+ischemia)組相比較,給予舒巴坦后抑制了全腦缺血引起的海馬CA1區(qū)p-p38 MAPK的過(guò)度表達(dá),表現(xiàn)為表達(dá)的峰值低于全腦缺血組。Western blot檢測(cè)結(jié)果與免疫組化呈現(xiàn)相似的趨勢(shì),無(wú)論是正常大鼠還是全腦缺血大鼠,給予舒巴坦后均引起p-p38 MAPK和GLT-1蛋白表達(dá)的上調(diào)(P0.05),且均表現(xiàn)為GLT-1的表達(dá)上調(diào)的時(shí)間遲于p-p38 MAPK的表達(dá)上調(diào),具體表達(dá)上調(diào)時(shí)間點(diǎn)與免疫組化結(jié)果相同。綜上,無(wú)論正常大鼠還是全腦缺血大鼠,應(yīng)用舒巴坦預(yù)處理后海馬CA1區(qū)GLT-1、p-p38 MAPK的表達(dá)均有增高,但其表達(dá)的時(shí)間呈現(xiàn)明顯的先后順序,GLT-1的表達(dá)上調(diào)的時(shí)間遲于p-p38 MAPK的表達(dá)上調(diào),提示舒巴坦可能通過(guò)p38 MAPK通路促進(jìn)GLT-1的表達(dá)上調(diào)。第二部分抑制p38 MAPK信號(hào)通路對(duì)舒巴坦引起的大鼠海馬CA1區(qū)GLT-1蛋白上調(diào)的影響目的:為進(jìn)一步明確p38 MAPK信號(hào)通路在舒巴坦預(yù)處理上調(diào)GLT-1表達(dá)和神經(jīng)細(xì)胞保護(hù)中的作用,應(yīng)用p38 MAPK信號(hào)通路的特異性抑制劑SB203580抑制p38 MAPK的功能后,分別觀察舒巴坦對(duì)sham及全腦缺血大鼠GLT-1表達(dá)的影響,從而證明舒巴坦是否通過(guò)p38 MAPK信號(hào)通路介導(dǎo)GLT-1表達(dá)上調(diào)參與誘導(dǎo)腦缺血耐受。方法:健康雄性Wistar大鼠35只,側(cè)腦室埋置給藥套管后隨機(jī)分為以下幾組,每組n=5:1溶劑對(duì)照(NS+sham)組(n=5):同第一部分;2舒巴坦(舒巴坦+sham)組(n=5):同第一部分;3 SB203580+舒巴坦組(n=5):首先給大鼠側(cè)腦室注射SB203580(5nmol,10μl),30 min后按第一部分中“舒巴坦+sham組”方法,側(cè)腦室內(nèi)注射舒巴坦溶液及進(jìn)行全腦缺血的sham手術(shù);4 SB203580+sham組(n=5):首先給大鼠側(cè)腦室注射SB203580溶液(5 nmol,10μl),隨后即刻進(jìn)行全腦缺血的sham手術(shù)。5全腦缺血組(NS+全腦缺血)組(n=5):同第一部分6舒巴坦+全腦缺血組(n=5):同第一部分;7 SB203580+舒巴坦+全腦缺血組(n=5):首先給大鼠側(cè)腦室注射SB203580溶液(5 nmol,10μl),30 min后按第一部分“舒巴坦+全腦缺血組”的方法,進(jìn)行側(cè)腦室注射舒巴坦溶液及全腦缺血。各組大鼠分別于側(cè)腦室注射舒巴坦溶液后48 h取材,應(yīng)用免疫組化和western blot的方法,觀察海馬CA1區(qū)GLT-1蛋白表達(dá)的變化。結(jié)果:免疫組化結(jié)果顯示,溶劑對(duì)照(NS+sham)組大鼠海馬CA1區(qū)GLT-1有一定量的表達(dá),側(cè)腦室給予舒巴坦(舒巴坦+sham組)后48 h,大鼠海馬CA1區(qū)GLT-1的陽(yáng)性染色明顯增強(qiáng)(P0.05)。