本文關(guān)鍵詞：IL6、TNFα和TNFR1在卵圓細(xì)胞增殖和炎癥誘發(fā)肝癌中作用和機(jī)制的研究

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【摘要】：第一部分 IL6和TNFR1介導(dǎo)的信號通路在DDB1F/F,Mx1-Cre+/-小鼠肝再生過程中的作用和機(jī)制的研究肝臟是一個具有強(qiáng)大再生能力的實(shí)質(zhì)性器官。雖然肝臟中的實(shí)質(zhì)性細(xì)胞肝細(xì)胞可重新進(jìn)入細(xì)胞周期介導(dǎo)肝再生。但在大多數(shù)病理?xiàng)l件下,肝細(xì)胞的復(fù)制能力受到損害不能滿足肝臟再生的需求。此時,一種被認(rèn)為來源于干細(xì)胞的肝臟祖細(xì)胞,又叫卵圓細(xì)胞,會被誘導(dǎo)并增殖分化成肝細(xì)胞和膽管細(xì)胞來彌補(bǔ)肝臟實(shí)質(zhì)的損失。卵圓細(xì)胞的活化和增殖受很多因子和信號通路的調(diào)控。以前的研究表明,細(xì)胞因子IL6,TNFa及其受體TNFR1都參與到卵圓細(xì)胞的活化增殖及其介導(dǎo)的肝再生過程中。但在不同的卵圓細(xì)胞誘導(dǎo)模型中得到的結(jié)果并不一致。在小鼠中激活卵圓細(xì)胞的傳統(tǒng)方法是使用化學(xué)藥物刺激,但有研究表明,這種方式存在很多缺陷,而且,最近研究顯示在這些模型中肝臟再生仍是通過肝細(xì)胞而非卵圓細(xì)胞實(shí)現(xiàn)的。在本課題中,我們使用DDB1F/F,Mx1-Cre+/-小鼠模型重新評估了IL6,TNFα和TNFR1在卵圓細(xì)胞活化增殖及其介導(dǎo)肝再生中的作用。結(jié)果顯示,DDB1F/F, Mx1-Cre+/-小鼠肝再生過程中IL6的水平會顯著上調(diào),IL6缺失顯著抑制DDB1F/F, Mx1-Cre+/-小鼠中卵圓細(xì)胞的活化增殖,并在poly(I:C)注射誘導(dǎo)DDB1敲除后4周和6周顯著減少了DDB1陽性肝細(xì)胞的再生。Q-PCR結(jié)果顯示IL6可能通過上調(diào)卵圓細(xì)胞激活因子TWEAK和HGF的表達(dá)促進(jìn)卵圓細(xì)胞的活化增殖。而TNFRl的缺失并不影響DDB1F/F,Mx1-Cre+/-小鼠中卵圓細(xì)胞的活化及其介導(dǎo)的肝再生。TXFR1的配體TNFa的表達(dá)量在DDB1F/F,Mx1-Cre+/-小鼠肝再生過程中也沒有明顯變化。所以,TNFα/TNFR1介導(dǎo)的信號通路在DDB1F/F,Mx1-Cre+/-小鼠中卵圓細(xì)胞增殖和肝再生過程中不起作用。第二部分IL6、TNFα和TNFR1在DDB1F/F,Alb-Cre+/-小鼠肝癌發(fā)生中作用和機(jī)制的研究肝細(xì)胞肝癌(Hepatocellular Carcinoma,HCC)是高發(fā)的惡性腫瘤之一。它是全是第二大致死性癌癥。據(jù)統(tǒng)計(jì),全球50%的肝癌病人分布于我國。因此,對肝癌發(fā)病機(jī)制及參與其發(fā)生發(fā)展的因子的研究具有十分重要的理論意義和臨床治療價值。肝癌的發(fā)生與炎癥高度相關(guān),約90%的人類肝癌在慢性肝炎中產(chǎn)生。而對炎癥反應(yīng)有重要調(diào)節(jié)作用的細(xì)胞因子,其在肝癌病人中的異常表達(dá)也經(jīng)常被觀察到。在這些細(xì)胞因子中,IL6和TNF α是最受關(guān)注和廣泛研究的。目前,IL6、TNFα和TNFR1在肝癌中的作用和機(jī)制在化學(xué)試劑誘導(dǎo)的小鼠肝癌模型中被系統(tǒng)的研究過。但肝癌發(fā)生在一個沒有肝內(nèi)炎癥的環(huán)境中是這類模型的一個主要缺陷,尤其是考慮到IL6、TNFα和TNFR1在炎癥和免疫中的重要作用。通過過表達(dá)或敲除某些基因,炎癥環(huán)境下自發(fā)形成肝癌的小鼠模型已經(jīng)被構(gòu)建出來,這類模型包括mdr2-/-小鼠,淋巴毒素α/β(lymphotoxinα/β,LTα/β)轉(zhuǎn)基因小鼠以及我們的DDB1F/F,Alb-Cre+/-小鼠。在本課題中,通過構(gòu)建雙敲除小鼠,我們分別研究了IL6、TNFα和TNFR1在DDB1F/F,Alb-Cre+/-小鼠中肝癌發(fā)生中的作用,并對機(jī)制進(jìn)行了一定的探討。結(jié)果表明,敲除IL6會加速DDB1F/F,Alb-Cre+/-小鼠中腫瘤的產(chǎn)生,與相同年齡的DDB1F/F,Alb-Cre+/-小鼠相比,更多的18個月大的DDB1F/F,Alb-Cre+/-,IL6-/-小鼠中出現(xiàn)肉眼可見的腫瘤。雖然在21個月大時,DDB1F/F, Alb-Cre+/-,IL6-/-小鼠和DDB1F/F,Alb-Cre+/-小鼠之間的腫瘤發(fā)生率沒有區(qū)別,但最大腫瘤的體積在DDB1F/F,Alb-Cre+/-,IL6-/-小鼠中顯著增加。進(jìn)一步分析表明,IL6對肝癌的的抑制與自然殺傷(Natural Killer,NK cells)細(xì)胞介導(dǎo)的腫瘤免疫有關(guān)。TNFR1的缺失顯著降低DDB1F/F,Alb-Cre+/-小鼠腫瘤發(fā)生率。細(xì)胞中的凋亡和代償性Ⅷ增殖,以及磷酸化的ERK(P-ERK)的水平在DDB1F/F,Alb-Cre+/-,TNFR1-/-小鼠中都顯著降低。但TNF a的缺失反而加快了DDB1F/F,Alb-Cre+/-小鼠中腫瘤的形成。這表明TNFR1介導(dǎo)的信號通路對DDB1F/F,Alb-Cre+/-小鼠中肝癌發(fā)生的促進(jìn)作用不依賴于TNFa。
【關(guān)鍵詞】：IL6 TNFR1 TNFα 卵圓細(xì)胞 肝再生 IL6 TNFR1 肝癌 炎癥 NK細(xì)胞
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R735.7
【目錄】：

