本文關(guān)鍵詞：水飛薊殼中水飛薊素分離純化及其功能性的研究

  更多相關(guān)文章： 水飛薊 水飛薊素 提取 分離純化 生物活性

【摘要】：水飛薊屬于菊科植物,在水飛薊的植株以及種子中含有一種天然黃酮類化合物,其中在種子中含量最高。近些年,在實(shí)驗(yàn)室中對(duì)水飛薊素的研究主要在于研究水飛薊素的主要單體化合物水飛薊賓的分離純化以及生理活性,但是對(duì)于其他單體化合物特別是如水飛薊亭,水飛薊寧等研究比較少,同時(shí),在近些年的研究中水飛薊素的提取工藝常用溶劑提取法,提取需要溶劑多,成本非常高,同時(shí)對(duì)環(huán)境的污染大,并且對(duì)于水飛薊素的生理功能研究主要集中以水飛薊素的對(duì)于肝臟系統(tǒng)的保護(hù)功能為研究熱點(diǎn),對(duì)其他功能活性研究非常少。以上的這些問(wèn)題都在工藝技術(shù)以及生理活性的研究上阻礙了水飛薊素的發(fā)展,所以,在水飛薊素研究方面建立方便快捷的提取方式和分離純化方式,以及完善在其他生理活性方面的研究具有非常重要的實(shí)際意義。主要結(jié)論如下：1、對(duì)水飛薊殼中的水飛薊素進(jìn)行酶法輔助提取,水飛薊素最佳提取條件,應(yīng)用纖維素酶法輔助提取水飛薊殼中水飛薊素,酶濃度為30U/mL、酶解溫度為45℃、酶解時(shí)間為12Omin、pH值為4.5,滅酶后,回流提取1h,水飛薊素提取率為7.86%,比相同時(shí)間內(nèi)傳統(tǒng)溶劑提取法提取率提高了74.67%。2、應(yīng)用HPD-600型大孔吸附樹脂和200-400目硅膠分離純化水飛薊素中的主要單體化合物,分別用70%乙醇溶液和石油醚-丙酮溶液洗脫,用紅外光譜、液相色譜-質(zhì)譜串聯(lián)技術(shù)(LC-MS)和核磁共振譜鑒定水飛薊素單體的結(jié)構(gòu),結(jié)果如下：石油醚-丙酮2：1部分洗脫出1個(gè)黃酮類化合物,經(jīng)鑒定為花旗松素,從石油醚-丙酮1：1部分洗脫出1個(gè)黃酮類化合物,經(jīng)鑒定為水飛薊寧,石油醚-丙酮1：2部分洗脫出3個(gè)黃酮類化合物,經(jīng)鑒別分別是水飛薊賓和水飛薊亭。3、水飛薊素在體內(nèi)和體外的抗氧化活性進(jìn)行研究,再體外抗氧化試驗(yàn)結(jié)果中表示,在超氧陰離子自由基清除率、羥基自由基清除率等不同的清除自由基實(shí)驗(yàn)中,水飛薊亭與水飛薊寧的清除自由基活性都是最高的,水飛薊賓的抗氧化活性相比下比較低。在體內(nèi)抗氧化試驗(yàn)過(guò)程中,水飛薊素各劑量的血清T-SOD、肝臟T-SOD、血清T-AOC、肝臟T-AOC、血清CAT活性、肝臟CAT活性、血清GSH-Px口肝臟GSH-Px含量逐漸上升,而血清MDA和肝臟MDA含量隨著試驗(yàn)周期的變化逐漸下降,試驗(yàn)結(jié)果顯示：各個(gè)劑量的水飛薊素可提高抗氧化酶類在血清和肝臟中的含量和活性,通過(guò)減少過(guò)氧化物在生成來(lái)提高抗氧化活性。