本文關(guān)鍵詞：阿司匹林聯(lián)合雷公藤內(nèi)酯醇誘導宮頸癌細胞凋亡及其作用機制研究

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【摘要】：背景：宮頸癌(Cervical Cancer)是女性常見疾病,其發(fā)病率僅次于乳腺癌居婦科惡性腫瘤的第二位,嚴重威脅著女性生命健康。近年來,宮頸癌發(fā)病率呈不斷上升的趨勢,且越來越年輕化。宮頸癌的發(fā)病機制尚不明確,既往對宮頸癌的治療主要以手術(shù)、化療、放療和HPV疫苗等相關(guān)的生物治療為主,但都有其自身的局限性。因此,開發(fā)安全有效的抗腫瘤藥物已成為國內(nèi)外學者研究的主要方向。非甾體抗炎藥(NSAIDs)-阿司匹林(Aspirin)又名乙酰水楊酸(Acetylsalicylic acid,ASA),是一種環(huán)氧合酶抑制劑。長期以來,阿司匹林被廣泛應(yīng)用于解熱、鎮(zhèn)痛和消炎。隨著研究的深入,最近的研究已經(jīng)表明,阿司匹林可作為一種腫瘤治療和預防的藥物,并且可聯(lián)合順鉑等化療藥物提高抗腫瘤效果,為癌癥患者的治療和康復等過程提供了新的選擇。但是由于阿司匹林的抗腫瘤效率并不是特別高,所以診療上還存很大的風險。雷公藤內(nèi)酯醇(Triptolide,TPL)是從衛(wèi)矛科植物雷公藤Tripterygium wilfordii Hook.f.去皮根中提取精制的有效部位混合物,傳統(tǒng)的作用主要為抗炎、免疫抑制、抗生育等。現(xiàn)在已被證明,雷公藤內(nèi)酯醇可以抑制腫瘤的生長,且抗腫瘤效應(yīng)較高。但由于其本身存在一定的副作用,在應(yīng)用時需要謹慎考慮。如何減少雷公藤內(nèi)酯醇潛在的副作用影響并且真正應(yīng)用于臨床,這是一個亟待解決的問題。近年來,中藥與西藥聯(lián)合用于治療癌癥已經(jīng)逐漸成為一個熱門趨勢,由于非甾體抗炎藥阿司匹林和中藥衍生物雷公藤內(nèi)酯醇在宮頸癌的治療中具有相似的作用,因此,在過往研究的基礎(chǔ)上,本研究以宮頸癌細胞作為研究對象,分析和研究了中藥雷公藤和非甾體抗炎藥阿司匹林在宮頸癌侵襲和凋亡等惡性特征中的作用及其效率,并初步探討了其相關(guān)的機制,這將為宮頸癌的治療、防治提供新的策略。實驗目的：本實驗旨在探討非甾體消炎藥阿司匹林和中藥衍生物生物雷公藤內(nèi)酯醇聯(lián)合使用對宮頸癌的抗腫瘤作用以及效率,為宮頸癌的治療、防治提供新的策略。實驗方法：本研究首先采用MTT檢測法對不同濃度的阿司匹林(5-12.5μM)和雷公藤內(nèi)酯醇(50-125 nM)單獨或者聯(lián)合使用在影響宮頸癌細胞生存能力方面進行了評估；然后用流式細胞技術(shù)、線粒體膜電位分析法和細胞集落形成實驗對不同濃度的阿司匹林(5-12.5μM)和雷公藤內(nèi)酯醇(50-125 nM)單獨或者聯(lián)合使用在影響宮頸癌細胞凋亡方面進行分析,并且還分析了阿司匹林(10μm)與雷公藤內(nèi)酯醇(100 nM)單獨或聯(lián)合對宮頸癌細胞克隆集落形成的影響；最后采用qRT-PCR法和Western blot分析了阿司匹林(10μM)與雷公藤內(nèi)酯醇(100 nM)單獨或聯(lián)合對宮頸癌細胞的細胞周期相關(guān)因子細胞周期素E(Cyclin E)、p21和細胞凋亡相關(guān)因子Bcl-2、Bax表達的影響。實驗結(jié)果：本研究的結(jié)果顯示,MTT檢測發(fā)現(xiàn)阿司匹林(5-10μM)聯(lián)合雷公藤內(nèi)酯醇(50-100nm)的治療組相對于藥物單獨使用組,表現(xiàn)出明顯的協(xié)同抗增殖作用的(P0.01),并且呈濃度-時間依賴性。流式細胞技術(shù)檢測發(fā)現(xiàn)阿司匹林(10μM)和雷公藤內(nèi)酯醇(100 nM)聯(lián)合使用誘導宮頸癌細胞凋亡與兩者單獨使用相比,凋亡百分率顯著增加(P0.05)；此外,聯(lián)合治療組相對于單獨治療組,線粒體膜電位的CMXRos熒光強度顯著降低(P0.05)。細胞集落形成實驗發(fā)現(xiàn)阿司匹林(10μM)與雷公藤內(nèi)酯醇(100 nM)聯(lián)合治療組相對于單獨治療組相比,細胞單克隆數(shù)量明顯下降(P0.05)。qRT-PCR法檢測相關(guān)因子mRNA水平的表達發(fā)現(xiàn)阿司匹林(10μM)與雷公藤內(nèi)酯醇(100 nM)聯(lián)合治療組相對于單獨治療組,細胞周期相關(guān)因子Cyclin E和細胞凋亡相關(guān)因子Bcl-2表達下降更為明顯(P0.05),同時細胞周期相關(guān)因子p21和細胞凋亡相關(guān)因子Bax表達升高更為明顯(P0.05)；Western-blot法檢測也同樣發(fā)現(xiàn)聯(lián)合治療組相對于單獨治療組,Cyclin E和Bcl-2的表達下降更為明顯,同時p21和Bax的表達升高更為明顯。實驗結(jié)論：1)阿司匹林和雷公藤內(nèi)酯醇不僅在單獨用藥時對宮頸癌細胞生長有抗增殖作用,而且對宮頸癌細胞生長有協(xié)同抗增殖作用；2)阿司匹林聯(lián)合雷公藤內(nèi)酯醇誘導宮頸癌細胞凋亡的百分率與兩者單獨使用相比凋亡百分比顯著增加,同時又能誘導的宮頸癌細胞線粒體膜電位顯著下降(熒光強度)；3)阿司匹林聯(lián)合雷公藤內(nèi)酯醇能抑制宮頸癌細胞的集落形成能力；4)阿司匹林聯(lián)合雷公藤內(nèi)酯醇能影響宮頸癌細胞的細胞周期和凋亡相關(guān)因子的表達水平顯著變化。
【關(guān)鍵詞】：宮頸癌 阿司匹林 雷公藤 凋亡 作用機制
【學位授予單位】：山東大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R737.33
【目錄】：

• 中文摘要6-9
• ABSTRACT9-12
• 符號說明12-13
• 第一章 前言13-16
• 第二章 材料與方法16-28
• 第三章 結(jié)果28-30
• 第四章 討論30-35
• 第五章 結(jié)論35-36
• 第六章 附圖36-42
• 第七章 參考文獻42-49
• 綜述49-65
• 參考文獻58-65
• 致謝65-66
• 攻讀學位期間的研究成果66-67
• 學位論文評閱及答辯情況表67-68
• 附件68-79

【參考文獻】

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本文編號：1076709