• 致謝5-7
• 序言7-11
• 中文摘要11-14
• Abstract14-17
• 縮略詞表17-20
• 第一部分20-55
• 1. 引言20-22
• 2. 材料與方法22-40
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料22-29
• 2.2 實(shí)驗(yàn)步驟和方法29-40
• 3. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果40-52
• 3.1 IL6缺失減緩DDB1陽性肝細(xì)胞的再生和肝內(nèi)細(xì)胞的增殖40-41
• 3.2 IL6促進(jìn)卵圓細(xì)胞的活化41-43
• 3.3 IL6調(diào)控促進(jìn)卵圓細(xì)胞活化的基因的表達(dá)43-44
• 3.4 在DDB1~(F/F),Mxl-Cre~(+/-)小鼠肝再生過程中IL6的表達(dá)量上升44
• 3.5 IL6不影響70%肝切除后的肝細(xì)胞進(jìn)入細(xì)胞周期44-46
• 3.6 TNFR1缺失不影響DDB1陽性肝細(xì)胞的再生46-50
• 3.7 TNFR1介導(dǎo)的信號通路促進(jìn)70%肝切除后的肝細(xì)胞進(jìn)入細(xì)胞周期50-52
• 4. 討論52-55
• 第二部分55-91
• 1. 引言55-57
• 2. 材料與方法57-66
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料57-64
• 2.2 實(shí)驗(yàn)步驟和方法64-66
• 3. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果66-86
• 4. 討論86-91
• 參考文獻(xiàn)91-102
• 作者簡介及在讀期間所取得的科研成果102

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