4、水飛薊素免疫調(diào)節(jié)活性研究,試驗(yàn)結(jié)束時(shí),各劑量組的肝臟ACP活性、血清ACP活性、溶菌酶活性、一氧化氮含量、脾指數(shù)、攤廓清指數(shù)、吞噬指數(shù)和胸腺指數(shù)隨著試驗(yàn)周期的延長(zhǎng)逐漸升高,且呈劑量依賴型增長(zhǎng)。試驗(yàn)結(jié)果表明：水飛薊素高劑量組能提高脾指數(shù)和胸腺指數(shù)、血液ACP活性、肝臟的ACP活性以及溶菌酶的含量,從而增強(qiáng)吞噬細(xì)胞對(duì)其他物質(zhì)的吞噬和吸收的能力,而且水飛薊素高劑量組能顯著提高小鼠的碳廓清指數(shù)(K)和吞噬系數(shù)(Q),所以,水飛薊素高劑量組能夠增強(qiáng)生物機(jī)體的非特異性免疫機(jī)能；水飛薊素高劑量組能夠提高血液中一氧化氮的含量,表明水飛薊素可通過(guò)活化巨噬細(xì)胞進(jìn)行免疫活動(dòng)。5、水飛薊素抗疲勞活性研究,試驗(yàn)結(jié)束時(shí),與對(duì)照組相比,各劑量組小鼠實(shí)驗(yàn)體重和各器官重量無(wú)顯著性差異(P0.05),在抗疲勞試驗(yàn)過(guò)程中,各劑量組水飛薊素小鼠的爬桿時(shí)間、力竭游泳時(shí)間、肝糖原和肌糖原含量逐漸升高,而血乳酸BLA和血清尿素氮BUN含量逐漸減低,同時(shí),水飛薊素對(duì)小鼠肝臟(AST,ALT和白蛋白),膽管功能(ALP和總膽紅素),心臟健康量表(LDH),肌肉功能(CK),腎功能(肌酐和尿酸),營(yíng)養(yǎng)狀況(總蛋白),和血脂水平(TC和TG)沒(méi)有顯著的副作用。通過(guò)對(duì)以上分析,水飛薊素對(duì)小鼠的運(yùn)動(dòng)過(guò)程中的疲勞過(guò)程起到了十分有利的作用,抗疲勞損傷效果十分顯著,表明對(duì)于肌細(xì)胞長(zhǎng)時(shí)間的運(yùn)動(dòng)損傷具有保護(hù)作用,并且可以升高相關(guān)酶活性和運(yùn)動(dòng)小鼠骨骼肌內(nèi)的能量代謝,促進(jìn)細(xì)胞中的有氧代謝。并且以水飛薊素高劑量組產(chǎn)生的抗疲勞作用效果最好。運(yùn)動(dòng)前后的石蠟切片顯示,水飛薊素對(duì)于小鼠心肌和骨骼肌由于長(zhǎng)時(shí)間運(yùn)動(dòng)所導(dǎo)致的細(xì)微結(jié)構(gòu)的損傷具有減輕的作用。但是對(duì)于水飛薊素能夠緩解疲勞的機(jī)理還不是十分明確,需要進(jìn)行更加深入的研究。
【關(guān)鍵詞】：水飛薊 水飛薊素 提取 分離純化 生物活性
【學(xué)位授予單位】：沈陽(yáng)農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R284.2
【目錄】：