與舒巴坦(舒巴坦+sham)組比較,預(yù)先給予SB203580(SB203580+舒巴坦組)后海馬CA1區(qū)GLT-1的陽(yáng)性染色明顯減弱(P0.05)。與全腦缺血(NS+ischemia)組相比,預(yù)先給予舒巴坦(sulbactam+ischemia)可明顯上調(diào)全腦缺血大鼠海馬CA1區(qū)GLT-1的表達(dá)。與舒巴坦+全腦缺血組相比較,預(yù)先給予SB203580后大鼠海馬CA1區(qū)GLT-1的陽(yáng)性染色明顯減弱(P0.05)。與溶劑對(duì)照(NS+sham)組比較,單獨(dú)應(yīng)用SB203580后大鼠海馬CA1區(qū)GLT-1蛋白陽(yáng)性染色未見(jiàn)明顯改變。Western blot檢測(cè)結(jié)果與免疫組化結(jié)果顯示相似的趨勢(shì),無(wú)論是正常大鼠還是全腦缺血大鼠,給予舒巴坦后均可引起海馬CA1區(qū)GLT-1蛋白表達(dá)的上調(diào)(P0.05),而應(yīng)用SB203580后,均可使舒巴坦引起的海馬CA1區(qū)GLT-1的表達(dá)上調(diào)明顯減少(P0.05)。上述結(jié)果表明,無(wú)論是正常大鼠還是腦缺血大鼠,應(yīng)用SB203580抑制了p38 MAPK通路活性后,均顯著抑制了舒巴坦介導(dǎo)的海馬CA1區(qū)GLT-1表達(dá)的上調(diào),提示p38 MAPK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路參與舒巴坦介導(dǎo)的GLT-1蛋白表達(dá)上調(diào)。第三部分抑制p38 MAPK信號(hào)通路對(duì)舒巴坦抗大鼠腦缺血作用的影響目的:本研究中第一、二部分實(shí)驗(yàn)結(jié)果證實(shí),p38 MAPK參與了舒巴坦介導(dǎo)的大鼠海馬CA1區(qū)GLT-1的表達(dá)上調(diào)。在此基礎(chǔ)上,本部分實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步觀察應(yīng)用p38 MAPK通路的特異性抑制劑(SB203580)抑制p38MAPK的功能后,對(duì)舒巴坦抗大鼠腦缺血作用的影響,進(jìn)一步證明舒巴坦通過(guò)p38 MAPK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路介導(dǎo)GLT-1表達(dá)上調(diào)而發(fā)揮抗缺血性神經(jīng)元損傷作用。方法:健康雄性Wistar大鼠25只,側(cè)腦室預(yù)置給藥套管后,隨機(jī)分為以下五組,每組n=5:1 Sham組:首先側(cè)腦室注射NS 10μl,2d后行全腦缺血的sham手術(shù);2全腦缺血組:首先側(cè)腦室注射NS 10μl,2d后行8min全腦缺血;3舒巴坦+全腦缺血組:首先給大鼠側(cè)腦室注射舒巴坦溶液(360 nmol,10μl),2d后進(jìn)行8 min全腦缺血。4 SB203580+舒巴坦+全腦缺血組:首先給大鼠側(cè)腦室注射SB203580溶液(5 nmol,10μl),30分鐘后給予舒巴坦(360 nmol,10μl)側(cè)腦室注射,2d后行全腦缺血,方法同舒巴坦+腦缺血組;5 SB203580+sham組:首先給大鼠側(cè)腦室注射SB203580(5 nmol,10μl),30min后按照sham組的方法,注射NS及行腦缺血sham手術(shù)。