本文關(guān)鍵詞：以CD146為靶點的胃癌早期診斷多功能納米探針的相關(guān)研究

  更多相關(guān)文章： 核磁共振成像 近紅外成像 胃癌 四氧化三鐵磁顆粒 單克隆抗體

【摘要】：研究證明,膜蛋白CD146可以作為胃癌的早期診斷標志物。早在2012年,在美國PNAS雜志一篇名為“CD146,三陰乳腺癌上皮-基質(zhì)轉(zhuǎn)化的啟動因子”對CD146蛋白的研究推向了另一個高峰。這篇論文指出,CD146啟動了上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(Epithelial-Mesenchymal Transition,EMT)機制,加速了腫瘤的轉(zhuǎn)移形成,是一新的診斷以EMT轉(zhuǎn)移機制為基礎的惡性腫瘤的標志物。但是這篇文章中涉及的抗CD146單克隆抗體不能直接識別三陰乳腺癌的腫瘤細胞株MB-231,只能識別外在轉(zhuǎn)入質(zhì)粒后表達CD146的陰性細胞株MCF-7。這樣的抗體是很難識別活體內(nèi)腫瘤天然表達的CD146,更難以達到對活體腫瘤的早期診斷。因此我們設想以真核表達的CD146蛋白為抗原,免疫小鼠獲得抗CD146單克隆抗體,以磁性納米材料為載體,研發(fā)具有自主知識產(chǎn)權(quán)的能識別活體腫瘤的靶向探針,實現(xiàn)惡性腫瘤的早期診斷與靶向治療。主要的研究內(nèi)容和結(jié)果:1.以真核CD146蛋白免疫小鼠獲得高效抗CD146單克隆抗體;我們通過購買的真核CD146蛋白免疫小鼠,并以此作為篩選源,完成四次clone化和Elisa體外篩選實驗后獲得五株抗CD146單克隆抗體,經(jīng)過FACS,confocal等一些列體外鑒定實驗,確定第五株為靶向性最好的一株,并命名為YY146。2.磁性納米材料的制備與鑒定;采用微乳液法,在表面活性劑NP-5與環(huán)己烷的體系中加入10-15nm的四氧化三鐵超順磁納米顆粒,再體系中加入30%氨水,使體系呈弱堿性,再往體系中引入正硅酸乙酯TEOS以形成二氧化硅包裹的四氧化三鐵超順磁顆粒,接著構(gòu)建具有靶向CD146特性的磁性二氧化硅納米顆粒,并體外通過激光共聚焦顯微鏡觀察、流式細胞術(shù)等方法檢測分子探針的活性、特異性,為下一步分析該分子探針在MR/NIR活體成像的研究奠定基礎。3.靶向CD146磁性納米顆粒的體外初步研究;經(jīng)過流式細胞術(shù)、免疫熒光檢測,透射顯微鏡掃描等技術(shù)檢測證實所構(gòu)建的分子探針可特異地與腫瘤細胞CD146抗原相結(jié)合,并保持良好的生物學活性;4.靶向CD146磁性納米顆粒的活體內(nèi)初步研究;體內(nèi)實驗研究證實在裸鼠尾靜脈注射探針4h后的MR掃描可以顯著降低腫瘤組織在T2W1的信號,近紅外顯影與6小時后能靶向顯影腫瘤,說明構(gòu)建的探針在體內(nèi)實驗中獲得不錯的靶向性,有望其作為一種新的分子影像學診斷技術(shù)應用于臨床進行腫瘤早期或轉(zhuǎn)移的診斷。結(jié)論:本研究構(gòu)建的分子探針技術(shù)上操作簡便,更重要的是具有較好的免疫活性,可以顯著的降低以胃癌CD146為靶點的信號,大大提高了MR/NIR成像的敏感性,如果能進一步對探針進行分子修飾,以降低其在網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)的吞噬,則有望成為一種腫瘤分子影像診斷的良好的分子探針。
【關(guān)鍵詞】：核磁共振成像 近紅外成像 胃癌 四氧化三鐵磁顆粒 單克隆抗體
【學位授予單位】：第三軍醫(yī)大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R735.2
【目錄】：

• 英文縮寫索引5-8
• 英文摘要8-11
• 中文摘要11-13
• 第一章 前言13-16
• 第二章 靶向CD146磁性二氧化硅納米顆粒分子探針的構(gòu)建16-49
• 2.1 鼠抗人CD146單克隆抗體的制備、鑒定和篩選18-35
• 2.1.1 實驗材料18-23
• 2.1.2 實驗方法23-29
• 2.1.3 實驗結(jié)果29-35
• 2.2 納米磁性二氧化硅的構(gòu)建及其活性、特異性的檢測35-42
• 2.2.1 實驗材料36-37
• 2.2.2 實驗方法37-39
• 2.2.3 結(jié)果39-42
• 2.3 討論42-44
• 參考文獻44-49
• 第三章 磁性二氧化硅納米微粒分子探針體外MR/NIR成像實驗研究49-66
• 3.1 磁性二氧化硅納米顆粒分子探針體外細胞MR/NIR成像研究50-58
• 3.1.1 實驗材料50-52
• 3.1.2 實驗方法52-55
• 3.1.3 實驗結(jié)果55-58
• 3.2 磁性二氧化硅納米顆粒分子探針體內(nèi)動物模型MR/NIR成像研究58-63
• 3.2.1 實驗材料58-59
• 3.2.2 實驗方法59-61
• 3.2.3 實驗結(jié)果61-63
• 3.3 討論63-66
• 全文結(jié)論66-67
• 參考文獻67-80
• 文獻綜述一 近紅外分子成像在胃癌早期診斷中的研究進展80-94
• 參考文獻88-94
• 文獻綜述二 上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化在胃癌研究中的進展94-105
• 參考文獻101-105
• 博士期間發(fā)表論文105
• 博士期間發(fā)表專利105-106
• 致謝106

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 Chun-Hui Wei;Li-Xiu Wei;Ming-Yu Lai;Jia-Zhuang Chen;Xi-Jing Mo;;Effect of silencing of high mobility group A2 gene on gastric cancer MKN-45 cells[J];World Journal of Gastroenterology;2013年08期

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本文編號：1110146