• 摘要13-15
• Abstract15-18
• 第一章 前言18-29
• 1.1 水飛薊概述18-20
• 1.1.1 水飛薊的植物形態(tài)18
• 1.1.2 水飛薊資源概況18
• 1.1.3 水飛薊的化學(xué)成分18-19
• 1.1.4 水飛薊素在種籽的分布19-20
• 1.2 國(guó)內(nèi)外研究現(xiàn)狀20
• 1.2.1 國(guó)外研究現(xiàn)狀20
• 1.2.2 國(guó)內(nèi)利用現(xiàn)狀20
• 1.3 植物有效成分的提取分離和分析20-22
• 1.3.1 提取分離的傳統(tǒng)方法21
• 1.3.2 提取分離的新技術(shù)21-22
• 1.4 植物有效成分分離純化方法22-24
• 1.4.1 柱層析法22-23
• 1.4.2 高速逆流色譜分離技術(shù)23-24
• 1.4.3 制備型高效液相色譜分離技術(shù)24
• 1.4.4 其它方法24
• 1.5 植物有效成分的結(jié)構(gòu)鑒定24-25
• 1.5.1 紅外光譜(IR)24
• 1.5.2 紫外光譜(UV)24-25
• 1.5.3 核磁共振譜(NMR)25
• 1.5.4 質(zhì)譜(MS)25
• 1.6 水飛薊有效成分的生物活性研究25-27
• 1.6.1 保肝作用25-26
• 1.6.2 抗腫瘤作用26
• 1.6.3 抗炎作用26
• 1.6.4 降血脂和抗動(dòng)脈硬化26
• 1.6.5 防治糖尿病、腎病26-27
• 1.6.6 防治心腦血管疾病27
• 1.6.7 保護(hù)心肌作用27
• 1.7 本課題的目的、意義及主要研究?jī)?nèi)容27-29
• 1.7.1 研究的目的和意義27-28
• 1.7.2 主要研究?jī)?nèi)容28-29
• 第二章 酶法輔助提取水飛薊素工藝研究29-41
• 2.1 試驗(yàn)材料與儀器29-30
• 2.1.1 材料與試劑29
• 2.1.2 主要儀器29-30
• 2.2 試驗(yàn)方法30-32
• 2.2.1 水飛薊素的制備30
• 2.2.2 水飛薊素提取率的測(cè)定30
• 2.2.3 水飛薊素提取率的計(jì)算30-31
• 2.2.4 酶法輔助提取水飛薊素單因素試驗(yàn)31-32
• 2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析32-39
• 2.3.1 單因素試驗(yàn)分析32-34
• 2.3.2 響應(yīng)面優(yōu)化實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析34-37
• 2.3.3 酶法輔助提取電鏡掃描37-39
• 2.4 討論39-40
• 2.5 本章小結(jié)40-41
• 第三章 水飛薊素的分離純化研究41-56
• 3.1 試驗(yàn)材料與儀器41-42
• 3.1.1 材料與試劑41
• 3.1.2 主要儀器41-42
• 3.2 試驗(yàn)方法42-46
• 3.2.1 水飛薊素樣品溶液的制備42
• 3.2.2 樹脂的選擇42
• 3.2.3 不同型號(hào)大孔樹脂的預(yù)處理與裝柱42-43
• 3.2.4 大孔樹脂的篩選43
• 3.2.5 大孔樹脂柱吸附分離水飛薊素條件優(yōu)化43-45
• 3.2.6 硅膠柱層析分離水飛薊素45-46
• 3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析46-53
• 3.3.1 不同型號(hào)大孔樹脂的靜態(tài)吸附和解吸性能46-47
• 3.3.2 不同型號(hào)樹脂對(duì)水飛薊素的靜態(tài)吸附動(dòng)力學(xué)47
• 3.3.3 不同型號(hào)大孔樹脂對(duì)水飛薊素的靜態(tài)解吸附動(dòng)力學(xué)47-48
• 3.3.4 HPD-600大孔樹脂柱吸附分離水飛薊素的條件優(yōu)化48-51
• 3.3.5 硅膠柱層析分離水飛薊素試驗(yàn)結(jié)果51-53
• 3.4 討論53-54
• 3.5 結(jié)論54-56
• 第四章 水飛薊素單體化合物的結(jié)構(gòu)鑒定56-66
• 4.1 材料與方法56
• 4.1.1 材料與試劑56
• 4.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器56
• 4.2 試驗(yàn)方法56-57
• 4.2.1 顏色反應(yīng)定性研究水飛薊素56-57
• 4.2.2 水飛薊素單體化合物紅外光譜測(cè)定57
• 4.2.3 水飛薊素單體化合物質(zhì)譜測(cè)定57
• 4.2.4 水飛薊素單體化合物核磁共振波譜測(cè)定57
• 4.3 結(jié)果與分析57-64
• 4.3.1 顏色反應(yīng)57-58
• 4.3.2 化合物Ⅰ的結(jié)構(gòu)鑒定58-59
• 4.3.3 化合物Ⅱ的結(jié)構(gòu)鑒定59-60
• 4.3.4 化合物Ⅲ的結(jié)構(gòu)鑒定60-62
• 4.3.5 化合物Ⅳ的結(jié)構(gòu)鑒定62-64
• 4.4 討論64
• 4.5 本章小結(jié)64-66