全腦缺血sham手術(shù)或全腦缺血再灌注后7 d斷頭處死動(dòng)物,分離雙側(cè)海馬,4%多聚甲醛固定,常規(guī)石蠟包埋切片,硫堇染色,通過(guò)分析比較大鼠海馬CA1區(qū)神經(jīng)元的組織學(xué)分級(jí)(histological grading,HG)和神經(jīng)元密度(neuronal density,ND),確定不同條件下神經(jīng)元遲發(fā)型死亡情況,評(píng)價(jià)舒巴坦的抗缺血性神經(jīng)元損傷作用。結(jié)果:sham組大鼠海馬CA1區(qū)神經(jīng)元約為3-4層,整齊、致密排布,可見(jiàn)清晰、完整的細(xì)胞輪廓,胞內(nèi)可見(jiàn)大量尼氏體著色,細(xì)胞核充實(shí)飽滿,核仁清晰可見(jiàn)。HG為0-Ⅰ級(jí),ND為198.6±7.89(cells/mm,下同)。給予8 min全腦缺血,引起了海馬CA1區(qū)明顯的神經(jīng)元損傷,鏡下可以看到大片錐體神經(jīng)元破壞、死亡,細(xì)胞排列疏松、紊亂,散在大量細(xì)胞碎片,殘存的細(xì)胞收縮,呈不規(guī)則狀,核濃染,核仁消失;與sham組相比較,HG(Ⅱ-Ⅲ級(jí))明顯升高(p0.01),ND(51.8±7.40)明顯減低(p0.01)。舒巴坦+缺血組僅有散在細(xì)胞死亡,大部分細(xì)胞可見(jiàn)清晰、完整的細(xì)胞輪廓,整齊排列,層次清晰;與全腦缺血組相比較,HG(Ⅰ-Ⅱ級(jí))明顯減低(p0.05),ND明顯升高(p0.05),為188.6±12.76。這些結(jié)果表明,舒巴坦可發(fā)揮神經(jīng)細(xì)胞保護(hù)作用,使神經(jīng)細(xì)胞對(duì)缺血打擊的耐受性增強(qiáng)。預(yù)先給予SB203580(SB203580+舒巴坦+缺血組)阻斷了舒巴坦介導(dǎo)的這種神經(jīng)保護(hù)作用,鏡下可見(jiàn)海馬CA1區(qū)分布著大量死亡的神經(jīng)細(xì)胞碎片及不規(guī)則形狀的殘存細(xì)胞,細(xì)胞核深染,核仁消失;與舒巴坦+缺血組相比,HG明顯增高(Ⅱ-Ⅲ級(jí))(P0.05),ND明顯減低52.2±6.61(P0.05)。單獨(dú)應(yīng)用SB203580(SB203580+sham組)未造成大鼠海馬CA1區(qū)的神經(jīng)元的明顯改變,與sham組相比,其HG(0-Ⅰ)和ND(200.2±6.38)沒(méi)有明顯的改變(P0.05)。上述結(jié)果提示,舒巴坦預(yù)處理在缺血再灌注過(guò)程中有效發(fā)揮神經(jīng)細(xì)胞保護(hù)作用,p38 MAPK通路特異性抑制劑SB203580可以阻斷舒巴坦介導(dǎo)的這種保護(hù)作用。結(jié)論:1舒巴坦預(yù)處理可以上調(diào)正常和全腦缺血大鼠海馬CA1區(qū)p-p38MAPK和GLT-1蛋白的表達(dá),且GLT-1的表達(dá)上調(diào)遲于p-p38 MAPK的表達(dá)上調(diào)。2應(yīng)用SB203580抑制p38 MAPK信號(hào)通路阻斷了舒巴坦引起的大鼠海馬CA1區(qū)GLT-1蛋白上調(diào)。3應(yīng)用SB203580抑制p38 MAPK信號(hào)通路阻斷了舒巴坦誘導(dǎo)的海馬錐體神經(jīng)元的缺血耐受。4以上表明,舒巴坦預(yù)處理可通過(guò)p38 MAPK通路介導(dǎo)GLT-1表達(dá)上調(diào)參與誘導(dǎo)大鼠腦缺血耐受。
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R743.3

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本文編號(hào)：1255415