本文關(guān)鍵詞：荔枝果肉酚類物質(zhì)分離純化、鑒定及降糖活性研究

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【摘要】：本論文以荔枝(Litchi chinensis Sonn.)為材料,研究了30個(gè)品種荔枝果實(shí)的基本品質(zhì)指標(biāo),分析了果肉總酚、總黃酮、總原花青素和抗氧化活性；對(duì)其酚類物質(zhì)進(jìn)行了分離純化和結(jié)構(gòu)鑒定；采用不同實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ驮u(píng)價(jià)了果肉提取物的降糖活性,并分析了果肉提取物中降糖的主效成分。主要結(jié)果如下：1、不同品種荔枝果實(shí)在單果重、果形指數(shù)、硬度、可溶性固形物含量、可滴定酸含量等方面存在顯著差異；果肉總酚、總黃酮、總原花青素含量以及抗氧化活性之間呈顯著正相關(guān)關(guān)系,發(fā)現(xiàn)‘褐毛荔’的總酚、總黃酮、總原花青素等含量顯著高于其他品種,且其表現(xiàn)出最強(qiáng)的DPPH和ABTS抗氧化活性。2、利用高效液相色譜(HPLC)和液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用(LC-MS)技術(shù),在主栽品種‘妃子笑’果肉提取物中鑒定了6種原花青素類物質(zhì)和7種黃酮糖苷類物質(zhì)；利用Sephadex LH-20凝膠樹脂層析和制備型HPLC技術(shù),從‘妃子笑’果肉提取物中分離純化了2種原花青素類物質(zhì)和6種黃酮糖苷類物質(zhì),利用核磁共振(NMR)技術(shù)對(duì)其結(jié)構(gòu)進(jìn)行確認(rèn),其中原花青素B2、山奈酚3-O-蕓香糖苷、異鼠李素3-O-蕓香糖苷、槲皮素3-O-蕓香糖-(1→2)-O-鼠李糖苷、山奈酚3-O-蕓香糖-(1→2)-O-鼠李糖苷和異鼠李素3-O-蕓香糖-(1→2)-O-鼠李糖苷為果肉中首次報(bào)道。異鼠李素3-O-蕓香糖苷、槲皮素3-O-蕓香糖-(1→2)-O-鼠李糖苷、山奈酚3-O-蕓香糖-(1→2)-O-鼠李糖苷和異鼠李素3-O-蕓香糖-(1→2)-O-鼠李糖苷為荔枝中首次報(bào)道。3、利用富含原花青素的‘褐毛荔’果肉提取物,本研究首次較為系統(tǒng)地研究了荔枝果肉原花青素的組成與含量。利用HPLC、高分辨電噴霧電離質(zhì)譜(HRESMS)和NMR技術(shù),在‘褐毛荔’果肉提取物中鑒定了32種原花青素,其中A型原花青素15種,B型原花青素17種,聚合度為2-6,其中低聚體("f3)的原花青素含量占原花青素總含量的84.93%。4、對(duì)荔枝果肉酚類物質(zhì)提取物的降糖活性進(jìn)行研究,結(jié)果表明：不同品種荔枝果肉提取物對(duì)a-葡萄糖苷酶抑制活性存在顯著差異,在終濃度為80μg/ml時(shí),‘鑒江紅糯’對(duì)α-葡萄糖苷酶的抑制率為97.98%,而‘仙婆果’僅為39.15%；槲皮素、山奈酚、異鼠李素等黃酮苷元具有顯著a-葡萄糖苷酶抑制活性,而其對(duì)應(yīng)的6種糖苷類化合物中只有槲皮素3-O-蕓香糖7-O-鼠李糖苷表現(xiàn)出較高的抑制活性(94.63%)。原花青素類物質(zhì)對(duì)α-葡萄糖苷酶抑制活性因其化學(xué)構(gòu)型不同而異,兒茶素的α-葡萄糖苷酶抑制活性要高于其同分異構(gòu)體表兒茶素,A型原花青素二聚體(A1、A2)的抑制活性要高于B型原花青素二聚體(B1、B2)。