• 第五章 水飛薊素抗氧化活性的研究66-80
• 5.1 試驗(yàn)材料和方法66-67
• 5.1.1 試驗(yàn)材料66
• 5.1.2 試驗(yàn)儀器66-67
• 5.2 體外抗氧化試驗(yàn)方法67-68
• 5.2.1 總抗氧化能力的測(cè)定67
• 5.2.2 清除DPPH自由基能力的測(cè)定67
• 5.2.3 對(duì)超氧負(fù)離子(O_2~-)的清除作用67-68
• 5.2.4 清除·OH的測(cè)定方法68
• 5.3 體內(nèi)抗氧化試驗(yàn)方法68-69
• 5.3.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì)與試驗(yàn)方案68
• 5.3.2 檢測(cè)指標(biāo)及方法68
• 5.3.3 數(shù)據(jù)處理68-69
• 5.4 試驗(yàn)結(jié)果和分析69-77
• 5.4.1 水飛薊素體外抗氧化活性69-71
• 5.4.2 水飛薊素體內(nèi)抗氧化活性71-77
• 5.5 討論77-79
• 5.6 本章小結(jié)79-80
• 第六章 水飛薊素免疫調(diào)節(jié)功能性的研究80-88
• 6.1 試驗(yàn)材料和方法80-81
• 6.1.1 試驗(yàn)材料80
• 6.1.2 試驗(yàn)儀器80
• 6.1.3 試驗(yàn)方法80-81
• 6.1.4 對(duì)免疫器官指數(shù)的影響81
• 6.1.5 水飛薊素對(duì)非特異性免疫機(jī)能的影響81
• 6.1.6 數(shù)據(jù)處理81
• 6.2 試驗(yàn)結(jié)果和分析81-86
• 6.2.1 水飛薊素對(duì)免疫器官指數(shù)的影響81-82
• 6.2.2 水飛薊素對(duì)血清和肝組織ACP活性的影響82-84
• 6.2.3 水飛薊素對(duì)巨噬細(xì)胞吞噬功能的影響84-85
• 6.2.4 水飛薊素對(duì)血清中溶菌酶含量的影響85
• 6.2.5 水飛薊素對(duì)外周血淋巴細(xì)胞一氧化氮(nitric oxide,NO)含量的影響85-86
• 6.3 討論86-87
• 6.4 本章小結(jié)87-88
• 第七章 水飛薊素抗疲勞活性研究88-102
• 7.1 實(shí)驗(yàn)材料與儀器88-90
• 7.1.1 材料與試劑88-89
• 7.1.2 試驗(yàn)儀器89
• 7.1.3 試驗(yàn)方法89
• 7.1.4 動(dòng)物爬竿實(shí)驗(yàn)89
• 7.1.5 負(fù)重游泳實(shí)驗(yàn)及力竭游泳時(shí)間的測(cè)定89-90
• 7.1.6 檢測(cè)指標(biāo)及方法90
• 7.1.7 數(shù)據(jù)分析90
• 7.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析90-100
• 7.2.1 水飛薊素對(duì)小鼠體重的影響90
• 7.2.2 水飛薊素對(duì)小鼠爬竿時(shí)間的影響90-91
• 7.2.3 水飛薊素對(duì)小鼠負(fù)重游泳時(shí)間的影響91
• 7.2.4 水飛薊素對(duì)小鼠血清尿素氮(BUN)和血乳酸(BLA)的影響91-92
• 7.2.5 水飛薊素對(duì)小鼠肝糖原(LG)和肌糖原(MG)的影響92-94
• 7.2.6 水飛薊素對(duì)運(yùn)動(dòng)后氨、血糖和血漿肌酸激酶水平的影響94-96
• 7.2.7 水飛薊素對(duì)臨床生化指標(biāo)的影響96-97
• 7.2.8 在耐力運(yùn)動(dòng)中水飛薊素的保護(hù)作用97-100
• 7.3 討論100-101
• 7.4 本章小結(jié)101-102
• 第八章 結(jié)論102-105
• 參考文獻(xiàn)105-114
• 附錄114-122
• 致謝122-123
• 攻讀博士期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文123-124

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前6條

1 方艷夕;朱金坤;;杭菊中黃酮苷的提取與分離[J];安徽科技學(xué)院學(xué)報(bào);2006年02期

2 劉篤寬;水飛薊的藥理與臨床研究概況(綜述)[J];陜西中醫(yī);1984年04期

3 陳勇,甄漢深,董藝;廣山楂及其葉質(zhì)量分析研究[J];時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥;1999年07期

4 鄭冬梅,陳麗,陳青,白秀燕;水飛薊素對(duì)糖尿病大鼠周圍神經(jīng)病變的影響[J];中國(guó)糖尿病雜志;2003年06期

5 黃雄,李萍,張重義,李會(huì)軍;HPLC同時(shí)分析金銀花中綠原酸和黃酮類成分的方法建立及其應(yīng)用[J];中國(guó)藥學(xué)雜志;2005年10期

6 趙東保,楊玉霞,張衛(wèi),劉繡華,汪漢卿;黑沙蒿黃酮類化學(xué)成分研究[J];中國(guó)中藥雜志;2005年18期

，

本文編號(hào)：1121485