本文關(guān)鍵詞：睪丸孤核受體4在肝細(xì)胞性肝癌生長(zhǎng)及侵襲轉(zhuǎn)移中的作用

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【摘要】：第一部分TR4在肝細(xì)胞性肝癌及其癌旁組織中的表達(dá)目的觀察睪丸孤核受體4(TR4)在肝癌組織及癌旁肝組織中的分布,初步探討TR4在肝細(xì)胞性肝癌發(fā)生中的作用。方法采用免疫組織化學(xué)的方法,檢測(cè)71例臨床肝細(xì)胞性肝癌及其癌旁肝組織標(biāo)本,研究TR4在肝癌及癌旁肝組織細(xì)胞中的分布情況,同時(shí)比較兩者TR4分布的差異。結(jié)果在肝癌組織細(xì)胞漿中,TR4主要呈弱陽(yáng)性表達(dá),占總病例數(shù)的64.8%,其次為中等陽(yáng)性表達(dá),占總病例數(shù)的35.2%；在肝臟組織細(xì)胞漿中,TR4絕大多數(shù)呈現(xiàn)強(qiáng)陽(yáng)性及中等陽(yáng)性表達(dá),分別占總病例數(shù)的49.2%和42.3%,其次為弱陽(yáng)性表達(dá),占總病例數(shù)的8.5%,兩組之間存在顯著性差異(P0.01)。在肝癌組織細(xì)胞核中,TR4陽(yáng)性表達(dá)占絕大多數(shù)(包括弱陽(yáng)性占52.1%、中等陽(yáng)性占14.1%、強(qiáng)陽(yáng)性7.0%),陰性表達(dá)者僅占總病例數(shù)的26.8%；而在肝臟組織細(xì)胞核中,TR4主要為陰性表達(dá),占總病例數(shù)的73.2%,其次為弱陽(yáng)性表達(dá),占總病例數(shù)的26.8%,兩組之間存在顯著性差異(P0.01)。結(jié)論TR4在肝癌組織及肝旁肝組織中存在差異表達(dá),提示TR4在肝癌的發(fā)生過程中可能起某種調(diào)控作用。第二部分TR4對(duì)肝細(xì)胞性肝癌增殖能力的影響目的研究TR4對(duì)肝細(xì)胞性肝癌增殖能力的影響。方法運(yùn)用慢病毒載體系統(tǒng),在肝癌細(xì)胞系HCC-LM3及Huh7中構(gòu)建TR4敲減及過表達(dá)穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系。通過MTS法細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn),分別檢測(cè)TR4敲減以及TR4過表達(dá)對(duì)細(xì)胞增殖能力的影響。同時(shí),構(gòu)建裸鼠皮下成瘤模型,在動(dòng)物體內(nèi)研究HCC-LM3細(xì)胞在TR4敲減及過表達(dá)時(shí)對(duì)腫瘤增殖能力的影響。結(jié)果運(yùn)用慢病毒載體系統(tǒng),成功在HCC-LM3及Huh7細(xì)胞中構(gòu)建了TR4敲減及過表達(dá)穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系,并通過Real-time PCR和Western Blot方法進(jìn)行驗(yàn)證。MTS法細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)顯示,TR4敲減或過表達(dá)后對(duì)HCC-LM3及Huh7細(xì)胞的增殖能力均無(wú)影響。在裸鼠皮下成瘤模型中,將TR4敲減或過表達(dá)的HCC-LM3細(xì)胞與其對(duì)照組細(xì)胞接種到裸鼠皮下,觀察42天后,實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組裸鼠均成瘤,TR4敲減或過表達(dá)時(shí)裸鼠皮下腫瘤的體積與重量與其對(duì)照組相比均無(wú)明顯差異。結(jié)論TR4對(duì)肝細(xì)胞性肝癌的增殖能力沒有影響。第三部分TR4對(duì)肝細(xì)胞性肝癌侵襲轉(zhuǎn)移能力的影響目的研究TR4對(duì)肝細(xì)胞性肝癌侵襲轉(zhuǎn)移能力的影響。方法運(yùn)用慢病毒載體系統(tǒng),在肝癌細(xì)胞系HCC-LM3及Huh7中構(gòu)建TR4敲減以及TR4過表達(dá)穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系。通過細(xì)胞遷移及細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn),分別檢測(cè)TR4敲減或過表達(dá)對(duì)細(xì)胞遷移/侵襲能力的影響。同時(shí),構(gòu)建熒光素酶標(biāo)記的TR4敲減人肝癌細(xì)胞系LM3-luc-shTR4及其對(duì)照組細(xì)胞系LM3-luc-scr,通過外科手術(shù)的方式將上述兩組細(xì)胞分別接種到3只裸鼠肝臟中,通過小動(dòng)物活體成像系統(tǒng)檢測(cè)腫瘤生長(zhǎng)及轉(zhuǎn)移情況,在動(dòng)物體內(nèi)研究TR4對(duì)肝癌侵襲轉(zhuǎn)移能力的影響。結(jié)果運(yùn)用慢病毒載體系統(tǒng),成功在HCC-LM3及Huh7細(xì)胞中構(gòu)建了TR4敲減及過表達(dá)穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系,并通過Real-time PCR和Western Blot方法進(jìn)行驗(yàn)證。細(xì)胞遷移及細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)顯示,TR4敲減后可促進(jìn)HCC-LM3及Huh7的遷移及侵襲能力,而TR4過表達(dá)后HCC-LM3及Huh7的遷移及侵襲能力受到抑制。將熒光素酶標(biāo)記的TR4敲減人肝癌細(xì)胞系LM3-luc-shTR4及其對(duì)照組細(xì)胞系LM3-luc-scr通過外科手術(shù)的方式原位種植到裸鼠肝臟中,在術(shù)后第42天觀察到兩組中的所有裸鼠均發(fā)生肝內(nèi)成瘤,LM3-luc-shTR4組3只裸鼠中有2只發(fā)現(xiàn)腫瘤轉(zhuǎn)移,而LM3-luc-scr組3只裸鼠均未觀察到腫瘤轉(zhuǎn)移。結(jié)論TR4可抑制肝細(xì)胞性肝癌的侵襲轉(zhuǎn)移能力。
【關(guān)鍵詞】：肝細(xì)胞性肝癌 睪丸孤核受體4 增殖 侵襲 轉(zhuǎn)移
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R735.7
【目錄】：

• 致謝5-6
• 中文摘要6-9
• Abstract9-13
• 中英文縮寫詞對(duì)照表13-17
• 前言17-21
• 第一部分 TR4在肝細(xì)胞性肝癌及其癌旁組織中的表達(dá)21-31
• 1 材料與方法21-25
• 2 結(jié)果25-29
• 3 討論29-31
• 第二部分 TR4對(duì)肝細(xì)胞性肝癌增殖能力的影響31-57
• 1 材料與方法31-45
• 2 結(jié)果45-54
• 3 討論54-57
• 第三部分 TR4對(duì)肝細(xì)胞性肝癌侵襲轉(zhuǎn)移能力的影響57-88
• 1 材料與方法57-73
• 2 結(jié)果73-85
• 3 討論85-88
• 全文總結(jié)88-89
• 參考文獻(xiàn)89-97
• 綜述97-125
• 參考文獻(xiàn)117-125
• 作者簡(jiǎn)歷125

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本文編號(hào)：1118548