利用人肝癌HepG2細(xì)胞,研究發(fā)現(xiàn)不同品種果肉提取物促進(jìn)細(xì)胞葡萄糖消耗的活性差異較大,‘褐毛荔’和‘妃子笑’果肉提取物能顯著促進(jìn)葡萄糖消耗,而‘元紅’、‘糯米糍’和‘蘭竹’等3個(gè)品種果肉提取物并未表現(xiàn)出顯著活性。單體物質(zhì)中,表兒茶素可顯著促進(jìn)細(xì)胞葡萄糖消耗,而槲皮素3-O-蕓香糖-(1→2)-O-鼠李糖苷、槲皮素3-O-蕓香糖苷、異鼠李素3-O-蕓香糖-(1→2)-O-鼠李糖苷,山奈酚3-O-蕓香糖-(1→2)-O-鼠李糖苷等荔枝果肉主要黃酮糖苷類化合物均未表現(xiàn)出顯著促進(jìn)葡萄糖消耗作用。進(jìn)一步通過(guò)相關(guān)性分析表明,不同品種中表兒茶素等原花青素含量與其促進(jìn)葡萄糖消耗作用呈正相關(guān)關(guān)系,推測(cè)原花青素類物質(zhì)可能是荔枝果肉促進(jìn)細(xì)胞葡萄糖消耗的主效成分。利用KK-Ay糖尿病小鼠模型,分別用‘妃子笑’和‘褐毛荔’果肉提取物飼喂KK.Ay小鼠8周,發(fā)現(xiàn)‘妃子笑’和‘褐毛荔’果肉提取物均能顯著降低KK-Ay糖尿病小鼠的空腹血糖,提高小鼠的口服糖耐量(OGTT),改善其胰島素敏感性(ITT)。本試驗(yàn)結(jié)果表明,荔枝果肉富含酚類物質(zhì),主要為黃酮糖苷類物質(zhì)和原花青素類物質(zhì),品種間酚類物質(zhì)組成差異較大；不同品種果肉提取物對(duì)α-葡萄糖苷酶的抑制活性不同,黃酮糖苷類物質(zhì)中槲皮素3-O-蕓香糖-(1→2)-O-鼠李糖苷和原花青素類物質(zhì)中兒茶素、A型原花青素二聚體對(duì)α-葡萄糖苷酶具有較高的抑制活性；‘妃子笑’和‘褐毛荔’果肉提取物均能顯著促進(jìn)細(xì)胞葡萄糖消耗和降低KK-Ay糖尿病小鼠的空腹血糖,提高口服糖耐量和改善胰島素敏感性,值得深入研究。
【關(guān)鍵詞】：荔枝果肉 黃酮糖苷 原花青素 純化 鑒定 降糖活性
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R284;R285
【目錄】：

• 致謝6-8
• 摘要8-10
• Abstract10-13
• 縮略語(yǔ)表13-19
• 1 文獻(xiàn)綜述19-30
• 1.1 荔枝酚類物質(zhì)研究進(jìn)展20-26
• 1.1.1 黃酮糖苷類物質(zhì)21-22
• 1.1.2 原花青素類物質(zhì)22-25
• 1.1.3 其他生物活性物質(zhì)25-26
• 1.2 荔枝主要生物活性研究進(jìn)展26-29
• 1.2.1 抗氧化活性26-27
• 1.2.2 抗癌活性27-28
• 1.2.3 降脂活性28
• 1.2.4 抗炎活性28
• 1.2.5 其他生物活性28-29
• 1.3 研究目標(biāo)與研究?jī)?nèi)容29-30
• 2 荔枝果實(shí)基本生理指標(biāo)及品質(zhì)評(píng)價(jià)30-40
• 2.1 材料、儀器與試劑30-33
• 2.1.1 實(shí)驗(yàn)材料30-33
• 2.1.2 主要儀器與試劑33
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法33-34
• 2.2.1 單果重與橫縱經(jīng)測(cè)定33
• 2.2.2 硬度測(cè)定33
• 2.2.3 可溶性固形物(TSS)測(cè)定33
• 2.2.4 可滴定酸(TA)測(cè)定33
• 2.2.5 總酚、總黃酮、總原花青素測(cè)定33-34
• 2.2.6 抗氧化活性評(píng)價(jià)34
• 2.2.7 統(tǒng)計(jì)分析34
• 2.3 結(jié)果與分析34-38
• 2.3.1 荔枝果實(shí)基本生理指標(biāo)分析34-35
• 2.3.2 荔枝果肉粗提液總酚、總黃酮、總原花青素與抗氧化活性分析35-38
• 2.4 討論38-40
• 3 荔枝果肉黃酮糖苷類物質(zhì)分離純化與結(jié)構(gòu)鑒定40-59
• 3.1 材料、儀器與試劑40-41
• 3.1.1 實(shí)驗(yàn)材料40
• 3.1.2 主要儀器與試劑40-41
• 3.2 試驗(yàn)方法41-42
• 3.2.1 ‘妃子笑’果肉提取物制備41
• 3.2.2 ‘妃子笑’果肉黃酮糖苷類物質(zhì)的制備41-42
• 3.2.3 ‘妃子笑’果肉黃酮糖苷類物質(zhì)的鑒定42
• 3.3 結(jié)果與分析42-57
• 3.3.1 ‘妃子笑’果肉提取物鑒定42-47
• 3.3.2 ‘妃子笑’果肉黃酮糖苷類物質(zhì)的分離純化47-48
• 3.3.3 ‘妃子笑’果肉黃酮糖苷類物質(zhì)的結(jié)構(gòu)分析48-57
• 3.4 討論57-59
• 4 荔枝果肉原花青素類物質(zhì)的鑒定59-73
• 4.1 材料、儀器與試劑60
• 4.1.1 實(shí)驗(yàn)材料60
• 4.1.2 主要儀器與試劑60
• 4.2 試驗(yàn)方法60-62
• 4.2.1 ‘褐毛荔’果肉提取物制備60
• 4.2.2 ‘褐毛荔’果肉提取物成份的初步分離與物質(zhì)鑒定60-62
• 4.3 結(jié)果與分析62-72
• 4.3.1 ‘褐毛荔’荔枝果肉提取物ESI-MS分析62-63
• 4.3.2 ‘褐毛荔’荔枝果肉提取物~(13)C NMR分析63-65
• 4.3.3 ‘褐毛荔’荔枝果肉提取物HPLC與HRESIMS分析65-72
• 4.4 討論72-73
• 5 荔枝果肉酚類化合物降糖活性評(píng)價(jià)73-94
• 5.1 材料、儀器與試劑74
• 5.1.1 實(shí)驗(yàn)材料74
• 5.1.2 主要儀器與試劑74
• 5.2 試驗(yàn)方法74-77
• 5.2.1 荔枝果肉提取物的制備74
• 5.2.2 總酚、總黃酮、總原花青素和抗氧化活性測(cè)定74
• 5.2.3 黃酮糖苷類物質(zhì)和原花青素類物質(zhì)單體的制備74-75
• 5.2.4 α-葡萄糖苷酶抑制活性的測(cè)定75
• 5.2.5 葡萄糖消耗實(shí)驗(yàn)75-76
• 5.2.6 人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC)保護(hù)活性76
• 5.2.7 KK-A~y糖尿病小鼠的降糖作用76
• 5.2.8 統(tǒng)計(jì)分析76-77
• 5.3 結(jié)果與分析77-90
• 5.3.1 荔枝提取物酚類物質(zhì)含量與抗氧化活性77-79
• 5.3.2 荔枝果肉提取物以及主要酚類物質(zhì)單體的α-葡萄糖苷酶抑制活性79-82
• 5.3.3 荔枝果肉提取物及主要酚類物質(zhì)單體促進(jìn)HepG2細(xì)胞葡萄糖消耗活性82-87
• 5.3.4 荔枝果肉單體物質(zhì)促進(jìn)保護(hù)內(nèi)皮細(xì)胞的活性87
• 5.3.5 荔枝果肉提取物對(duì)KK-A~y糖尿病小鼠的降糖作用87-90
• 5.4 討論90-94
• 6 小結(jié)與展望94-95
• 6.1 小結(jié)94
• 6.2 展望94-95
• 參考文獻(xiàn)95-107
• 作者簡(jiǎn)歷及在學(xué)期間所取得的科研成果107-108

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本文編號(hào)：1060138